GA/T 200-1998
基本信息
标准号： GA/T 200-1998
中文名称：中毒检材中士的宁、马钱子生物碱的定性及定量分析方法
标准类别：公共安全行业标准(GA)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
GA/T 200-1998.Methods of qualitative and quantitative analysis for strychnine , brucine in case samples.
1范围
GA/T 200规定了士的宁、马钱子碱中毒后生物检材及现场可疑物证的定性及定量分析方法。
GA/T 200适用于士的宁、马钱子碱中毒者呕吐物、胃吸出物以及中毒死亡者肝、肾、胃及胃内容物、血液、心、肺等生物检材以及现场可疑物证的药物定性及定量分析。
2引用标准
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GA/T 122-1995毒 物分析名词术语及符号
3定义
本标准采用GA/T 122中的定义。
第一篇薄层色谱法(TLC法)
4原理
检材样品中的士的宁、马钱子生物碱经液一液萃取、净化、浓缩后,将样品液点于薄层层析板上,经展开、显色后与纯品药物或添加提取的标准品比较,进行定性分析。
5试剂(所用试剂均为分析纯或化学纯)
5.1无水乙醇、 氯仿。
5.220% 氢氧化钠液、1%氢氧化钠液、1%盐酸液。
5.3硅胶GF2s薄层板(0.25~0.30mm)或HGF2s薄层板。
5.4碘化铋钾显色剂:取次硝酸铋200 mg,加碘化钾5g,加碘2g,加1 mL浓盐酸,加1 mL冰醋酸，再加水250mL溶解并混匀即得。.
5.5展开剂
系统(1):乙醚:甲醇:二乙胺=9: 1 : 1;
系统(2):苯:甲醇:二乙胺=9: 1 : 1;
系统(3):己烷:丙酮:二乙胺=5: 4↑1。
1范围
GA/T 200规定了士的宁、马钱子碱中毒后生物检材及现场可疑物证的定性及定量分析方法。
GA/T 200适用于士的宁、马钱子碱中毒者呕吐物、胃吸出物以及中毒死亡者肝、肾、胃及胃内容物、血液、心、肺等生物检材以及现场可疑物证的药物定性及定量分析。
2引用标准
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GA/T 122-1995毒 物分析名词术语及符号
3定义
本标准采用GA/T 122中的定义。
第一篇薄层色谱法(TLC法)
4原理
检材样品中的士的宁、马钱子生物碱经液一液萃取、净化、浓缩后,将样品液点于薄层层析板上,经展开、显色后与纯品药物或添加提取的标准品比较,进行定性分析。
5试剂(所用试剂均为分析纯或化学纯)
5.1无水乙醇、 氯仿。
5.220% 氢氧化钠液、1%氢氧化钠液、1%盐酸液。
5.3硅胶GF2s薄层板(0.25~0.30mm)或HGF2s薄层板。
5.4碘化铋钾显色剂:取次硝酸铋200 mg,加碘化钾5g,加碘2g,加1 mL浓盐酸,加1 mL冰醋酸，再加水250mL溶解并混匀即得。.
