GA/T 189-1998.Methods of qualitative and quantitative analysis for chlorpromazine and promethazine and perphenazine in case samples.
1范围
GA/T 189规定了中毒检材中氯丙嗪、异丙嗪、奋乃静的定性及定量分析方法.
GA/T 189适用于中毒案件生物检材中(中毒者的呕吐物、胃吸出液、尿液和血液以及中毒死亡者的胃内容物、胃组织、肝、肺,心、脑、肌肉等组织,血、尿等体液)氯丙嗪、异丙嗪、奋乃静的定性及定量分析方法。
2引用标准
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GA/T122--1995毒物分析名词术语
3定义
本标准采用GA/T 122的定义。
第一篇薄层色谱法(TLC法)
4原理
肝、胃及胃内容物、肾、血、尿等组织和体液中的氯丙嗪、异丙嗪、奋乃静在pH12的破性条件下用乙醚或庚烷提取、净化、浓缩、薄层色谱分离,显色后与标准品比较进行定性。
5试剂(所用试剂均为分析纯)
5.1 乙醚:取市售乙醚500 mL,用20%硫酸亚铁水液50 mL.振荡洗涤,弃去水层,再用硫酸亚铁水液洗涤,直到水层洗涤不变成黄红色为止并用1%盐酸洗1次,再用水洗2次,用无水硫酸钠脱水,保存备用。
5.2无水乙醇。
5.3庚烷。
5.4氢氧化钠
5.4.1 60%氢氧化钠水液:60 g的氢氧化钠,加适量蒸馏水溶解后,放凉,稀释至100 mL.

ICS_13.310
中华人民共和国公共安全行业标准GA/T189—1998
上海市技求蓝督情报研究所
登泥号QT994489
中毒检材中氯丙嗪、异丙嗪、奋乃静的定性及定量分析方法　
Methods of qualitative and quantitative analysis forchlorpromazine and promethazine and perphenazine in case samples1998-12-08发布
中华人民共和国公安部发布
1999-03-01实施
GA/T189—1998
本标准的编制任务由全国刑事技术标准化技术委员会下达，由公安部第二研究所负责完成。本标准的制定是建立在《盼噻嗪类药物中毒检验研究》《碱性药物在生物组织中定性定量分析研究》的课题成果基础上，进一步进行实验研究而形成。多年来经过办案实践、办班培训以及基层毒检人员验证，结果证明：本标准适用于中毒及中毒死亡者肝、血、脑、肾、肺、心、尿，胃、肠、肌肉以及胃肠内容物、呕吐物等多种组织及体液中氟丙嗪、异丙嗪和奋乃静的提取净化、定性及定量分析。本标准的主要内容为：1.适用药物分析的品种。2.检材的适用范围。3.分析方法，包括提取净化方法，TLC,UV、GC分析方法以及各方法的评价、定量计算公式等。本标准的附录A和附录B都是标准的附录。本标准由中华人民共和国公安部提出。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会归口。本标准起草单位：公安部第二研究所。本标准主要起草人：赵敬真、徐婉。中华人民共和国公共安全行业标准中毒检材中氯丙嗪、异丙嗪、奋乃静的定性及定量分析方法
Methods of qualitative and quantitative analysis forchlorpromazine and promethazine and perphenazine in case samples1范围
GA/T189—1998
