GA/T 1318-2016.GC and GC-MS examination methods for morphine and acetylmorphine in urine in forensic science.
1范围
GA/T 1318规定了法庭科学吸毒人员尿液中吗啡和单乙酰吗啡的气相色谱(GC)和气相色谱-质谱(GC-MS)的检验方法。
GA/T 1318适用于法庭科学吸毒嫌疑人员吗啡初筛检测呈阳性的尿液或其他尿液中吗啡和单乙酰吗啡的定性和定量分析。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682- -2008分析实 验室用水规格和试验方法
GA/T 122毒物 分析名词术语
3术语和定义
GA/T 122界定的术语和定义适用于本文件。
4原理
4.1气相色谱 法(GC)原理
本方法采用在尿液检材中加人内标物,经提取、净化、浓缩或衍生化后,用气相色谱仪进行检测。经与吗啡和单乙酰吗啡标准物质或其衍生化产物对照,以保留时间(tR)或相对保留时间(RRT)作定性分析;与添加标准物质的对照样品平行提取后比较,以峰面积为依据,用内标法、外标法或标准曲线法作定量分析。
4.2 气相色谱~质谱联用法(GC-MS)原理
本方法经与吗啡和单乙酰吗啡标准物质或其衍生化产物对照,以保留时间(tR)或相对保留时间(RRT)和质谱特征碎片峰作定性分析;与添加标准物质的对照样品平行提取后比较,以峰面积为依据,用内标法、外标法或标准曲线法作定量分析.

ICS13.310
中华人民共和国公共安全行业标准GA/T1318—2016
法庭科学吸毒人员尿液中吗啡和单乙酰吗啡气相色谱和气相
色谱-质谱检验方法
GC and GC-MS examination methods for morphine and acetylmorphine inurineinforensic science
2016-07-11发布
中华人民共和国公安部
2016-07-11实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。GA/T1318—2016
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（SAC/TC179/SC1）提出并归口。
本标准起草单位：公安部物证鉴定中心、司法部司法鉴定科学技术研究所、重庆市公安局物证鉴定中心、上海市公安局刑事科学技术研究管理中心。本标准主要起草人：朱军卓先义、王俊伟、张玉荣、赵敬真、于忠山、崔巍、常靖、王绘军、张潮、张松、张忠、罗敬峰、王立春、刘耀。I
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1范围
法庭科学吸毒人员尿液中吗啡和单乙酰吗啡气相色谱和气相
色谱-质谱检验方法
GA/T1318—2016
本标准规定了法庭科学吸毒人员尿液中吗啡和单乙酰吗啡的气相色谱（GC)和气相色谱-质谱（GCMS)的检验方法。
本标准适用于法庭科学吸毒嫌疑人员吗啡初筛检测呈阳性的尿液或其他尿液中吗啡和单乙酰吗啡的定性和定量分析。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T66822008分析实验室用水规格和试验方法GA/T122毒物分析名词术语
3术语和定义
GA/T122界定的术语和定义适用于本文件。4原理
4.1气相色谱法(GC)原理
本方法采用在尿液检材中加人内标物，经提取、净化、浓缩或衍生化后，用气相色谱仪进行检测。经与吗啡和单乙酰吗啡标准物质或其衍生化产物对照，以保留时间（?）或相对保留时间（RRT）作定性分析，与添加标准物质的对照样品平行提取后比较，以峰面积为依据，用内标法，外标法或标准曲线法作定量分析。
4.2气相色谱-质谱联用法（GC-MS）原理本方法经与吗啡和单乙酰吗啡标准物质或其衍生化产物对照，以保留时间（tr）或相对保留时间（RRT）和质谱特征碎片峰作定性分析：与添加标准物质的对照样品平行提取后比较，以峰面积为依据用内标法，外标法或标准曲线法作定量分析。5试剂及材料
5.1标准物质
所用标准物质包括：
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a）盐酸海格因：
b）盐酸吗啡；
c）盐酸O°-单乙酰吗啡。
5.2试剂
除另有说明外，本标准所用试剂均为分析纯，试验用水为三级水（见GB/T6682一2008规定）：a）甲醇；
b）乙醇；
c）异丙醇；
d）正丁醇；