5.5展开剂
系统(1):乙醚:甲醇:二乙胺=9: 1 : 1;
系统(2):苯:甲醇:二乙胺=9: 1 : 1;
系统(3):己烷:丙酮:二乙胺=5: 4↑1。
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标准内容
ICS13.310
中华人民共和国公共安全行业标准GA/T 200—1998
上海市技术蓝督情报研究所
登号QT994500
中毒检材中士的宁、马钱子生物碱的定性及定量分析方法
Methods of qualitative and quantitative analysis forstrychnine,brucine in case samples1998-12-08发布
中华人民共和国公安部发布
1999-03-01实施
GA/T200—1998
本标准的编制任务由全国刑事技术标准化技术委员会下达，公安部第二研究所负责完成。士的宁，马钱子生物碱共存于番木整和吕宋豆种子内，是一种植物性生物碱。般种子中含土的宁成分约0.9%~1.9%、马钱子碱约0.7%～0.9%。在医疗上用作中枢兴奋剂，治疗弱视、瘫痰、再生障碍等疾病。毒性较大，常有人用来投毒、自杀，也有因用药不当引起中毒或死亡的事件发生。在一般情况下，番木整中毒者的体内除含有士的宁成分外，还含有一定量的马钱子碱。现场可疑物证及中毒者的血、肝、胃等有关检材中士的宁、马钱子碱的定性及定量分析，从1980年起公安部第二研究所就进行了研究实验，1993年至1995年又作为专项研究的药物之一立项。经过大量的研究实验及实际案例应用，已形成了较成熟的分析方法。在此基础上制定出本标准。本标准的附录A和附录E都是标准的附录。本标准由中华人民共和国公安部提出。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会归口。本标准起草单位：公安部第二研究所。本标准主要起草人：封世珍。
1范围
中华人民共和国公共安全行业标准中毒检材中士的宁、马钱子生物碱的定性及定量分析方法
Methods of qualitative and quantitative analysis forstrychnine,brucine in case samplesGA/T200—1998
本标准规定了士的宁、马钱子碱中毒后生物检材及现场可疑物证的定性及定量分析方法。本标准适用于士的宁、马钱子碱中毒者呕吐物、胃吸出物以及中毒死亡者肝、肾、胃及胃内容物、血液、心、肺等生物检材以及现场可疑物证的药物定性及定量分析。2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GA/T122一1995毒物分析名词术语及符号3定义
本标准采用GA/T122中的定义。
第一篇薄层色谱法（TLC法）
4、原理
检材样品中的士的宁、马钱子生物碱经液一液萃取、净化、浓缩后，将样品液点于薄层层析板上，经展开、显色后与纯品药物或添加提取的标准品比较，进行定性分析。5试剂（所用试剂均为分析纯或化学纯）5.1无水乙醇、氯仿。
5.220%氢氧化钠液、1%氢氧化钠液、1%盐酸液。5.3硅胶GF254薄层板（0.25~0.30mm）或HGF254薄层板。5.4碘化铋钾显色剂：取次硝酸铋200mg，加碘化钾5g，加碘2g，加1mL浓盐酸，加1mL冰醋酸，再加水250mL溶解并混勾即得。
5.5展开剂
系统（1)：乙醚：甲醇：二乙胺=9：1：1：系统（2）：苯：甲醇：二乙胺=9：1：1系统（3）：已烷丙酮：二乙胺=5：41。中华人民共和国公安部1998-12-08批准查标准上建标网wwwriz321.net
1999-03-01实施
5.6标准溶液
GA/T2001998
单一药物标准溶液：分别取士的宁、马钱子碱药物纯品用乙醇配成10.0mg/mL标准贮备液，使用期2a；取储备液分别稀释为1.00mg/mL.的标准使用液，使用期0.5a混合药物标准使用液：取10.0mg/mL单一药物的储备液各1.0mL，装于同一个10mL的容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀得含士的宁、马钱子碱各1.00mg/mL的混合标准使用液，冰箱保存，使用期o.5a。
6仪器与器材
6.1K·D浓缩器或其他浓缩装置。6.2电动振荡器。
6.3台式旋涡振荡器。