本标准规定了中毒检材中氮丙嗪、异丙嗪、奋乃静的定性及定量分析方法。本标准适用于中毒案件生物检材中（中毒者的呕吐物、胃吸出液、尿液和血液以及中毒死亡者的胃内容物、胃组织、肝、肺、心、脑、肌肉等组织，血、尿等体液）氧丙嗪、异丙嗪、奋乃静的定性及定量分析方法。
2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GA/T122—1995毒物分析名词术语3定义
本标准采用GA/T122的定义。
第一篇薄层色谱法（TLC法）
4原理
肝、胃及胃内容物、肾、血、尿等组织和体液中的氯丙嗪、异丙嗪、奋乃静在pH12的碱性条件下用乙醚或庚烷提取、净化、浓缩、薄层色谱分离，显色后与标准品比较进行定性。5试剂（所用试剂均为分析纯）
5.1乙醛：取市售乙醚500mL，用20%硫酸亚铁水液50mL振荡洗涤，弃去水层，再用硫酸亚铁水液洗涤，直到水层洗涤不变成黄红色为止并用1%盐酸洗1次，再用水洗2次，用无水硫酸钠脱水，保存备用。
5.2无水乙醇。
5.3庚烷。
·5.4氢氧化钠
5.4.160%氢氧化钠水液：60g的氢氧化钠，加适量蒸馏水溶解后，放凉，稀释至100mL。5.4.220%氢氧化钠水液：20g的氢氧化钠，加少量蒸馏水溶解后，稀释至100mL。中华人民共和国公安部1998-12-08批准2
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1999-03-01实施
GA/T189-1998
5.4.310%氢氧化钠水液：用20%氢氧化钠水液按1：1比例稀释即得。5.4.41%氢氧化钠水液：1g氢氧化钠，加少量蒸馏水溶解后稀释至100mL。5.5浓盐酸
5.5.11%盐酸：标有含量为36%~38%的浓盐酸10mL，加水稀释到370mL。5.5.20.1mol/L盐酸：1份浓盐酸加11份蒸馏水稀释，然后再稀释10倍。5.60.05mol/L硫酸：2.8mL浓硫酸，倒人约500mL蒸馏水中，然后再稀释至1000mL。5.7无水硫酸钠。
5.8硅镁吸附剂（100～200目）：市售硅镁吸附剂于130℃烘箱中活化21h后，放冷加4%水混勾去活后备用。
5.920%硫酸亚铁水液：20g硫酸亚铁加水溶解后，稀至100mL（临用时新配）。5.10展开剂
5.10.1苯环己烷：二乙胺（15：75：20）。5.10.2
环己烷：二乙胺（9：1）。
5.10.3苯：乙酸乙酯：二乙胺（17.5：6：1.5）。5.10.4苯：二氧六环：浓氨水（12：7：1)。5.10.5甲醇：水（7：3）。
5.11显色剂
5.11.12：3的硫酸水液：40mL的浓硫酸倒人60mL蒸馏水中，放冷后备用。5.11.2碘化铋钾试剂
a）配方
甲液：0.85g次硝酸铋溶于10mL冰乙酸中，再加蒸馏水稀释至40mL；乙液：40%碘化钾水溶液。
临用前，取甲、乙液各5mL，加冰乙酸20mL、蒸馏水60mL，摇匀即可。b）配方二
取市售碘化钾试剂2g，加冰乙酸20mL溶解后加50mL蒸馏水稀释即可。5.12氯丙嗪、异丙嗪、奋乃静标准品5.12.110.0mg/mL氯丙嗪、异丙嗪、奋乃静单一标准乙醇储备液精确称取盐酸氯丙嗪111mg、盐酸异丙嗪113mg、盐酸奋乃静110mg，分别装于三只10mL棕色容量瓶中，各加无水乙醇至刻度，摇匀溶解后，避光一10℃以下冷贮（0.5a内有效）。5.12.21.0mg/mL氯丙嗪、异丙嗪、奋乃静单一标准乙醇液取上述标准储备液1mL，装于10mL棕色容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀后，避光一10℃以下冷贮（20d内有效）。
