GA/T 1160-2014.DNA extraction from drug plants-Silica method.
1范围
GA/T 1160规定了在法庭科学鉴定中采用二氧化硅法从毒品原植物(大麻.毒粟)中提取脱氧核糖核酸(DNA)的方法。
GA/T 1160适用于法庭科学鉴定中毒品原植物及其制品的DNA提取,也可用于普通植物的DNA提取。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注8期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682- -2008 分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1二氧化硅法silica method
一种以二氧化硅为固相吸附剂的基因组DNA提取方法.
4原理
十二烧基硫酸钠(sodium dodecyl sulate,SDS)是-种离子型表面活性剂,同时也是蛋白变性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚。SDS和蛋白酶K(PK)共同作用促使蛋白变性、降解,达到裂解植物细胞释放出DNA的目的。在DNA纯化上,利用在低pH值和高浓度离液盐如异硫氰酸胍(GuSCN)存在的条件下,核酸能够与二氧化硅特异性的结合,在较高温度下核酸又能被高pH值、低盐浓度溶液从二氧化硅上洗脱下来的特性,获得高质量的植物DNA.
5器材
5.1眼科剪。
5.2眼科镊。
5.3 旋涡振荡器。
5.4 高速离心机(离心力≥13 000 g)。
5.5离心管。
5.6移液器。
5.7研钵、研杵等组织研磨器具。

ICS13.310
中华人民共和国公共安全行业标准GA/T1160—2014
常见毒品原植物的DNA提取
二氧化硅法
DNA extraction from drug plants-Silica method2014-05-09发布
中华人民共和国公安部
2014-05-09实施
中华人民共和国公共安全
行业标准
常见毒品原植物的DNA提取
二氧化硅法
GA/T1160—2014
中国标准出版社出版发行
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开本880×12301/16
印张0.5字数10千字
2014年7月第一版2014年7月第一次印刷书号：155066·2-272092
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常见毒品原植物的DNA提取
二氧化硅法
GA/T1160—2014
本标准规定了在法庭科学鉴定中采用二氧化硅法从毒品原植物（大麻，馨粟）中提取脱氧核糖核酸(DNA)的方法。wwW.bzxz.Net
本标准适用于法庭科学鉴定中毒品原植物及其制品的DNA提取，也可用于普通植物的DNA提取。
规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。3分析实验室用水规格和试验方法GB/T66822008
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
二氧化硅法
silica method
一种以二氧化硅为固相吸附剂的基因组DNA提取方法。4原理
十二烷基硫酸钠（sodiumdodecylsulfate，SDS）是一种离子型表面活性剂，同时也是蛋白变性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚。SDS和蛋白酶K(PK)共同作用促使蛋白变性、降解，达到裂解植物细胞释放出DNA的目的。在DNA纯化上，利用在低pH值和高浓度离液盐如异硫氰酸胍(GuSCN)存在的条件下，核酸能够与二氧化硅特异性的结合，在较高温度下核酸又能被高pH值、低盐浓度溶液从二氧化硅上洗脱下来的特性，获得高质量的植物DNA。5器材
眼科剪。
5.2眼科镊。
旋涡振荡器。
高速离心机（离心力≥13000g）。5.4
5离心管。
移液器。
研钵、研杆等组织研磨器具。
GA/T1160--2014
5.8水浴箱、金属加热块等恒温装置。6试剂
6.1裂解液：TNE缓冲液中加人SDS至终浓度0.5%~2.0%（W/V)，pH值为8.0。6.2二氧化硅悬浮液：1mL水加入0.06g二氧化硅（纯度>99%，颗粒直径<100μm）。6.3结合液：将6.06gTris和5.84gEDTA溶于水中，使用1mol/LHCI和1mol/LNaOH调节pH值为6.5，加人591g的GuSCN溶于溶液中，再加人10mLTriton-X100，最终用水定容至1000mL。以上为推荐配制，其溶液组分的终浓度为50mmol/LTris-HCl，20mmol/LEDTA，5mol/LGuSCN，1%(V/V)Triton-X100溶液，pH值为6.5。本方法中pH值范围为4.06.8聚乙烯吡咯烷酮。
6.9蛋白酶K。
6.10二硫苏糖醇（DTT)。
除非另有规定，本方法使用分析纯及以上级别试剂，所用水为GB/T6682一2008规定的一级水。7操作步骤
7.1预先在研钵中加入约20mg聚乙烯吡咯烷酮，取植物样本放人研钵，研磨成粉末。取20mg~100mg转移至离心管中。若样本为新鲜叶片或不易研磨的植物组织，可加人液氮和石英砂进行研磨。对于大麻脂等含脂类高的样本，应先用无水乙醚进行脱脂15min后再行研磨。7.2向离心管中加人65℃预热的裂解液300μL，并加人蛋白酶K（终浓度>0.2mg/mL）和DTT（终浓度0.05mol/L~0.1mol/L)，振荡混合后置于65℃裂解0.5h~2h，期间不时振荡。裂解完毕以12000g离心5min，将上清液转移人新的离心管中。7.3向装有上清液的离心管中加人0.1U/μLRNaseA10μL，振荡混合后置于37℃孵育5min。7.4加人结合液（其量为上述7.2中获得上清液体积的3倍），再加人已充分震荡悬浮的二氧化硅悬浮液20μL~40μL，振荡后放置室温15min～30min，期间不时振荡。7.5将离心管5000g离心2min，弃上清废液。7.6加洗液1，并使二氧化硅颗粒充分重悬浮（液体中无明显凝结块），10000g以上离心20s，弃上清废液。
7.7加洗液2，并使二氧化硅颗粒充分重悬浮（液体中无明显凝结块），10000g以上离心20$，弃上清废液。重复此步骤再洗涤一次。7.810000g以上离心20s，移去痕量残留液体，打开离心管盖，室温下放置5min～15min。2
GA/T1160—2014
加30μL~100μLTE缓冲液，震荡混匀后在65℃温育5min10min，期间漩涡振荡混匀7.9
7.1012000g离心2min，将上清液转移至新的离心管中。获得的上清液置4℃冰箱内低温保存备用。
8注意事项
8.1本标准适用于植株的各个部位，其中以植株的嫩叶和根尖部位最佳。二氧化硅悬浮液配制时可参照相关文献报道采用静置沉降等方法使二氧化硅颗粒更均匀，具有更8.2
好的DNA提取效果。
8.3配制好的结合液，洗液1及二氧化硅悬浮液应在室温下避光保存。若配制好的结合液、洗液1或裂解缓冲液在使用前发现有物质析出，可将其置于56℃水浴中使析出物溶解后使用。8.4裂解液的用量可视植物样本的量而定。为提高腐败样品和大麻脂类样品的DNA提取量，可适当增加起始样本用量和并延长裂解和吸附步骤的时间。8.5在操作中弃上清废液时应尽量吸净液体，干燥二氧化硅的时间不应超过20min。8.6不应向含有异硫氰酸胍的溶液中加人酸和漂白剂；在操作含有异硫氰酸胍的溶液时应在通风橱中进行；应把含有异硫氰酸胍的废液弃于10 mol/L氢氧化钠中。GA/T1160—2014
参考文献
Nadin R,Michael H.Ancient DNA extraction from bones and teeth [JJ.NATURE PRO-[
TOCOLS,20072(7)：1756-1762
版权专有
侵权必究
书号：1550662-27209
GA/T1160-2014
打印H期：2014年8月7日F009A
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