6.4微量注射器10μL、100μL。6.5展开缸、喷雾器。
6.6254nm紫外灯。
7操作方法
7.1提取与净化
取检材血5mL或尿10mL，胃内容物5g，绞碎的肝、胃等组织5g分别装于100mL具塞三角瓶中（尿液装于分液漏斗中）。另取2份相应的空白检材，其中1份加人混合药物标准使用液100μL（1.00mg/mL）混勾，另1份空白做阴性对照。在上述样品中加5mL无水乙醇（尿液不加）充分振荡使其沉淀蛋白，加20%氢氧化钠液约0.2mL，使其pH值为1114.用氯仿40mL、30mL振荡提取2次，每次振荡15min，分出氛仿液过滤于分液漏斗中，用1%氢氧化钠液10mL洗涤1~2次，每次振1min左右，静置彻底分层后弃去碱液。氯仿经无水硫酸钠脱水，用K.D浓缩器或在60C下吹空气流浓缩至0.2mL，备检。若检材高度腐败，应用1%盐酸液10mL×2反提氟仿液，分层后，弃去氛仿层，收集酸液调为pH11～14，再用氟仿20mL提取2次，合并氯仿液浓缩至0.2mL，备检。如检材为现场药片、茶杯、纸片等物证，用氛仿、甲醇、乙醛等溶剂浸泡、洗涤提取，直接浓缩至一定体积，备检。
7.2点样、展开、显色
距薄层板底部1~2cm，间隔1~1.5cm处用10uL微量注射器取检材、添加、空白、纯品液各5~10μL，分别置于薄层板上，选用展开剂展开。当溶剂前沿展至7～10cm左右时取出挥去溶剂，在紫外灯下观察并标出斑点位置，然后用碘化铋钾试剂显色。检材液中斑点与纯品、空白、添加比较，根据斑点颜色及R值进行定性分析。
8结果评价
8.1添加在空白检材中的士的宁、马钱子碱经显色后与纯品比较，若估量回收率在50%左右，空白无干扰，检材无论阳性、阴性结果均为可靠。如添加样品未出现斑点或回收率低于50%时，检材阴性结果不可靠，应重新实验。
8.2如检材中出现有R：值和颜色与士的宁、马钱子碱相同的斑点，而空白检材无干扰时，阳性结果才可靠。如空白有干扰，应换展开剂或用气相色谱法、色谱/质谱法验证分析。8.3用薄层层析法进行定性分析，必须选择两种以上展开剂，且斑点边缘清晰方可确认。查标准上建标网wwiz321.net
9原理
GA/T200-1998
第二篇
气相色谱法（GC法）
生物检材中的士的宁、马钱子碱药物用SKFs25A作内标物，以空白检材添加标准品和空白检材为对照，经用液一液萃取法和液一固萃取法平行提取净化后，选用配有氮磷检测器的气相色谱仪进行定性及定量分析。
10试剂与试药（所有试剂均为分析纯）10.1GDX-403固相柱：40~60目，使用前用甲醇5mL淋洗后用水5mL淋洗，使其活化。10.2pH10.5缓冲液：1mol/L的碳酸氢钠用5mol/L碳酸钠调为pH10.5。10.3碳酸钠固体试剂、饱和碳酸钠溶液。10.41mol/L盐酸、6mol/L盐酸。10.5甲醇、乙醇、氯仿、乙醛、异丙醇。10.6药物标准液：精确称取士的宁、马钱子碱、SKF525A（内标物）纯品，用乙醇配制成1.00mg/mL的标准液。临用前取此液稀释10倍，得0.100mg/mL的单一药物标准液，使用期0.5a。取1.00mg/mL的士的宁、马钱子碱各1.0mL装于同一个10mL容量瓶中，加乙醇至刻度，得士的宁，马钱子碱各.0.100mg/mL的混合药物标准液，使用期0.5a。11仪器与器材
11.1配有氮磷检测器和微处理机的气相色谱仪。11.2离心机。
11.3抽滤器。
11.4其他器材同第5章。
12操作方法
12.1定性分析操作方法
12.1.1提取与净化
12.1.1.1液一液萃取法：取检材血2mL或绞碎的胃、肝组织2g装于15mL具塞试管中，加内标物使用液50μL（0.100mg/mL），混匀：加5～6滴饱和碳酸钠溶液，调pH为11左右，用7mL乙醚提取2次，每次振5min，离心；分出乙醚液用1mL水洗涤，离心，吸出底层水液弃去；在乙醚中加1mol/L盐酸2mL反提2～5min，离心，吸出底层酸液置于另一试管中。再用2mL1mol/L盐酸反提1次，合并酸液，酸反提液用碳酸钠固体调pH为11左右。用2mL氛仿振荡提取5min，离心，吸出上层戏液弃去，底层氛仿液（勿带水份）置于另一尖底试管中，在60℃C下用空气吹干；加50μL甲醇强振溶解，供分析。12.1.1.2血、尿液固萃取法