e）三氯甲烷：
f)吡啶：
g）环已烷；
h）氯化钾：
i）硼酸；
氢氧化钠；
k）浓盐酸。
5.3衍生化试剂
所用衍生化试剂包括：
a）丙酸酐；
b）其他合适的酰化衍生化试剂；c）其他合适的硅烷化衍生化试剂。5.4溶液
所用溶液包括：
0.1mol/L0.5mol/L，1.0mol/L2.0mol/L、6.0mol/LHCl溶液：移取相应量的浓盐酸，加a）
水稀释定容至刻度，混勾；
0.5mol/L，1.0mol/L.2.0mol/L，4.0mol/L和1o%NaOH溶液：称取相应量的氢氧化钠，加入一定量水溶解并稀释定容至刻度，混勾；pH=9.2的0.2mol/L硼酸缓冲液：c
1）A液：0.2mol/LNaOH溶液：称取氢氧化钠4.0g，加人一定量的水溶解并定容至500mL，混：
B液：0.2mol/L硼酸-氯化钾混合溶液：称取硼酸（H,BOs）12.4g和氯化钾（KCI)14.9g，2）1
加人一定量的水溶解并定容至1L，混勾；3）
分别量取A液26.70mL与B液50.00mL，混匀，即得pH=9.2的0.2mol/L确酸缓冲液：
d）标准溶液：
1）1.00mg/mL标准物质溶液：分别配制1.00mg/mL的海洛因、吗啡、单乙酰吗啡和乙基吗啡（内标）（或其他合适内标物）标准物质溶液。密封，置于冰箱中冷冻保存。保存时间6个月：
0.20mg/mL单一标准工作溶液：分别移取1.00mg/mL的海洛因、吗啡、单乙酰吗啡和乙基吗啡（内标）（或其他合适内标物）标准物质溶液2.0mL于10mL容量瓶中，加人甲醇2
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稀释至刻度，混匀。分别配制成0.20mg/mL的海洛因、吗啡、单乙酰吗啡和乙基吗啡（内标）单一标准工作溶液。密封，置于冰箱中冷冻保存。保存时间3个月；3）0.20mg/mL混合标准工作溶液：移取1.00mg/mL的海洛因，吗啡和单乙酰吗啡标准物质溶液2.0mL于同一个10mL容量瓶中，加人甲醇稀释至刻度，混勾。配制成0.20mg/ml的海洛因、吗啡、单乙酰吗啡混合标准工作溶液。密封，置于冰箱中冷冻保存。保存时间3个月。
5.5材料
所用材料包括：
a）健康人的空白尿液；
b）具盖离心管；
c）具塞玻璃试管：
d）微量注射器。
6仪器设备
所用仪器设备包括：
a）色谱数据处理系统的气相色谱仪：配火焰离子化检测器（FID)或氮磷检测器（NPD)；b）气相色谱-质谱联用仪；
涡旋振荡器；
d）离心机；
超声波清洗器；
电子天平，分度值为0.1mg#
移液器；
浓缩器；
电子恒温水浴锅。
7操作方法
7.1定性分析
7.1.1尿液中单乙酰吗啡、吗啡的直接提取7.1.1.1提取方法
移取尿样检材3.0mL于具盖离心管中，加人内标乙基吗啡标准物质900ng，加入HCl溶液调节至PH一4，混勾，加入0.5mL正丁醇洗去杂质，弃去正丁醇（用GC分析时洗去杂质，用GC-MS分析时不用洗）。加人1.0mol/LNaOH溶液调节至pH=9，加人pH=9.2的0.2mol/L硼酸缓冲液1mL，加人三氯甲烷/异丙醇（体积比为9：1）混和溶剂3mL，振荡10min，以8000r/min转速离心10min，提取有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相，在浓缩器上60℃下浓缩至干。加人丙酸酐50μL和吡啶20μL（或其他合适的衍生化试剂），于微波炉500W中衍生化3min，取出后在浓缩器上60℃下浓缩至干，残渣加人甲醇100μL定容，供仪器分析。对于毒品含量较高的检材，可不经衍生化，直接用甲醇定容，供仪器分析。当尿液中毒品含量较低时，可适当加大检材用量。
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7.1.1.2控制样品
移取空白尿液3.0mL两份，一份作为空白样品：一份添加内标乙基吗啡标准物质900ng和吗啡、单乙酰吗啡标准物质各900ng（GC-FID）或600ng（GC-NPD和GC-MS）作为检测限添加样品，按7.1.1.1平行操作。
7.1.2尿液中总吗啡的酸水解提取（不要求检测单乙酰吗啡时）7.1.2.1提取方法
