GA/T 199-1998.Methods of qualitative and quantitative analysis for amitriptyline ,doxpin ,trimipramine ,clomipramine,imipramine in cases samples.
1范围
GA/T 199规定了三环类抗抑郁药物引起的中毒案件或事故中有关检材进行分析检验时的操作步骤、计算方法及结果评价。
GA/T 199适用于中毒者呕吐物、血、尿;中毒死亡者胃及胃内容物、肝、肾、心、肺、血、胆汁、尿等生物检材中阿米替林、多虑平、三甲丙咪嗪、氯丙眯嗪、丙眯嗪五种药物定性及定量分析。
2引用标准
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性..
GA/T 122- -1995 毒 物分析名词术语
3定义
本标准采用GA/T 122 中的定义。.
第一篇高压液相色谱法(HPLC法)
4原理
生物体液及组织、现场物证中的阿米替林、多虑平、三甲丙咪嗪、氯丙咪嗪、丙咪嗪等三环抗抑郁剂，用乙酰苯胺为内标物,并用相应空白检材添加标准品、空白检材作为阳性和阴性对照,进行平行提取操作。经用液一液提取或液一固萃取净化后,选用配有紫外(UV)或二极管矩阵(DAD)检测器的液相色谱
仪分析,以它们的RT值和RRT值比对进行定性,以其峰面积值用内标法计算含量。
5试剂(所有 试剂均为分析纯)
5.1 正已烷、异戊醇、石油醚、二乙胺、氯仿、无水乙醇。
5.2乙 腈(色谱纯)。
5.3 5 mol/L氢氧化钠及1 mol/L碳酸氢钠水溶液。
5.40.1 mol/L硫酸水溶液。

ICS13.310
中华人民共和国公共安全行业标准GA/T199—1998
上海市技术盈督情报研究所
登号QT934499
中毒检材中阿米替林、多虑平、三甲丙咪嗪、氯丙咪嗪、丙咪嗪的定性及定量分析方法
Methods of qualitative and quantitative analysisfor amitriptyline,doxpin,trimipramine,clomipramine,imipramine in cases samples
1998-12-08发布
中华人民共和国公安部发布
1999-03-01实施
GA/T199—1998
前·言
本标准的编制任务由全国刑事技术标准化技术委员会下达，公安部第二研究所负责完成。阿米替林、多虑平、丙咪嗪、氮丙咪嗪及三甲丙咪嗪是临床上常用的三环类抗抑郁药物（TCAs）。在法庭科学领域常发生使用该类药物投毒或自杀的案件，也有用药不当引起中毒或死亡的事件发生。对于中毒或怀疑中毒者血液、尿液、肝组织中前述五种TCAs药物的检验，公安部第二研究所于1991年和1993年分别立部级项目《体内毒品、毒物分析》及《毒物分析中固相萃取技术应用研究》进行了专门研究。研究成果已用于办案中，效果良好，已形成较成熟的分析方法，在此基础上制定出本标准。本标准的主要内容有高压液相色谱法和气相色谱法分析的原理、仪器、试剂、操作方法及结果评价。按本方法操作回收率可达60%以上，血中检出限为10ng/mL以上。本标准由中华人民共和国公安部提出。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会归口。本标准起草单位：公安部第二研究所。本标准主要起草人：李双庆、封世珍、刘耀、高利生、周恒智、何毅。1范围
中华人民共和国公共安全行业标准中毒检材中阿米替林、多虑平、三甲丙咪嗪、氯丙咪嗪、丙咪嗪的定性及定量分析方法
Methods of qualitative and quantitative analysisforamitriptyline,doxpin,trimipramine,clomipramineimipramine in cases samples
GA/T199-1998
本标准规定了三环类抗抑郁药物引起的中毒案件或事故中有关检材进行分析检验时的操作步骤、计算方法及结果评价。
本标准适用于中毒者呕吐物、血、尿；中毒死亡者胃及胃内容物、肝、肾、心、肺、血、胆汁、尿等生物检材中阿米替林、多虑平、三甲丙咪嗪、氯丙咪嗪、丙咪嗪五种药物定性及定量分析。2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GA/T122—1995毒物分析名词术语3定义
本标准采用GA/T122中的定义。
第一篇高压液相色谱法（HPLC法）4原理