取检材血1mL或尿液10mL装于15mL具塞试管中，加内标物使用工作液50μL（0.100mg/mL），血中加pH10.5缓冲液8mL，尿液用饱和碳酸钠调pH为11左右。检材液转人已活化的GDX-403柱中，使流速为2mL/min左右，待样品液流完后用5mL水淋洗。水液流完后用柱下抽气或柱上加压法使柱中残留水份彻底流出以干燥柱子。用6mL氣仿/异丙醇（8：2）混合溶剂洗脱，收集洗脱液于尖底试管中。如溶剂顶项部仍有残留水份，应离心后用吸管将上层水液吸出弃去。溶剂在60℃下用空气吹干，50μL甲醇溶解，供分析。12.1.1.3胃、肝等固体脏器的液一固萃取法3
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GA/T200-1998
取绞碎的胃、肝组织并称取1g装于15mL具塞试管中，加内标物使用工作液100μL（0.1mg/mL），加6mol/L盐酸1mL，水5mL，在90~100℃下加热水解40min~1h，冷后过滤，滤液用20%氢氧化钠液和饱和碳酸钠液调pH值为11左右。以下操作按血中12.1.1.2方法进行过柱、洗脱等步骤操作。
固体肝、胃检材也可以采用下列方法变为液体样品：取绞碎组织1.0g，添加内标物使用液100μL，用8mLpH6的缓冲液浸泡振荡提取1h，离心后过滤，滤液调为pH11左右。然后按12.1.1.2液一固萃取法操作。
12.1.1.4直接提取法
取现场物证，如空碗、茶杯，注射器等直接用甲醇浸泡洗涤，甲醇液浓缩后供分析。检材若为水样液体，用氯仿直接提取，分出氟仿液浓缩干后用甲醇溶解供分析。检材若为中药残渣，应先进行挑选，取出可疑的马钱子种子或植物的中药，用弱酸液温没，过滤后调PH11左右；然后用氯仿提取，挥干氮仿，甲醇溶解供分析。12.1.2气相色谱分析参考条件
条件1.0V-101毛细柱，25m×0.25mm（id）×0.32μm：柱温，240C（3min）10C/min280℃(5min）；汽化室及检测器温，280C；氮气，2mL/min，氢气和空气按仪器最佳比例。条件2：AT-1毛细柱，25m×0.25mm（id）×0.32μm柱温，240C（1min）20C/min280℃(15min）；其他同条件1。
12.1.3检测
12.1.3.1进样及记录
将各样品提取液、混合药物标准使用液，单一样品使用液各1.0μL注人色谱仪中，每个样品进样2次。记录各样品色谱峰的保留时间（RT）值，并记录内标物标准使用液和检材样品中添加内标物的峰面积平均值。
12.1.3.2计算
计算各标准品、检材样品中各成分的RT平均值，并以内标物RT为1计算其士的宁、马钱子碱的相对保留时间RRT值。www.bzxz.net
按下列公式计算检材样品中内标物的回收率：检材样品中内标物峰面积平均德×100内标物回收率（%）
12.2定量分析操作方法
12.2.1提取与净化
等量内标物标准品峰面积平均值如选用液一液萃取法，需取每种检材2.0g，各2份；如选用液一固萃取法，需取每种检材1.0g，各2份，并取相应的空白检材添加士的宁、马钱子碱一定量（2～10μg，视定性分析时初步含量定），在检材和空白检材添加标准的各试样加内标物标准液2～10μg。以下操作选用12.1.1.1或12.1.1.2或12.1.1.3提取净化的方法之一进行。12.2.2GC分析条件
同12.1.2定性分析GC条件。
12.2.3测定
12.2.3.1进样及记录
取各检材和添加检材提取液1.0μL注人色谱仪中，各进样2次。记录检材和添加样品中士的宁、马钱子碱和内标物峰面积值。
12.2.3.2计算
计算各样品峰面积平均值，按下列公式计算校正因子、药物含量、相对相差。4
GA/T200-1998
待测药物进样量(μ8)X内标物峰面积(用空白添加的结果计算）校正因子于=
内标进样量（μg)X待测药物峰面积药物含量XLμg/g(mL))=校正因子×待测药物峰面积X内标添加量(μg）内标物峰面积×检材量g（mL）
(X,-X,1、
相对相差（%)=
式中：X1、X2——两份相同检材中平行定量测定值；X—一两个检材样品定量结果平均值。13结果评价
13.1定性分析结果评价
13.1.1回收率指标
当添加在检材中的内标物SKF525A回收率大于50%，且空白检材无干扰时，无论阳性或阴性结果均为可靠。如回收率低于50%，阴性结果不可靠，需重做。13.1.2定性分析必备条件
阳性结果必须在两根不同极性的色谱柱上与已知纯品药物取得一致的RT值时方为可靠，也可选择HPLC、GC/MS、TLC等其他方法验证分析。13.2定量分析结果评价
