HG/T 4207-2011
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标准简介
HG/T 4207-2011.Examination of heterotrophic bacteria in industrial circulating cooling water- standard of plate count.
1范围
HG/T 4207规定了工业循环冷却水异养菌菌数的测定方法。
HG/T 4207适用于工业循环冷却水中异养菌菌数的测定,也适用于原水、生活用水及其他水中异养菌菌数的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备(neq GB/T 603-002，ISO 6353-1:1982)
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(mod GB/T 6682-2008 ,ISO 3696 : 1987)
3方法提要
本方法采用平皿计数法,将待测水样用10倍稀释法稀释至需要的稀释度,用移液管将不同稀释度试样1mL分别接种到无菌培养皿中,将冷却至(45士1)°C灭菌后的培养基10mL~15mL灌人培养皿内,混合均匀。待固化后置于(29士1)°C生化培养箱中培养72h,培养期满后按照计数方法进行计数。
4试剂和材料
4.1牛肉膏(生物试剂)。
4.2蛋白胨(生物试剂)。
4.3琼脂(生 物试剂)。
4.4氢氧化钠溶液(40g/L)。
4.5乙 醇溶液[75%(体积分数)]。
4.6氯化钠。
4.7牛皮纸。
4.8医用脱脂棉。
4.9医用脱脂纱布。
4.10硫代硫酸钠。
1范围
HG/T 4207规定了工业循环冷却水异养菌菌数的测定方法。
HG/T 4207适用于工业循环冷却水中异养菌菌数的测定,也适用于原水、生活用水及其他水中异养菌菌数的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备(neq GB/T 603-002，ISO 6353-1:1982)
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(mod GB/T 6682-2008 ,ISO 3696 : 1987)
3方法提要
本方法采用平皿计数法,将待测水样用10倍稀释法稀释至需要的稀释度,用移液管将不同稀释度试样1mL分别接种到无菌培养皿中,将冷却至(45士1)°C灭菌后的培养基10mL~15mL灌人培养皿内,混合均匀。待固化后置于(29士1)°C生化培养箱中培养72h,培养期满后按照计数方法进行计数。
4试剂和材料
4.1牛肉膏(生物试剂)。
4.2蛋白胨(生物试剂)。
4.3琼脂(生 物试剂)。
4.4氢氧化钠溶液(40g/L)。
4.5乙 醇溶液[75%(体积分数)]。
4.6氯化钠。
4.7牛皮纸。
4.8医用脱脂棉。
4.9医用脱脂纱布。
4.10硫代硫酸钠。
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标准内容
ICS 13. 060. 70
备案号：34608—2012
中华人民共和国化广行业标准免费标准bzxz.net
HG/T4207--2011
工业循环冷却水异养菌菌数测定平Ⅲ计数法
Examination of heterotrophic bacteria in industrial circulatingcooling water-standard of plale counu2011-12-20发布
2012-07-01实施
中华人民共和国工业和信息化部发布
本标准按照GB/T 1.1--2009给出的规期起草。本标滩由中国石油和化学下业联合会提出，HG/T4207-2011
本标准由全国化学标准化技术委员会水处理剂分技术委员会(SAC/TC63/SC5)归口。本标准由中海油天津化工研究设让院、深圳市华测检测技术股份有限公司、上海未来企业有限公司、天津正达科技存限贵任公司负责起草，本标推要起章人：张企、郭勇、刘斯、朱传俊、邵宏谦I
1范围
工业循环冷御水异养菌菌数测定本标准规定了工业循环冷却水异养菌菌数的测定方法，HG/T 4207—2011
平计数法
木标准适用于工业环冷却水中异养菌菌数的测定，也适用丁原水、生活用水及其他水中异养菌菌数的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的成用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用十本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备（neqGB/T603-—2002，ISO6353-1：1982)
GB/T6682分析实验空用水规格和试验方法（modGB/T6682--2008，ISO3696：1987）3方法提要
本力法采用平血计数法，将待测水样用10倍稀释法稀释至需要的稀释度，用移液管将不同稀释度试样1mL分别接种无菌培养通中，将冷却至（45土1）℃灭菌后的培养基10mL~15ruJ.灌入培养函内，混合均匀。得固化片置乎(29士1）℃生化培养箱巾养72h.培养期满后按照计数方法进行计数。4试剂和材料
牛肉育(生物试剂)，
蛋白膝（生物试剂）。
琼脂(生物试剂)。
氢氧化钠溶液（40g/1.)。
乙醇溶液75%（体积分数）二。
氯化钠。
牛皮纸。
医刑脱脂棉。
医用脱脂纱布。
硫代硫酸钠。
5仪器、设备
常规微生物实验设备.