生物体液及组织、现场物证中的阿米替林、多虑平、三甲丙咪嗪、氯丙咪嗪、丙咪嗪等三环抗抑郁剂，用乙酰苯胺为内标物，并用相应空白检材添加标准品，空白检材作为阳性和阴性对照，进行平行提取操作。经用液一液提取或液一固萃取净化后，选用配有紫外（UV)或二极管矩阵(DAD)检测器的液相色谱仪分析，以它们的RT值和RRT值比对进行定性，以其峰面积值用内标法计算含量。5试剂（所有试剂均为分析纯）
5.1正已烷、异戊醇、石油醛醚、二乙胺、氟仿、无水乙醇。5.2乙腈（色谱纯）。
5.35mol/L氢氧化钠及1mol/L碳酸氢钠水溶液。5.40.1mol/L硫酸水溶液。
中华人民共和国公安部1998-12-08批准查标准上建标网wwiz321.net
1999-03-01实施
5.50.01mol/L磷酸二氢钾。
5.61mol/L磷酸水溶液。
GA/T199—1998
5.7碳酸缓冲液：1mol/L碳酸氢钠水溶液用5mol/L氢氧化钠调节至pH10.5。5.8药物标准溶液
5.8.1单一药物标准溶液
分别精确称取阿米替林、多虑平、三甲丙咪嗪、氯丙咪嗪、丙咪嗪各药物纯品配制成1.00mg/mL的无水乙醇溶液，一10℃冰箱保存，使用期1a。5.8.2混合药物标准使用液
取上述5.8.1中各药物的标准液各1.0mL装于一个10mL棕色容量瓶中，加无水乙醇至刻度，得0.10mg/mL的溶液；取此溶液再稀释10倍，得0.010mg/mL的标准使用液，使用期30d。5.8.3内标物溶液
.准确称取乙酰苯胺纯品一定量，用无水乙醇配制成1.00mg/mL的标准贮备液，一10℃冰箱保存，使用期1a。取此液稀释成0.10mg/mL及0.010mg/mL的使用液，冰箱保存，使用期30d。5.8.4含内标物的混合药物使用液取前述的5.8.2及5.8.3项的0.10mg/mL使用液各1.0mL装于10mL棕色容量瓶中，加无水乙醇至刻度，得含内标物及药物浓度为0.010mg/mL的混合使用液，冰箱保存，使用期30d。6仪器
配有紫外光谱(UV)或二极管矩阵(DAD)检测器的液相色谱仪。6.2
积分仪或色谱工作站。
6.325L液相色谱进样针。
振荡器、离心机、挥干加热器或水浴锅。6.5
减压抽气泵或在线脱气机。
6.6实验室常用玻璃器材。
7操作方法
7.1定性分析
7.1.1提取与净化
7.1.1.1液一液提取净化法
取检材血1.0mL或绞碎的肝组织1.0g装于15mL具塞试管中，加内标物工作液250μL(0.010mg/mL），混勾；加0.5mLpH10.5碳酸盐缓冲液，混勾，加5mL正已烷/异戊醇（99：1，V/V）提取溶剂。振荡10min，离心3min（3000r/min）。将有机相转人10mL具塞尖底试管中，加人0.1mol/L硫酸0.1mL。振荡5min，离心3min，弃掉有机相。将酸液转人含有2mL石油醛的5mL尖底试管中，振荡3min。弃掉石油醛，酸液，备检。7.1.1.2直接提取法
取现场物证，如注射器、空瓶、药片、针头等直接用甲醇浸提，浓缩后供分析用。检材若为水溶液，调节至pH10.5后，用氯仿提取，浓缩至，用流动相定容。7.1.2仪器分析参考条件
色谱柱：HypersilODSCis不锈钢柱（5μm，100mmX4.6mm）。流动相：乙腈，0.1mol/L磷酸二氢钾（含0.01mol/L二乙胺）水溶液，磷酸调节至pH3.0(3：7)；流速，2.0mL/min。
其他参数：检测波长，210nm柱温，70℃；进样环，50μL。7.1.3检测
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GA/T199—1998
将各样品提取液、混合药物标准使用液、单一药物标准使用液、内标物标准使用液20uL注人液相色谱仪中，每个样品进样2次。分别记录各样品药物及内标物色谱峰的保留时间RT值，以内标物RT值为1计算药物的RRT值，并记录内标物标准使用液和检材样品中内标物的峰面积平均值。计算检材样品中添加内标物的回收率：检材样晶中内标物蜂面积平均售×100内标物回收率（%)=
等量内标物标准品峰面积平均值7.2：定量分析
7.2.1提取与净化
准确取检材1.0～2.0g，2份；取相应的空白检材等量2份，其中1份添加经定性后的待测药物一定量（0.5～5.0g）作为阳性对照检材，另1份作为阴性对照检材，在检材和添加检材中添加内标物0.25~5.0μg（试含量定）。以下操作同7.1.1。7.2.2分析条件同7.1.2。
7.2.3测定
取各检材和添加提取液20uμL注人液相色谱仪中，各进样2次。记录检材和添加样品中药物和内标物峰面积值。