若两份检材平行操作所测得的药物含量的相对相差小于等于20%，说明定量结果可靠，其含量按两份检材平均计算；如相对相差大于20%，其定量结果不准确，应重新实验。GA/T 200-1998
附录A
（标准的附录）
士的宁、马钱子碱GC法和TLC法分析数据A1士的宁、马钱子碱GC分析图
如图A1所示。
A：色谱条件1的GC分析图
1-SKF525A 2.06min
2一士的宁7.30min
3-马钱子11.31min
A2薄层色谱分析R.参考值
如表A1所示。
B：色谱条件2的GC分析图
1-SKFs25A 2.86min
2一士的宁7.96min
3一马钱子碱 14.69min
士的宁
马钱子
GA/T200—1998
展开剂系统
附录B
（标准的附录）
士的宁、马钱子碱中毒数据参考值(3)
B1士的宁成人致死量60~80.mg，马钱子碱中毒剂量200~300mg，猫和狗中毒量0.75mg/kg（摘于“当代结构药物全集”，王泽民主编，北京科学技术出版社，1993，～2714页）。B2士的宁血中中毒量为0.2mg/100mL，致死量0.9~1.2mg/100mL，肝组织中中毒死亡检出量为0.4mg/100g（摘于刑事技术资料”，1980年3期，~55页）。B3马钱子碱毒性为士的宁的1/8～1/30（摘于“毒物分析”，中国刑事菩察学院主编，群众出版社，1986~362页）。
GA/T200-1998
中华人民共和国公共安全
行业标准
中毒检材中士的宁、马钱子生物碱的定性及定量分析方法
GA/T200—1998
中国标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
话：68522112
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售版权专有不得翻印
开本880×12301/16
印张3/4
字数14千字
1999年7月第一版1999年7月第一次印刷印数1-600
书号：155066·2-12611
定价8.00元
标目379—61
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中华人民共和国公共安全行业标准GA/T 200—1998
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登号QT994500
中毒检材中士的宁、马钱子生物碱的定性及定量分析方法
Methods of qualitative and quantitative analysis forstrychnine,brucine in case samples1998-12-08发布
中华人民共和国公安部发布
1999-03-01实施
GA/T200—1998
本标准的编制任务由全国刑事技术标准化技术委员会下达，公安部第二研究所负责完成。士的宁，马钱子生物碱共存于番木整和吕宋豆种子内，是一种植物性生物碱。般种子中含土的宁成分约0.9%~1.9%、马钱子碱约0.7%～0.9%。在医疗上用作中枢兴奋剂，治疗弱视、瘫痰、再生障碍等疾病。毒性较大，常有人用来投毒、自杀，也有因用药不当引起中毒或死亡的事件发生。在一般情况下，番木整中毒者的体内除含有士的宁成分外，还含有一定量的马钱子碱。现场可疑物证及中毒者的血、肝、胃等有关检材中士的宁、马钱子碱的定性及定量分析，从1980年起公安部第二研究所就进行了研究实验，1993年至1995年又作为专项研究的药物之一立项。经过大量的研究实验及实际案例应用，已形成了较成熟的分析方法。在此基础上制定出本标准。本标准的附录A和附录E都是标准的附录。本标准由中华人民共和国公安部提出。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会归口。本标准起草单位：公安部第二研究所。本标准主要起草人：封世珍。
1范围
中华人民共和国公共安全行业标准中毒检材中士的宁、马钱子生物碱的定性及定量分析方法
Methods of qualitative and quantitative analysis forstrychnine,brucine in case samplesGA/T200—1998