5.2无齿箱（室）或超净T作台。5.3蒸汽压力灭菌锅。
5.4生化培养箱：(050)℃士1℃。5.5电热子燥箱：温度可控制布（60~280）℃士2℃。5.6被璃培养或一次性灭菌塑料培养皿：d90mm，5.7刻度吸管：1mL
5.8刻度吸管：10lL，
HG/T 4207--2011
5.9试管（做球水管用）d20mm×200mm。5.10磨口或剂瓶：1000rnL，
5.11携瓷量杯：1000mL，
5.12锥形瓶:500 mL
6实验前的准备
6.1培养基的制备
6.1.1称取下列试剂：牛肉旁3.0g，蛋白陈10.0g氯化钠5.0g，琼脂15g~20g6.1.2将上述试剂加水约95UmI,在电炉「:加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤于携瓷量杯中,用热水补充至1000 mL,用氢氧化钠溶液调节pH值至7.2-7.4,并分装在500mL锥形瓶中，每瓶分装量不超过其容积的三分之二，塞「:棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用蒸汽正力火菌锅于（1211）℃灭菌 15 uin~30 min.
注：亦间直按购买市告的营养琼脂作为培养基，6.2无菌稀释水的制备
6.2.1 生埋盐水的配制:称取8. 5g氟化钠,溶解在1000 mL水巾,混勾。6.2.2将生埋盐水分装在诚智中，每管9mL，塞上棉塞，用牛皮纸把试管口包好，用燕汽压力灭菌锅于（121±1）℃灭茵15tnin～30nin,6.3刻度吸管的灭菌
6.3.1将洗净并烘干后的吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜,长度大约10 rm~15 mm,棉花不宣在口外·多余的棉花可以用火焰烧掉。6.3.2每支刻度吸管用一条约40mm~50mm宽的牛皮纸条，以45°左右螺旋形卷起来，吸管的尖部在头部，粗端将多余的纸条折叠打结，不使散开，标上量度，若十支扎成一束，置电热干燥箱中，于（160出2)℃灭菌2 h。
6.4培养血的灭菌
将洗净并烘干届的培养而10今左有叠在·起，用牛皮纸卷成-筒，置电热干燥箱中，于（160土2）C灭菌2h.
6.5采样瓶的灭菌
将洗净并烘干后的1000 nL蘑口试剂瓶瓶口和瓶颈用宇皮纸包好，扎紧，置电热燥箱中，于（160二2）℃灭菌2h，
6.6硫代硫酸钠的灭菌
将硫代硫酸放入无菌箱（室)内.并均匀地摊在离紫外灯30cm处，灭菌30lil。7测定步骤
7.1将待测试样放入无菌箱（室)中，立即用75%（体积分数)的乙醇溶液没泡的医用脱胎棉球擦乎，点燃无菌箱（室）内的酒精灯。对试样的释和接种的操作将应在无菌箱（室）内的火熔区进行7.2用 10 倍稀释法稀释试样,即用1 ml.兆菌刻度吸管啵取 rnl,待测试样洋人 9 ml无菌生理乱水管巾，充分勾，此时稀释度为10-1。7.3另取一支1mL无菌刻度吸管吸取1rnL稀释度为10-1的试样移到第二个生埋盐水管中，充分摇匀，此时稀释度为10？，依此类推，直有需要的稀释度为止。7.4将不同稀释度的试样分别接种到无菌培养血中，每个稀释度重复接种3～5个，每.Ⅲ按种1mL，接种时左于掌托住培养匪，人拇指和食指轻轻將培养皿盖提起，刻度吸管和培养皿底成45°相接，移开吸管时吸管不南再碰到培养血：接种时不置超过4S，每接种一个烯察度更换·支无菌吸管7.5将灭菌后的培养基冷却至（45士1）℃，按7.4的为法掀开培养Ⅲ盖，将培养基灌人培养血内，每血2
HIG/T 4207—2011
应灌 10 mI.~15 mI。灌Ⅲ时不要使培养基直接灌到水样上,灌血后要将融化的培养基和Ⅲ中水样彻底混合，小心勿使混合液溅到培养爬的边缘。测定：个水样从接种到血不得超过20 tnitl：7.6培养
待培养,IL中培养基固化后，倒暨平血·在生化培养箱中（29士]）℃培养72h8计数方法及报告方式
8.1选择平均菌数在30~-300之间的稀释度，立即进行计数，求得平均菌落数，并修约成两位有效数了（见表1之例1）
8.2若有两个稀释度，其尘长菌落数均在30～300之间.则视二者之比值来决定，若其比值小于2，应报告其平均数;若大于2则报告其中较小的数字(见表1之例2和例3)。8.3若所有稀释度的平菌数均大于3C,则应选择稀释度最高的培养计数，并修约成两位有效数学（见表之例4)
8.4若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则成选择稀释度最低的培养丽计数，并修约成两位有效数字(见表1 之例5)，