6仪器及器材
6.1紫外灯：波长254nm，366nm。6.2微量注射器：10μL、50μL、100μL。6.3层析缸：12cm×4cm×12cm，20cm×8cm×20cm。6.4玻璃喷雾瓶。
6.5薄层板：自铺硅胶GF254板，硅胶CMC板（0.25mm）或者高效薄层板。6.6浓缩装置：K·D浓缩器及温控装置。6.7恒温水浴锅（四孔或二孔）。6.8多用振荡器。
6.9离心沉淀器或离心机。
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7操作方法
7.1提取净化
7.1.1直接提取法
GA/T189-1998
7.1.1.1:尿：取尿液5~10mL于分液漏斗中，加20%氢氧化钠使呈pH值为12，用50mL、30mL乙醚提取两次，分出乙醛脱水，装于另一干净的分液漏斗中，用0.05mol/L硫酸4mLX2反提，分出酸液于50mL分液漏斗中：加20%氢氧化钠调节pH值为12，用氯仿或乙醚10mL×2提取，分出乙醛液，浓缩至干立即取出：提出物加无水甲醇50~100μL，定容供分析。7.1.1.2胃内容物：取胃内容物2~5g装于100mL具塞三角瓶中，加20%氢氧化钠水液使pH值为12，充分搅拌均匀，加乙醛（或庚烷）50mL、30mL提取，每次振荡15min，分出有机相装于100mL分液漏斗中：用1%氢氧化钠10mL洗1～2次，弃去水相，有机相用无水硫酸钠脱水于另一干净的100mL分液漏斗中，加0.05mol/L硫酸4mLX2反提，以下操作步骤同7.1.1.1。7.1.1.3肝、肾、心、肺、脑及血等：取绞碎的组织5g、血5mL，分别装于100mL具塞三角烧瓶中，加无水乙醇5mL，20%氢氧化钠0.5~1mL，充分搅勾，使试样的pH值为12，加乙醛（或庚烷）50mL、30mL提取，以下操作步骤同7.1.1.2。对于含脂肪等物质较多的样品，如脑提取的乙醛液用1%氢氧化钠洗涤时很易乳化，影响药物的提取率，这时可以用硅镁吸附剂处理后再用碱液洗涤较好。具体处理办法为：取5～7cm三角漏斗，颈部塞少许脱脂棉，放2~3g无水硫酸钠；然后再加人5g硅镁吸附剂，最上层再压上5g的无水硫酸钠，使乙醚提取液通过此漏斗柱后，再以碱液洗涤，这时方较易分层。7.1.2水解提取法
此法对肝、肾、心、肺、脑、血等组织中的药物提取率较直接提取法为高。操作方法：取绞碎的组织5~10g（血5~10mL）装于100mL具塞三角烧瓶中，加水5~10mL、浓盐酸510mL，置沸水浴中加热1h，取出放冷；用60%氢氧化钠碱化至pH值12（调碱性在冰浴中进行），加乙醛（或庚烷）50mL、30mL提取，每次振摇15min，分出乙醛提取液装于100mL分液漏斗中；用1%氢氧化钠10mL洗涤1次，蒸馏水洗涤1次，无水硫酸钠脱水，乙醚液装于另一干净的分液漏斗中：加上0.05mol/L硫酸4mL×2反提，分出酸提取液装于50mL分液漏斗中，用20%氢氧化钠调节碱性使pH值为12，用乙醛或氟仿10mLX2提取，分出乙醚液K。D浓缩至干，残渣用无水乙醇或甲醇50100uL定容，振荡1min供分析用。7.1.3碱性乙醇冷浸提取法
本法适合于高度腐败的组织检材。操作方法：取绞碎的腐败检材20～30g，加20%氢氧化钠调节碱性使pH值为12，加无水乙醇浸没检材，充分振摇，放置过夜，过滤分出乙醇液，检材残渣再用无水乙醇提取两次。乙醇提取液在水浴上挥发至干，加0.05mol/L硫酸20~30mL溶解残渣，置冰箱中冷冻0.5h后取出立即过滤，滤液再用20%氢氧化钠调节碱性，使pH值为12用乙醚30mL×2提取，分出乙醚液，无水硫酸钠脱水，乙醛提取液K·D浓缩至干，加无水乙醇或甲醇100～200μL定容，摇匀后供检验用。7.1.4对照样品的制备