7.2.4含量计算公式
待测药物进样量(S)α内标峰面积(用空白添加的结果计算）校正因子手
内标进样量（μg）X待测药物峰面积药物含量X(μg/g(mL))一校正因子待测药物峰面积×内标添加量(μg）内标峰面积X检材量【g(mL)）
相对相差(%)=≤=×l×100
式中：X1、X—两份检材平行定量测定的数值；x—平均值。
8结果评价
8.1定性分析结果评价
8.1.1回收率指标
当添加在检材中的内标物回收率大于50%，且空白溶剂、空白检材无干扰时，无论阳性结果或阴性结果均可靠；如回收率低于50%，阴性结果不可靠，需重做。8.1.2定性分析必备条件
阳性结果必须在两根不同极性的色谱柱上与已知药物取得一致的RT或RRT时，方为可靠。也可选择GC、TLC、GC/MS等其他方法验证分析。8.2定量分析结果评价
两份检材平行操作所测得的药物含量的相对相差小于等于20%，说明定量结果可靠，其含量按两份检材平均值计算：如相对相差大于20%，其定量结果不准确，应重新实验。第二篇气相色谱法（GC法）
9原理
生物体液及组织、现场物证中的阿米替林、多虑平、三甲丙咪嗪、氮丙咪嗪、丙咪嗪等三环抗抑郁剂，用SKF525A作内标物，并用平行提取的空白检材添加标准品，空白检材为对照，经用液一液提取或液一固萃取净化后，选用配有氮磷检测器的气相色谱仪进行分析，以它们的RT值、RRT值定性；以峰面积值3
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用内标法计算含量。
10试剂（所有试剂均为分析纯）GA/T199—1998
10.1正己烷、异戊醇、石油醚、氯仿、无水乙醇、异丙醇、甲醇。10.21mol/L氢氧化钠水溶液及饱和碳酸钠溶液。10.3GDX-403固相柱：40~60目，使用前用甲醇5mL淋洗后用水5mL淋洗，使其活化。10.4其他试剂同第5章。
10.5药物标准溶液同5.8。
11仪器与器材www.bzxz.net
11.1配有氮磷检测器(NPD)的气相色谱仪及数据处理器。11.21μL、10μL、100μL气相色谱进样针。11.3真空抽滤泵。
11.4其他仪器与器材同第6章。
12操作方法
12.1定性分析
12.1.1提取与净化
a）肝、胃、血等检材的液一液提取净化法取检材血1.0~2.0mL或绞碎的肝、胃等组织1~2g装于15mL具塞试管中，加内标物工作液100μL（0.010mg/mL），混匀；加0.5mLpH10.5碳酸盐缓冲液，混勾，加5mL正己烷/异戊醇（991）提取溶剂。振10min，离心3min。将有机相转人10mL具塞尖底试管中，加人0.1mol/L硫酸2.0mL。振荡5min，离心3min，弃掉有机相。将酸液转人含有2mL石油醚的5mL尖底试管中，振荡3min，离心3min。弃掉石油醛，在酸液中加人1mol/L氢氧化钠调节pH8.5左右，再加人pH10.5碳酸盐缓冲液0.5mL，混匀，加人1.0mL氯仿。振荡10min，离心3min，弃掉水相，氯仿液转入2mL尖底试管中，在挥干加热器（可通氮气或空气）或水浴中在50℃下挥干。残渣用50μL无水乙醇定容，供分析。b）血、尿的液一固提取净化法
取血1.0mL或尿液10mL装于15mL具塞试管中，加内标物SKF525A工作液100μL（0.010mg/mL），混匀，加pH10.5缓冲液8mL（尿液用饱和碳酸钠调节pH11左右）。检材液转人活化好的GDX-403固相小柱中，使流速为1～3mL/min，待样品液流完后用5mL水淋洗，待水液流完后抽气15min，除去柱中残留的水份。用6mL氛仿/异丙醇（8：2）洗脱，收集洗脱液装于尖底试管中（溶剂中勿带水液）。在60℃下用氮气或空气吹干，100μL甲醇定容供分析。c）胃、肝等固体检材的液一固提取净化法称取1.0g绞碎的固体检材装于15mL试管中，加内标物工作液50μL（0.10g/mL），加6mol/L盐酸1mL，水5mL，在100C下加热40min～1h冷却后过滤。滤液用20%氢氧化钠调节至pH11左右。以后操作同b)。
d）直接提取法
取现场物证，如注射器、空瓶、药片、针头等直接用甲醇浸提，浓缩后供分析用。检材若为水溶液，调节至pH10.5后，用氯仿提取，浓缩至干，无水乙醇溶解。12.1.2色谱分析条件（参考值）色谱柱：BP-10(OV-17）弹性石英毛细管柱，25m×0.22mm~0.25mm比，50：1。
12.1.3检测
GA/T.199-1998