8.5所有稀释度均光菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数\报告之（见表1之例6）8.6若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分人于30C面另~-部分小于30时，则选择最接近30或300的培养血计数（见表1之例7）表1
9精密度
>6 500
稀释度及蔗落效
两稀释度菌
落之比
茵落总数
《个/mL)
27 100
313000
报肯方式
/(个/IL)
9.1由于微生物能以单独个休，双双成对、链状，成簇或一团团等形式存在，面且没有单独一种培养基能满足-个水样巾所有细菌的生理要求。所以，由此法所得的菌落数可能妄低于其正常存活的活细跑的数目：
9.2标准平函计数的正确度随着平行样的增加而增加，当使用五个平行而、每且加1mI.样品时测定结果的置信度为95%。
中华人民共和围
化工行业标准
工业循环冷却水异养菌菌数测定HG/T 4207-2011
平计数法
出版发行：化学工业出版社
（北京市东城区青年湖南街13号邺政综码200c11)化学工业出版社印刷厂
880mm×1230mm1/15印张学数7千孚2012年3月北京第1版第1次即刷
书号：1550251215
购书咨询：010-64518888
后服务：01064518890
网址：http://cip.com.cn
凡购买本书，如有缺损质至问题，本社销售中心负贡词换。定价：10.00元
版权所有连者必究
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HG/T4207--2011
工业循环冷却水异养菌菌数测定平Ⅲ计数法
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2012-07-01实施
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1范围
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平计数法
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2规范性引用文件
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GB/T6682分析实验空用水规格和试验方法（modGB/T6682--2008，ISO3696：1987）3方法提要
本力法采用平血计数法，将待测水样用10倍稀释法稀释至需要的稀释度，用移液管将不同稀释度试样1mL分别接种无菌培养通中，将冷却至（45土1）℃灭菌后的培养基10mL~15ruJ.灌入培养函内，混合均匀。得固化片置乎(29士1）℃生化培养箱巾养72h.培养期满后按照计数方法进行计数。4试剂和材料
牛肉育(生物试剂)，
蛋白膝（生物试剂）。
琼脂(生物试剂)。
氢氧化钠溶液（40g/1.)。
乙醇溶液75%（体积分数）二。
氯化钠。
牛皮纸。
医刑脱脂棉。
医用脱脂纱布。
硫代硫酸钠。
5仪器、设备
常规微生物实验设备.
5.2无齿箱（室）或超净T作台。5.3蒸汽压力灭菌锅。
5.4生化培养箱：(050)℃士1℃。5.5电热子燥箱：温度可控制布（60~280）℃士2℃。5.6被璃培养或一次性灭菌塑料培养皿：d90mm，5.7刻度吸管：1mL
5.8刻度吸管：10lL，
HG/T 4207--2011
5.9试管（做球水管用）d20mm×200mm。5.10磨口或剂瓶：1000rnL，
5.11携瓷量杯：1000mL，
5.12锥形瓶:500 mL
6实验前的准备
6.1培养基的制备
6.1.1称取下列试剂：牛肉旁3.0g，蛋白陈10.0g氯化钠5.0g，琼脂15g~20g6.1.2将上述试剂加水约95UmI,在电炉「:加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤于携瓷量杯中,用热水补充至1000 mL,用氢氧化钠溶液调节pH值至7.2-7.4,并分装在500mL锥形瓶中，每瓶分装量不超过其容积的三分之二，塞「:棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用蒸汽正力火菌锅于（1211）℃灭菌 15 uin~30 min.