移取尿样检材3.0mL于具盖离心管中，加人内标乙基吗啡标准物质900ng，加人浓盐酸0.3mL，于沸水浴中水解0.5h，冷却后加人0.5mL正丁醇洗去杂质，弃去正丁醇。加人1.0mol/LNaOH溶液调节至pH=9，加人pH=9.2的0.2mol/L硼酸缓冲液1mL，加人三氯甲烷/异丙醇（体积比为9：1）混合溶剂3mL，振荡10min，以8000r/min转速离心10min，提取有机相：重复提取一次，合并两次提取的有机相，在浓缩器上60℃下浓缩至干，其余操作同7.1.1.1。对于毒品含量较高的检材，可不经衍生化，直接用甲醇定容，供仪器分析。当尿液中毒品含量较低时，可适当加大检材用量。
7.1.2.2控制样品
移取空白尿液3.0mL两份，一份作为空白样品：一份添加内标乙基吗啡标准物质900ng和吗啡标准物质900ng（GC-FID）或600ng（GC-NPD和GC-MS）作为检测限添加样品，按7.1.2.1平行操作。7.1.3分析条件（参考条件）
7.1.3.1气相色谱仪(GC/FID、GC-NPD)分析条件以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a）色谱柱：
1）HP-1毛细色谱柱（或其他100%-聚二甲基硅氧烷等效柱），30m×0.25mm×0.25μmHP-1701毛细色谱柱（或其他14%氰丙基-86%二甲基聚硅氧烷等效柱），30m×0.25mm×2）
注：HP-1和HP-1701毛细色谐柱均为Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b）柱温：100C保持1min，以10℃/min速率升温至150℃，再以25℃/min速率升至280℃，保持10min;
进样口温度：280℃；
d）检测器温度：280C；
载气：氮气，纯度大于99.999%
柱流量：1mL/min
g）分流比：15：1；
检测器：FID或NPD：
FID检测器气体流速：空气300mL/min，氢气30mL/min，尾吹25mL/mini)
NPD检测器气体流速：空气175mL/min，氢气4.0mL/min，尾吹25mL/min7.1.3.2气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分析条件以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：4
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a）色谱柱：HP-5MS毛细色谱柱（或其他5%二苯基-95%二甲基聚硅氧烷等效柱）30mX0.25mm×0.25μm
注：HP-5MS毛细色谱柱是Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b）柱温：100C保持1min，以10℃/min速率升温至150℃，再以25℃/min速率升至280℃，保持10ming
c）溶剂延迟时间：3min；
d）进样口温度：280℃；
传输线：250C；
f）离子源温度：230℃；
g）载气：氢气，纯度大于99.999%；h）柱流量：lmL/min；
分流比20：1*
EI源电子能量：70eV；
k）质谱扫描范围：45amu450amu；扫描方式：全扫描（SCAN)或选择离子监测（SIM）；m）吗啡丙酸酐衍生物特征碎片峰：m/z=268、m/z=341，m/z=397；n）单乙酰吗啡丙酸酐衍生物特征碎片峰：m/z=268、m/z=327、m/z=383。7.1.4检测
7.1.4.1进样
分别吸取各检材提取（浓缩）衍生液、检测限添加样品和空白样品提取（浓缩）衍生液、标准物质衍生液一定量，按7.1.3色谱分析条件进样分析。7.1.4.2
记录和计算
记录各样品及标准物质平行进样2次～3次中目标物的t及峰面积值，按式（1)计算回收率：Am×W#×V=×100%
式中：
R—回收率；
A—添加样品中标准物质或内标物峰面积平均值；W-—标准物质或内标物浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）：V—添加样品的定容体积，单位为毫升（mL）；A吨—一标准物质或内标物纯品的峰面积平均值；M一添加样品中标准物质或内标物添加量，单位为微克（μg）。7.2
定量分析
7.2.1取样
+********（1)
移取尿样检材3.0mL两份；另取空白尿液3.0mL两份，添加内标乙基吗啡、吗啡和单乙酰吗啡标准物质各1500ng，混匀，作为定量添加样品。当尿液中毒品含量较低时，可适当加大检材用量。7.2.2提取净化
同7.1.1和7.1.2。
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分析条件（参考值）
同7.1.3。
7.2.4进样