本标准规定了士的宁、马钱子碱中毒后生物检材及现场可疑物证的定性及定量分析方法。本标准适用于士的宁、马钱子碱中毒者呕吐物、胃吸出物以及中毒死亡者肝、肾、胃及胃内容物、血液、心、肺等生物检材以及现场可疑物证的药物定性及定量分析。2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GA/T122一1995毒物分析名词术语及符号3定义
本标准采用GA/T122中的定义。
第一篇薄层色谱法（TLC法）
4、原理
检材样品中的士的宁、马钱子生物碱经液一液萃取、净化、浓缩后，将样品液点于薄层层析板上，经展开、显色后与纯品药物或添加提取的标准品比较，进行定性分析。5试剂（所用试剂均为分析纯或化学纯）5.1无水乙醇、氯仿。
5.220%氢氧化钠液、1%氢氧化钠液、1%盐酸液。5.3硅胶GF254薄层板（0.25~0.30mm）或HGF254薄层板。5.4碘化铋钾显色剂：取次硝酸铋200mg，加碘化钾5g，加碘2g，加1mL浓盐酸，加1mL冰醋酸，再加水250mL溶解并混勾即得。
5.5展开剂
系统（1)：乙醚：甲醇：二乙胺=9：1：1：系统（2）：苯：甲醇：二乙胺=9：1：1系统（3）：已烷丙酮：二乙胺=5：41。中华人民共和国公安部1998-12-08批准查标准上建标网wwwriz321.net
1999-03-01实施
5.6标准溶液
GA/T2001998
单一药物标准溶液：分别取士的宁、马钱子碱药物纯品用乙醇配成10.0mg/mL标准贮备液，使用期2a；取储备液分别稀释为1.00mg/mL.的标准使用液，使用期0.5a混合药物标准使用液：取10.0mg/mL单一药物的储备液各1.0mL，装于同一个10mL的容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀得含士的宁、马钱子碱各1.00mg/mL的混合标准使用液，冰箱保存，使用期o.5a。
6仪器与器材
6.1K·D浓缩器或其他浓缩装置。6.2电动振荡器。
6.3台式旋涡振荡器。
6.4微量注射器10μL、100μL。6.5展开缸、喷雾器。
6.6254nm紫外灯。
7操作方法
7.1提取与净化
取检材血5mL或尿10mL，胃内容物5g，绞碎的肝、胃等组织5g分别装于100mL具塞三角瓶中（尿液装于分液漏斗中）。另取2份相应的空白检材，其中1份加人混合药物标准使用液100μL（1.00mg/mL）混勾，另1份空白做阴性对照。在上述样品中加5mL无水乙醇（尿液不加）充分振荡使其沉淀蛋白，加20%氢氧化钠液约0.2mL，使其pH值为1114.用氯仿40mL、30mL振荡提取2次，每次振荡15min，分出氛仿液过滤于分液漏斗中，用1%氢氧化钠液10mL洗涤1~2次，每次振1min左右，静置彻底分层后弃去碱液。氯仿经无水硫酸钠脱水，用K.D浓缩器或在60C下吹空气流浓缩至0.2mL，备检。若检材高度腐败，应用1%盐酸液10mL×2反提氟仿液，分层后，弃去氛仿层，收集酸液调为pH11～14，再用氟仿20mL提取2次，合并氯仿液浓缩至0.2mL，备检。如检材为现场药片、茶杯、纸片等物证，用氛仿、甲醇、乙醛等溶剂浸泡、洗涤提取，直接浓缩至一定体积，备检。
7.2点样、展开、显色
距薄层板底部1~2cm，间隔1~1.5cm处用10uL微量注射器取检材、添加、空白、纯品液各5~10μL，分别置于薄层板上，选用展开剂展开。当溶剂前沿展至7～10cm左右时取出挥去溶剂，在紫外灯下观察并标出斑点位置，然后用碘化铋钾试剂显色。检材液中斑点与纯品、空白、添加比较，根据斑点颜色及R值进行定性分析。
8结果评价
8.1添加在空白检材中的士的宁、马钱子碱经显色后与纯品比较，若估量回收率在50%左右，空白无干扰，检材无论阳性、阴性结果均为可靠。如添加样品未出现斑点或回收率低于50%时，检材阴性结果不可靠，应重新实验。
8.2如检材中出现有R：值和颜色与士的宁、马钱子碱相同的斑点，而空白检材无干扰时，阳性结果才可靠。如空白有干扰，应换展开剂或用气相色谱法、色谱/质谱法验证分析。8.3用薄层层析法进行定性分析，必须选择两种以上展开剂，且斑点边缘清晰方可确认。查标准上建标网wwiz321.net
9原理
GA/T200-1998
第二篇
气相色谱法（GC法）
生物检材中的士的宁、马钱子碱药物用SKFs25A作内标物，以空白检材添加标准品和空白检材为对照，经用液一液萃取法和液一固萃取法平行提取净化后，选用配有氮磷检测器的气相色谱仪进行定性及定量分析。