无论采用哪一种方法处理检材，一定要同时进行对照实验。其对照样品的制备为：取与检材相对应的空白组织或体液（一般采用空白肝或空白血）等量2份，1份加任一种单一标准品（氯丙嗪、异丙嗪或奋乃静）100μg，作为阳性对照；另1份作为阴性对照，然后与检材同时提取净化后得无水乙醇或甲醇溶液供对照用。
7.2薄层层析法
7.2.1薄层板
自制的硅胶GF254薄层板，薄层厚度0.25~0.30mm；查标准上建标网wwwiz321.net
GA/T189-1998
自制的硅胶CMC薄层板，薄层厚度0.25~0.30mm；市售高效硅胶GF254薄层板。
7.2.2点样
在薄层板的下端1～1.5cm处，用微量注射器或玻璃毛细管点试样的甲醇或乙醇液10～20μL，同时分别点上氛丙嗪、异丙嗪、奋乃静标准品1～3，各点间距1cm左右。7.2.3展开
将点好的薄层板放人已饱和好的展开缸中，展开10cm左右，取出，挥去溶剂，展开剂见5.10。7.2.4显色
将展开好的薄层板首先置于UV254灯下照射，观察斑点，记下斑点位置；然后再用显色剂喷雾或浸板，即出现不同颜色斑点，与标准品比对。显色剂见5.11。显色结果：碘化铋钾显色剂，各药物均显橙色斑点；硫酸显色剂，各药物显洋红色斑点。用硫酸显色时，氛丙嗪、异丙嗪药物的代谢物亚砜显色较慢，一般30min左右才显红点，天气潮湿时显色更慢。如放在太阳光下或UV254灯下照射2～3min，洋红色斑点很快就会出现。7.3氮丙嗪、异丙嗪及奋乃静亚砜的制备及还原噻嗪类药物进人生物体内经代谢产生代谢物，如服用氛丙嗪中毒或死亡者，从尿中排出有原体药物及其代谢物亚砜，服异丙嗪后，从尿中排出的几乎全部是代谢物异丙嗪亚砜。用氧化法可以成功地制备氯丙嗪和异丙嗪的亚矾标准物质，为检验其代谢物创造了有利的条件。7.3.1在薄层板上制备氛丙嗪、异丙嗪或奋乃静亚砜7.3.1.1特殊试剂及器材
硝酸溶液：浓硝酸：水(1：3)或（1：1)；吹风机（理发用的)；
玻璃干燥器：内放吸潮剂吸水硅胶或无水氮化钙等。7.3.1.2制作方法
在薄层板的下端1~~1.5cm处点上氛丙嗪、异丙嗪或奋乃静5～10μg，待溶剂挥干后，用毛细管点加硝酸溶液（1：3），斑点变红色：用吹风机将硝酸水分吹于，红色立即退去，再点硝酸，红色出现立即退去为止；然后放人干燥器内干燥（约需30min）。取出的薄板，在起点线其他位置，分别点上新配和陈旧的氯丙嗪、异丙嗪药物标准，展开后，用40%硫酸显色，紫外灯下照射2～3min，即显氯丙嗪：异丙嗪原药及亚砜的斑点，展开剂见5.10。结果：加硝酸氧化的药物亚砜位置与原药的R值有明显不同。说明：制备亚，操作要求较严，办案时需先作纯品试验，掌握要领之后再办案操作。7.3.2体内氮丙嗪、异丙嗪代谢物的检验7.3.2.1、提取净化见7.1。
7.3.2.2亚的制备见7.3.1。
8分析结果评价
8.1对照样品回收率估计
本方法采取添加100μg药物于空白组织5g或体液5mL中，经提取净化后溶解于200μL的甲醇或乙醇中，点样10L，相当于5陷。如不出现药物斑点，说明回收率不好，此时检材中未检出此类药物，不能作否定结论，应重作。
8.2定性分析必备条件
8.2.1做体内组织或体液药物的定性分析，必须使用两种以上的展开剂，检材与标准药品及空白检材进行对照分析。如检材中出现药物斑点的R，值与已知药物斑点的R值一致，显色后斑点颜色相一致，空白无干扰，可得出肯定结论。5