分别吸取各检材提取（浓缩）衍生液、定量添加样品提取（浓缩）衍生液、标准物质衍生液各一定量，按7.1.3分析条件每个样品进样分析2次～3次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应多于6次。
7.2.5记录与计算
7.2.5.1外标法计算公式
待测样品，添加样品均取2份～3份。记录各样品平行进样2次～3次中目标物质的峰面积值，按式（2）计算含量：A样XMXV
式中：
W-.--单位质量样品中目标物质含量，单位为微克每克（μg/g）或微克每毫升（μg/mL)；A一
一样品中目标物质平均峰面积：A量一一添加样品中标准物质平均蜂面积；M—添加样品中标准物质添加量，单位为微克（μg）；M一
样品量，单位为克（g）或毫升（mL）；V
添加样品的定容体积，单位为毫升（mL）：V#——样品的定容体积，单位为毫升（mL）。7.2.5.2
内标法计算公式
记录各样品目标物及内标物峰面积平均值，按式（3）和式（4）计算校正因子和含量：M标XA内
M肉XA标
式中：
于—校正因子；
M标—目标物添加量，单位为微克（μg）；A内—内标物添加峰面积：
M两——内标物添加量，单位为微克（μg）；A
一自目标物添加峰面积。
式中：
W=fXA#×M#×Vm
单位质量样品中目标物质含量，单位为微克每克（μg/g）或微克每毫升（μg/mL）；一校正因子；
样品中目标物质平均峰面积；
一添加样品中标准物质平均峰面积；M—一添加样品中标准物质添加量，单位为微克（ug）；M一样品量，单位为克（g）或毫升（mL）6
（2）
（3）
-（4）
V一添加样品的定容体积，单位为毫升（mL）：V样品的定容体积，单位为毫升（mL）。7.2.5.3相对相差计算公式
记录2份平行操作的样品含量，按式（5)计算相对相差：1X,-X1
式中：
相对相差（%）：
X1、X2—两个样品平行定量测定的含量数值；x
一两个样品平行定量测定含量的平均值。8分析结果评价
8.1定性结果评价
8.1.1阴性结果评价下载标准就来标准下载网
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（5）
如果案件样品中未出现与吗啡、单乙酰吗啡标准物质t相同的色谱峰，且吗啡、单乙酰吗啡添加样品的回收率大于或等于60%，则阴性结果可靠。如果吗啡、单乙酰吗啡添加样品中未出现与吗啡、单乙酰吗啡标准物质t相同的色谱峰或回收率小于60%，则阴性结果不可靠。应按7.1重新提取检验。8.1.2阳性结果评价
如果案件样品中出现与吗啡，单乙酰吗啡标准物质相同的色谱峰，且质谱特征离子碎片及相对丰度一致，空白样品无干扰，则阳性结果可靠。相关图谱参见附录A。如果空白样品中出现与吗啡、单乙酰吗啡标准物质t相同的色谱峰，且质谱特征离子碎片及相对丰度一致，则阳性结果不可靠。应按7.1重新提取检验。8.2定量结果评价
如果案件样品中目标物含量的RD小于或等于20%，定量数据可靠，其含量按2份案件样品的平均值计算。如果样品中目标物含量的RD大于20%，定量数据不可靠，应按7.2重新提取检验。GA/T1318—2016
附录A
（资料性附录）
尿液中啡，单乙酰吗啡的GC和GC-MS分析方法蓉考数据A.1海洛因和吗啡的代谢
海洛因和吗啡具有中枢神经系统抑制和兴奋作用，其大量溢用后，产生药物依赖，并出现强烈的戒断症状。尿样是甄别吸食海格因和吗啡的最佳检材。因海洛因滥用者尿中无原体存在，仅含有高浓度的吗啡和少量的单乙酰吗啡，所以对吸食海洛因、吗啡毒品的嫌疑人员，主要检测其尿样中是否含有吗啡。为了证明吸食海洛因，必要时可检测单乙酰吗啡的存在。尿中排出的吗啡大多以葡醛酸武的形式存在。
A.2吸毒人员尿液中吗啡初筛检测产品标称的阀值吗啡：300ng/mL（尿）。
A.3吗啡、单乙酰吗啡丙酸酐衍生物的GC-NPD或GC-FID分析保留时间、检出限及图谱吗啡、单乙酰吗啡丙酸酐衍生物的GC-NPD或GC-FID分析保留时间、检出限及图谱如表A.1和图A.1所示。
表A.1吗啡、单乙酰吗啡丙酸酐衍生物的GC-NPD或GC-FID分析保留时间和检出限名称
吗啡丙酸酐衍生物
单乙酰吗啡丙酸酐衍生物
285.00(1.00)
保留时间
GC-NPD检测限
GC-FID检出限
吗啡丙酸酐衍生物
图A.1吗啡丙酸酐衍生物的GC-NPD色谱图14
回收率
大于80
大于75
采用本标准提取、衍生化和GC-NPD.GC-FID分析方法，吗啡和单乙酰吗啡的最低实际添加检出8
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