10试剂与试药（所有试剂均为分析纯）10.1GDX-403固相柱：40~60目，使用前用甲醇5mL淋洗后用水5mL淋洗，使其活化。10.2pH10.5缓冲液：1mol/L的碳酸氢钠用5mol/L碳酸钠调为pH10.5。10.3碳酸钠固体试剂、饱和碳酸钠溶液。10.41mol/L盐酸、6mol/L盐酸。10.5甲醇、乙醇、氯仿、乙醛、异丙醇。10.6药物标准液：精确称取士的宁、马钱子碱、SKF525A（内标物）纯品，用乙醇配制成1.00mg/mL的标准液。临用前取此液稀释10倍，得0.100mg/mL的单一药物标准液，使用期0.5a。取1.00mg/mL的士的宁、马钱子碱各1.0mL装于同一个10mL容量瓶中，加乙醇至刻度，得士的宁，马钱子碱各.0.100mg/mL的混合药物标准液，使用期0.5a。11仪器与器材
11.1配有氮磷检测器和微处理机的气相色谱仪。11.2离心机。
11.3抽滤器。
11.4其他器材同第5章。
12操作方法
12.1定性分析操作方法
12.1.1提取与净化
12.1.1.1液一液萃取法：取检材血2mL或绞碎的胃、肝组织2g装于15mL具塞试管中，加内标物使用液50μL（0.100mg/mL），混匀：加5～6滴饱和碳酸钠溶液，调pH为11左右，用7mL乙醚提取2次，每次振5min，离心；分出乙醚液用1mL水洗涤，离心，吸出底层水液弃去；在乙醚中加1mol/L盐酸2mL反提2～5min，离心，吸出底层酸液置于另一试管中。再用2mL1mol/L盐酸反提1次，合并酸液，酸反提液用碳酸钠固体调pH为11左右。用2mL氛仿振荡提取5min，离心，吸出上层戏液弃去，底层氛仿液（勿带水份）置于另一尖底试管中，在60℃C下用空气吹干；加50μL甲醇强振溶解，供分析。12.1.1.2血、尿液固萃取法
取检材血1mL或尿液10mL装于15mL具塞试管中，加内标物使用工作液50μL（0.100mg/mL），血中加pH10.5缓冲液8mL，尿液用饱和碳酸钠调pH为11左右。检材液转人已活化的GDX-403柱中，使流速为2mL/min左右，待样品液流完后用5mL水淋洗。水液流完后用柱下抽气或柱上加压法使柱中残留水份彻底流出以干燥柱子。用6mL氣仿/异丙醇（8：2）混合溶剂洗脱，收集洗脱液于尖底试管中。如溶剂顶项部仍有残留水份，应离心后用吸管将上层水液吸出弃去。溶剂在60℃下用空气吹干，50μL甲醇溶解，供分析。12.1.1.3胃、肝等固体脏器的液一固萃取法3
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取绞碎的胃、肝组织并称取1g装于15mL具塞试管中，加内标物使用工作液100μL（0.1mg/mL），加6mol/L盐酸1mL，水5mL，在90~100℃下加热水解40min~1h，冷后过滤，滤液用20%氢氧化钠液和饱和碳酸钠液调pH值为11左右。以下操作按血中12.1.1.2方法进行过柱、洗脱等步骤操作。
固体肝、胃检材也可以采用下列方法变为液体样品：取绞碎组织1.0g，添加内标物使用液100μL，用8mLpH6的缓冲液浸泡振荡提取1h，离心后过滤，滤液调为pH11左右。然后按12.1.1.2液一固萃取法操作。
12.1.1.4直接提取法
取现场物证，如空碗、茶杯，注射器等直接用甲醇浸泡洗涤，甲醇液浓缩后供分析。检材若为水样液体，用氯仿直接提取，分出氟仿液浓缩干后用甲醇溶解供分析。检材若为中药残渣，应先进行挑选，取出可疑的马钱子种子或植物的中药，用弱酸液温没，过滤后调PH11左右；然后用氯仿提取，挥干氮仿，甲醇溶解供分析。12.1.2气相色谱分析参考条件
条件1.0V-101毛细柱，25m×0.25mm（id）×0.32μm：柱温，240C（3min）10C/min280℃(5min）；汽化室及检测器温，280C；氮气，2mL/min，氢气和空气按仪器最佳比例。条件2：AT-1毛细柱，25m×0.25mm（id）×0.32μm柱温，240C（1min）20C/min280℃(15min）；其他同条件1。
12.1.3检测
12.1.3.1进样及记录
将各样品提取液、混合药物标准使用液，单一样品使用液各1.0μL注人色谱仪中，每个样品进样2次。记录各样品色谱峰的保留时间（RT）值，并记录内标物标准使用液和检材样品中添加内标物的峰面积平均值。
12.1.3.2计算