注：亦间直按购买市告的营养琼脂作为培养基，6.2无菌稀释水的制备
6.2.1 生埋盐水的配制:称取8. 5g氟化钠,溶解在1000 mL水巾,混勾。6.2.2将生埋盐水分装在诚智中，每管9mL，塞上棉塞，用牛皮纸把试管口包好，用燕汽压力灭菌锅于（121±1）℃灭茵15tnin～30nin,6.3刻度吸管的灭菌
6.3.1将洗净并烘干后的吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜,长度大约10 rm~15 mm,棉花不宣在口外·多余的棉花可以用火焰烧掉。6.3.2每支刻度吸管用一条约40mm~50mm宽的牛皮纸条，以45°左右螺旋形卷起来，吸管的尖部在头部，粗端将多余的纸条折叠打结，不使散开，标上量度，若十支扎成一束，置电热干燥箱中，于（160出2)℃灭菌2 h。
6.4培养血的灭菌
将洗净并烘干届的培养而10今左有叠在·起，用牛皮纸卷成-筒，置电热干燥箱中，于（160土2）C灭菌2h.
6.5采样瓶的灭菌
将洗净并烘干后的1000 nL蘑口试剂瓶瓶口和瓶颈用宇皮纸包好，扎紧，置电热燥箱中，于（160二2）℃灭菌2h，
6.6硫代硫酸钠的灭菌
将硫代硫酸放入无菌箱（室)内.并均匀地摊在离紫外灯30cm处，灭菌30lil。7测定步骤
7.1将待测试样放入无菌箱（室)中，立即用75%（体积分数)的乙醇溶液没泡的医用脱胎棉球擦乎，点燃无菌箱（室）内的酒精灯。对试样的释和接种的操作将应在无菌箱（室）内的火熔区进行7.2用 10 倍稀释法稀释试样,即用1 ml.兆菌刻度吸管啵取 rnl,待测试样洋人 9 ml无菌生理乱水管巾，充分勾，此时稀释度为10-1。7.3另取一支1mL无菌刻度吸管吸取1rnL稀释度为10-1的试样移到第二个生埋盐水管中，充分摇匀，此时稀释度为10？，依此类推，直有需要的稀释度为止。7.4将不同稀释度的试样分别接种到无菌培养血中，每个稀释度重复接种3～5个，每.Ⅲ按种1mL，接种时左于掌托住培养匪，人拇指和食指轻轻將培养皿盖提起，刻度吸管和培养皿底成45°相接，移开吸管时吸管不南再碰到培养血：接种时不置超过4S，每接种一个烯察度更换·支无菌吸管7.5将灭菌后的培养基冷却至（45士1）℃，按7.4的为法掀开培养Ⅲ盖，将培养基灌人培养血内，每血2
HIG/T 4207—2011
应灌 10 mI.~15 mI。灌Ⅲ时不要使培养基直接灌到水样上,灌血后要将融化的培养基和Ⅲ中水样彻底混合，小心勿使混合液溅到培养爬的边缘。测定：个水样从接种到血不得超过20 tnitl：7.6培养
待培养,IL中培养基固化后，倒暨平血·在生化培养箱中（29士]）℃培养72h8计数方法及报告方式
8.1选择平均菌数在30~-300之间的稀释度，立即进行计数，求得平均菌落数，并修约成两位有效数了（见表1之例1）
8.2若有两个稀释度，其尘长菌落数均在30～300之间.则视二者之比值来决定，若其比值小于2，应报告其平均数;若大于2则报告其中较小的数字(见表1之例2和例3)。8.3若所有稀释度的平菌数均大于3C,则应选择稀释度最高的培养计数，并修约成两位有效数学（见表之例4)
8.4若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则成选择稀释度最低的培养丽计数，并修约成两位有效数字(见表1 之例5)，
8.5所有稀释度均光菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数\报告之（见表1之例6）8.6若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分人于30C面另~-部分小于30时，则选择最接近30或300的培养血计数（见表1之例7）表1
9精密度
>6 500
稀释度及蔗落效
两稀释度菌
落之比
茵落总数
《个/mL)
27 100
313000
报肯方式
/(个/IL)
9.1由于微生物能以单独个休，双双成对、链状，成簇或一团团等形式存在，面且没有单独一种培养基能满足-个水样巾所有细菌的生理要求。所以，由此法所得的菌落数可能妄低于其正常存活的活细跑的数目：
9.2标准平函计数的正确度随着平行样的增加而增加，当使用五个平行而、每且加1mI.样品时测定结果的置信度为95%。
中华人民共和围
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工业循环冷却水异养菌菌数测定HG/T 4207-2011
平计数法
出版发行：化学工业出版社
（北京市东城区青年湖南街13号邺政综码200c11)化学工业出版社印刷厂
880mm×1230mm1/15印张学数7千孚2012年3月北京第1版第1次即刷
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