GA/T189-1998
如空白添加标准品的阳性对照很好，而检材的斑点不够清晰、不易判断，这时可加大检材的点样量再进行薄层分析，而作出最后结论。如检材未见班点，加大检材的点样量再进行薄层分析1次，如果仍是阴性，说明检材中不含氨丙嗪、异丙嗪或奋乃静。8.2.2办案中往往发现检材中含这几种药物的量很低，为保证办案的准确，这时可以同时提取几份试样，反提到酸液中后合并酸液，再以乙醛或氯仿提取，K。D浓缩至干，提出物用甲醇或乙醇定容后再进行薄层分析。
第二篇紫外分光光度法（UV法）9原理
氯丙嗪、异丙嗪或奋乃静中毒或中毒死亡的人体组织及体液在碱性条件下，经提取净化后得酸性溶液，置于200～390nm波长范围内测定紫外吸收特征，氛丙嗪、异丙嗪或奋乃静在此波长范围内呈现各自的特征吸收峰。根据各药物这一特性进行筛选，利用最大吸收值的波峰和最小吸收值的波谷之间的差值进行定量。
本方法适用于药物的类别筛选和单一药物的定量分析。10试剂（所用试剂均为分析纯）10.1F.P.N试剂（三氯化铁，过氮酸、硝酸试剂）配方A液：5%三氯化铁水溶液；
B液：20%过氟酸水液：20mL过氟酸溶于水中，然后加水稀释至100mL；C液：1：1硝酸水液，浓硝酸50mL和水50mL混勾即可。取A液5mL，加B液45mL，再加C液50mL混合均匀后即得F.P.N试剂，本试剂可使用0.5a。10.2其他试剂同第5章。bzxZ.net
11仪器
11.1紫外分光光度计。
11.2石英杯（1cm厚度）。
11.3其他仪器同第6章。
12操作方法
12.1吩噻嗪类特征吸收波长
见附录B(标准的附录）。
12.1.1线性范围值：氯丙嗪、异丙嗪和奋乃静药物浓度范围在012μg/mL之间呈线性。仪器型号不同，线性范围稍有变化。
12.1.2氟丙嗪、异丙嗪、奋乃静紫外光谱特征及标准曲线见附录B。12.1.3氯丙嗪、异丙嗪亚砜的紫外光谱特征见附录B。12.2提取净化方法
见7.1。
12.3筛选试验
检材经提取净化后所得到的0.05mol/L硫酸溶液移入石英比色杯中，以0.05mol/L硫酸作参比，测定紫外吸收特征；以其最大吸收波长与标准品比对而进行定性筛选，然后再以薄层法进行定性试验。12.4定量分析
适合单一药物的定量分析。
12.4.1实验样品的制备
GA/T189-1998
a）取尿5~10mL装于100mL分液漏斗中；胃内容物和绞碎的胃、脑、肾、肺、心、血各5g分别装于100mL具塞三角烧瓶中，分别加水5～10mL、浓盐酸5mL，瓶口盖上表面皿，于沸水浴上加热1～2h进行水解，放冷，用60%氢氧化钠调节pH值为12。b）取相应空白组织5g或体液5mL，共2份（一般采用肝，血，尿或胃组织）。1份根据初测检材中药物的含量值，添加1.5倍量的需定量药物，如检材初测出为20μg/g浓度氛丙嗪，则在空白组织以30μg/g浓度添加药物，即5g空白组织添加150g氯丙嗪，作为阳性对照；另1份空白组织作为阴性对照，然后空白及空白添加试样用20%氢氧化钠调节pH值为12（肝、血要加无水乙醇沉淀蛋白）。12.4.2提取净化
上述各试样加乙醚或庚烷50mL、30mL提取，每次振荡10min，分出乙醚或庚烷，用1%氢氧化钠10～20mL洗1～2次，水10mL洗1次，弃去水层（尿不用碱液和水液洗涤）。将有机相层脱水，装于另一干净的分液漏斗中，加0.05mol/L硫酸4mL、3mL反提1~2次（一般控制药物的浓度在5~12μg/mL为宜），合并酸反提液待测（如果酸液混浊，可经离心或过滤后再测）。注：如果血中药物含量较少，可取血5mL两份，提取净化后，最后反提于7mL的0.05mol/L硫酸中再进行紫外测定。