将各样品提取液、混合药物标准使用液、单一标准使用液、内标物标准使用液分别吸取1～2L，依次注人设定好条件的气相色谱仪中，每个样品进样2次。分别记录各样品的RT值，记录内标物标准使用液和检材样品中内标物的峰面积平均值。计算各标准品、内标物、检材样品中各成分的RT平均值，并以内标物RT值为1计算其他成分的相对保留时间RRT值。
计算检材样品中添加内标物的回收率：内标物回收率（%）=
12.2定量分析
12.2.1提取与净化
检材样品中内标物峰面积平均值、X100
等量内标物标准品峰面积平均值准确取检材1.0～2.0g.2份；取相应的空白样品检材等量，2份，1份添加经定性后的待测药物一定量（1.0～5.0μg），作为阳性对照检材；另1份作阴性对照检材。各试样中添加内标物1.0~5.0μg（试含量定）。选择合适的提取净化方法进行操作，提取净化方法同12.1.1。12.2.2色谱分析条件同12.1.2。12.2.3测定
取各检材和添加提取液等试液1.0μL注人气相色谱仪中，各进样2次，记录检材和添加样品中药物和内标物峰面积值，计算各检样中药物色谱峰的峰面积平均，以内标法计算药物含量。12.2.4计算公式
校正因子 =待测药物进样量(S)X内标峰面积(（用空白添加的结果计算）
内标进样量（μg）X待测药物峰面积药物含量 X(μg/g(mL))=校正因子×待测药物峰面积×内标添加量(μg)内标峰面积X检材量g（mL)）
相对相差(%)区x×100
式中：X1.X,两份检材平行定量测定的数值：文平均值。
13结果评价
13.1定性分析结果评价
13.1.1回收率指标
当添加在检材中的内标物回收率大于50%，且空白溶剂、空白检材无干扰时，检材无论阳性结果或阴性结果均可靠；如回收率低于50%，阴性结果不可靠，需重做。13.1.2定性分析必备条件
阳性结果必须在两根不同极性的色谱柱上与已知药物取得一致的RT或RRT时，方为可靠；也可选择HPLC、TLC.GC/MS等其他方法验证分析。13.2定量分析结果评价
两份检材平行操作所测得的药物含量的相对相差小于等于20%，说明定量结果可靠，其含量按两份检材平均值计算；如相对相差大于20%，定量结果不准确，应重新实验。5
GA/T199—1998
附录A
（标准的附录）
五种三环抗抑郁剂及内标物有关谱图及数据A1五种三环抗抑郁剂及内标物HPLC分析图如图A1所示。
1—乙酰苯胺（L.S)(3.456min）；2—多虑平（4.879min）；3—丙咪嗪（8.787min）；4-阿米替林（11.412min），5一三甲丙咪嗪（12.528min）：6一氯丙咪嗪（18.446min）图Al
2五种三环抗抑郁剂及内标物GC分析图A2
如图A2所示。
GA/T1991998
1-阿米替林（6.660min）：2三甲丙味嗪（6.806min）；3—丙咪嗪（7.035min）：4—多虑平（7.308min）5—SKF525A（7.709min）6—氣丙咪嗪（9.434min）图A2
A3五种三环抗抑郁剂及内标物平均回收率及检出限如表A1所示。
添加量
液—液提取法
(HPLC法）
液液提取法
(GC法）
液—固提取法
(GC法）
检出限，ng/mL
(HPLC法）
检出限，ng/mL
(GC法）
1mL血加
1mL血加
1mL血加
中毒数值参考值
如表A2所示。
多虑平
丙咪嗪
阿米替林
三甲丙咪嗪
氮丙咪嗪
多虑平
丙咪嗪
阿米替林
氯丙咪嗪
GA/T199-1998
（小鼠口服LDso）
148~178mg/kg
一日极量200~300mg
280mg/kg
630mg/kg
GA/T199-1998
0.003~0.017
0.001~0.013
0.005-0.02
血中浓度，mg/100mL
0.05~0.15
版权专有不得翻印
书号：1550662-12610
定价：
标目379-60
中华人民共和国公共安全
行业标准
中毒检材中阿米替林、多虑平、三甲丙咪嗪、氮丙咪嗪、丙咪嗪的定性及定量分析方法
GA/T199—1998
中国标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
话：68522112
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售版权专有不得翻印
开本880×12301/16
印张3/4字数16千字
1999年7月第一版
1999年7月第一次印刷
印数1-600
书号：155066·2-12610
定价8.00元
标目379-60
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