计算各标准品、检材样品中各成分的RT平均值，并以内标物RT为1计算其士的宁、马钱子碱的相对保留时间RRT值。www.bzxz.net
按下列公式计算检材样品中内标物的回收率：检材样品中内标物峰面积平均德×100内标物回收率（%）
12.2定量分析操作方法
12.2.1提取与净化
等量内标物标准品峰面积平均值如选用液一液萃取法，需取每种检材2.0g，各2份；如选用液一固萃取法，需取每种检材1.0g，各2份，并取相应的空白检材添加士的宁、马钱子碱一定量（2～10μg，视定性分析时初步含量定），在检材和空白检材添加标准的各试样加内标物标准液2～10μg。以下操作选用12.1.1.1或12.1.1.2或12.1.1.3提取净化的方法之一进行。12.2.2GC分析条件
同12.1.2定性分析GC条件。
12.2.3测定
12.2.3.1进样及记录
取各检材和添加检材提取液1.0μL注人色谱仪中，各进样2次。记录检材和添加样品中士的宁、马钱子碱和内标物峰面积值。
12.2.3.2计算
计算各样品峰面积平均值，按下列公式计算校正因子、药物含量、相对相差。4
GA/T200-1998
待测药物进样量(μ8)X内标物峰面积(用空白添加的结果计算）校正因子于=
内标进样量（μg)X待测药物峰面积药物含量XLμg/g(mL))=校正因子×待测药物峰面积X内标添加量(μg）内标物峰面积×检材量g（mL）
(X,-X,1、
相对相差（%)=
式中：X1、X2——两份相同检材中平行定量测定值；X—一两个检材样品定量结果平均值。13结果评价
13.1定性分析结果评价
13.1.1回收率指标
当添加在检材中的内标物SKF525A回收率大于50%，且空白检材无干扰时，无论阳性或阴性结果均为可靠。如回收率低于50%，阴性结果不可靠，需重做。13.1.2定性分析必备条件
阳性结果必须在两根不同极性的色谱柱上与已知纯品药物取得一致的RT值时方为可靠，也可选择HPLC、GC/MS、TLC等其他方法验证分析。13.2定量分析结果评价
若两份检材平行操作所测得的药物含量的相对相差小于等于20%，说明定量结果可靠，其含量按两份检材平均计算；如相对相差大于20%，其定量结果不准确，应重新实验。GA/T 200-1998
附录A
（标准的附录）
士的宁、马钱子碱GC法和TLC法分析数据A1士的宁、马钱子碱GC分析图
如图A1所示。
A：色谱条件1的GC分析图
1-SKF525A 2.06min
2一士的宁7.30min
3-马钱子11.31min
A2薄层色谱分析R.参考值
如表A1所示。
B：色谱条件2的GC分析图
1-SKFs25A 2.86min
2一士的宁7.96min
3一马钱子碱 14.69min
士的宁
马钱子
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展开剂系统
附录B
（标准的附录）
士的宁、马钱子碱中毒数据参考值(3)
B1士的宁成人致死量60~80.mg，马钱子碱中毒剂量200~300mg，猫和狗中毒量0.75mg/kg（摘于“当代结构药物全集”，王泽民主编，北京科学技术出版社，1993，～2714页）。B2士的宁血中中毒量为0.2mg/100mL，致死量0.9~1.2mg/100mL，肝组织中中毒死亡检出量为0.4mg/100g（摘于刑事技术资料”，1980年3期，~55页）。B3马钱子碱毒性为士的宁的1/8～1/30（摘于“毒物分析”，中国刑事菩察学院主编，群众出版社，1986~362页）。
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中华人民共和国公共安全
行业标准
中毒检材中士的宁、马钱子生物碱的定性及定量分析方法
GA/T200—1998
中国标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
话：68522112
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售版权专有不得翻印
开本880×12301/16
印张3/4
字数14千字
1999年7月第一版1999年7月第一次印刷印数1-600
书号：155066·2-12611
定价8.00元
标目379—61
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