12.4.3测定紫外吸收
取1cm厚的石英杯，移人检材的0.05mol/L硫酸反提液于杯中，用空白检材提取液或0.05mol/L硫酸液作参比，测定200～350nm的吸收曲线，算出峰与谷之间的差值（如氯丙嗪则算出255nm峰和280nm谷之间的差值）。
另取1cm厚石英杯，移人空白添加标准检材提取后的硫酸反提液于杯中，以空白检材反提液或0.05mol/L硫酸作参比，测200～350nm的吸收曲线，同样算出峰与谷之间的差值。12.4.4以平行操作提取后的添加样品作为药物的标准，计算检材中药物的含量。定量计算公式：
AE检×C×V
式中：AE格
检材吸收差值；
标准品吸收差值：
C标—标准品在0.05mol/L硫酸中浓度；V检材的0.05mol/L硫酸总毫升数；M取检材重量（或体积)克数（毫升数）；X—每100g(mL)检材中含药物的毫克数。相对相差公式：
相对相差(%)=区l× 100
式中：X..X两份检材平行定量测定值：——平均值。
12.5氯丙嗪、异丙嗪和奋乃静原药及其亚砜的定量12.5.1检材的高度腐败，药物发生的代谢或降解使药物转成亚的形式存在，有时部分地转成亚砜，又有部分原药物存在，这时很难测定其含量，必须将药物全部还原成原体药物或氧化成亚矾形式再定量。如果全部转成亚矾形式，测定检材的0.05mol/L硫酸提取液紫外吸收后，可以按这类药物的亚砜标准曲线计算药物含量。
12.5.2药物原体和亚砜共存时的定量7
GA/T189-1998
检材中药物原体和亚砜形式共存时进行定量，首先把它们转成单一形式之后再进行定量，一般采用还原法或氧化法。
a）还原法：取检材的硫酸反提液5~10mL，加0.1～0.2g锌粉，在100C水浴中放置10min取出，放冷，过滤出清液再测定紫外吸收，这时测定则呈现出药物原体的紫外吸收特征。还原时，必须将检材、阳性对照、阴性对照同时操作，这样定量较准确。一般取硫酸反提液5mL装于试管中，加0.1～0.2g锌粉。本试验还原能力达90%以上。b）氧化成亚砜的方法：检材的硫酸反提液5～10mL，逐滴加F.P.N.试剂，溶液立即变为红色，直加到试液红色刚好退完为止：然后用60%氢氧化钠碱化，使pH值为12，放冷；乙醚30mL、20mL提取，乙醛提取液脱水后，用0.05mol/L硫酸再反提，然后再测定此酸液紫外吸收，此时则呈现药物亚砜形式的特征吸收。氯丙嗪以240nm峰和265nm谷的差值进行定量。将检材、阳性对照、阴性对照同时进行操作进行定量较好。12.5.3计算公式同12.4.4。
12.6混合盼噻嗪类药物的定量
检材中含有2种以上的盼噻嗪类药物时，必须经过薄层析分离成单一物质后再进行紫外定量分析。12.6.1检材的提取净化见第7章。12.6.2混合药物的分离方法：检材的硫酸反提液装于10~15mL大试管或具塞三角烧瓶中（根据酸反提液的体积而定），加锌粉0.1~0.2g（5mL酸液中0.1g锌粉比例），于100℃水浴中煮沸10min；过滤出酸液加20%氢氧化钠调节pH值为12，以乙醚或氯仿10mL×2提取，每次振摇10min分出有机相用无水硫酸钠脱水，K·D浓缩至干，定容，全部点于自制硅胶GF25薄层板上，同时点上待测药物标推。展开后，分层刮下相对应药物斑点的硅胶，分别装于三角瓶中，加1～2滴10%氢氧化钠，用乙醛20mL×2提取，分出乙醚液脱水；加0.05mol/L硫酸反提，得硫酸反提液，再分别测定紫外吸收，计算各自的含量。
展开剂见5.2.10。
13分析结果评价
13.1定性结果评价
13.1.1回收率指标
5g空白组织添加100μg单一药物的回收率在60%以上，血添加50μg的回收率在50%以上，同时作检材的紫外光谱法分析，未出现吩噻嗪类药物的紫外吸收特征，TLC法又未出现药物斑点，可以认为检材中不含该类药物。否则说明操作有误，分析结果不可靠，应重新做。13.1.2定性注意事项
a）用紫外光谱法进行定性筛选时，如检材中有吸收峰但特征不明显，或最大吸收有偏移时应考虑脏器提出的杂质干扰。消除的办法可用相应的空白组织提取液作参比，以消除干扰。b）紫外光谱法测定药物时，由于代谢物及杂质存在的影响，峰形会发生改变和偏移。因此，紫外光谱法仅作药物的预测，不能单用它的测定结果做肯定或否定的结论，必须结合TLC法或其他方法进行分析检验。
c）提取溶剂必须事先用紫外光谱法测定检验合格无杂质吸收的影响时方可使用，否则不能用。13.2定量分析结果评价
13.2.12份检材在相同条件下所得出药物含量之间相对相差不超过20%，说明该检材定量精度可靠如果超过20%，定量数据不可靠，应重新做。13.2.2如果检材中含有2种以上盼噻嗪类药物时，不能直接用UV法进行定量分析，必须先经过TLC法分离后再逐一定量，否则结果不可靠。检材中混合药物定量分析，建议用气相色谱法。8
14原理
GA/T189—1998
第三篇气相色谱法（GC法）
肝、肾、血、胃等体内组织和体液中的氯丙嗪、异丙嗪，在碱性条件下经乙醛等有机溶剂提取净化浓缩后，用带氢火焰离子化检测器（FID)和氮磷检测器（NPD)的气相色谱仪进行分析，与标准品比较进行定性，用内标法定量。
15试剂
15.1无水碳酸钠。
15.2饱和的碳酸钠水溶液。
15.3SKF525A内标物标准品，纯度99%以上。15.3.110mg/mLSKF525A内标物的储备液：精确称取SKFs25A纯品0.1g装于10mL容量瓶中，加无水乙醇溶解，然后稀释至刻度，使用期2a。15.3.21mg/mLSKF525A标准液：取10mg/mL储备液1份，加9份无水乙醇稀释摇匀，使用期1a。15.3.30.1mg/mLSKF525A标准液：取1mg/mL的标准液1份，加9份的无水乙醇稀释，摇匀，使用期0.5a。
15.4其他试剂及标准品同第5章。16仪器
16.1具有FID、NPD的气相色谐仪。16.2气相色谱数据微处理机。
16.3其他仪器同第6章。
17操作方法
17.1提取净化方法
17.1.1，直接提取法同7.1.1。
17.1.2水解提取法同7.1.2。
17.1.3碱性乙醇冷浸法同7.1.3。17.1.4试管提取法：称取绞碎的肝、胃等组织各2g，血等体液2mL装于10mL具塞刻度试管中，添加内标SKF525A20μg（0.5mg/mL标准液添40μL），血添加2μgSKF525A。试管中加饱和的碳酸钠溶液0.5mL，调节检材pH值至11，加乙醚7mLX2提取，每次振5min，涡旋1min，离心5min，分出乙醛液用1mL水洗1次，弃去水层；将乙醛装于50mL烧杯中，50℃水浴上挥发乙醛至干，立即取下烧杯，用8mL1%的盐酸分3次洗涤：过滤洗涤酸液装于10mL具塞离心试管中，小心加人无水碳酸钠0.3g，调节溶液的pH值为11左右，加1mL氯仿提取5min、离心5min；用吸管转移氮仿层与另一干燥洁净的尖底试管中，70℃挥干氯仿。残渣用40μL甲醇溶解供FID分析；残渣用200μL甲醇溶解供NPD分析。
如果是血检材，因其血药浓度很低，故只能用40μL甲醇溶解，供NPD分析。17.2气相色谱定性分析
17.2.1色谱条件（参考条件）
检测器：FID或NPD；
色谱柱：a）3%SE-30chromosorbWHP80~100目2mX2.6mm(id)的玻璃填充柱：9
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b）3%0V-17chromosorbWHP80~100目2m×2.6mm(id）的玻璃填充柱；c）5%OV-101chromosorbWHP80~100目2m×2.6mm(id）的玻璃填充柱；d）SE-30.OV-101.OV-17等熔融弹性石英毛细柱或大口径石英毛细柱：5~6℃/min=280℃(10min);
仪器条件：柱温180℃（2min）
进样温：250~280℃C
检测器温：280~300℃：
气相条件：选择仪器的最佳配比为佳；铆口珠压：400~500。
17.2.2进样
取检材甲醇提出液1～3μL以及单一药物、混合药物的标准液1～2μL注入气相色谱仪中，进样2～3次，记录RT值。
17.2.3定性分析
计算出各药物的RT的平均值，以SKF525A的RT值为1.O计算各药物的RRT值。以检材组份的RT值，RRT值与标准品比对进行定性，同时记录内标和纯品药物峰面积或峰高平均值，计算内标回收率。
17.3气相色谱定量分析
17.3.1精取检材2g，添加内标物SKF525A20μg：另取相应的空白脏器2g，添加待测药物和内标物各20μg。检材如是血，取2mL添加内标物SKFs25A2μg，空白血2mL添待测药物和内标物各2μg，分别在10mL刻度具塞试管中，混匀。以下操作见17.1.4。17.3.2色谱条件同17.2.1。
17.3.3进样方法同17.2.2。
17.3.4定量分析：检材进样1～3次，记录各自的峰面积值，分别计算出各药物及内标物的峰面积平均值；根据计算公式求出重量校正因子，再计算出药物的含量及相对相差。17.3.5定量计算公式（内标法）及相对相差计算公式：待测药物进样量(μR) X内标峰面积平构体(用空白添加的结果计算)校正因子于=
内标进样量（μg）X待测药物峰面积平均值药物含量 X(μg /g(mL) = 校正因子 杀待测药物峰面积平均值X内标添加量(μg)内标峰面积平均值X检材量(g（mL)）注：待测药物指的是需定量的鼠丙嗪、异丙嗪或奋乃静。ixXal × 100
相对相差（%）=
式中：X..X.两份检材平行定量测定值X—平均值。
18分析结果评价
18.1定性分析结果评价
18.1.1回收率指标
当空白组织2g添加20μg内标物回收率在50%以上，检材出现阳性或阴性结果均可靠。否则，检材出现阴性结果，说明操作有误应重做。18.1.2定性必备条件
a）如果仅用气相色谱法定性时，必须使用两种以上不同极性的色谱柱，或一种色谱柱和两种以上的检测器分析，它们的RT值和RRT值均一致，才可做出肯定或否定结论。如果用一种气相色谱条件定性，必需配合TLC法、GC/MS法或UV法等方法共同分析才可做出10
肯定或否定结论
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b）气相色谱法分析氯丙嗪、异丙嗪往往会出现热分解而降低药物的回收率，c）血中药物的含量较低时，FID往往受其检测器灵敏度的影响而测不出，此时不可轻易否定，必须结合其他组织、尿液的分析或者加大血样的用量，再结合TLC法分析结果进行判断。有条件者最好使用GC/NPD分析。
18.2定量分析结果评价
同一种检材取2份试样，分别测得药物的含量，2份之间药物含量的数据的相对相差小于或等于20%，说明定量精度可靠。如果超过20%，定量数据不准确，应重新做。11
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