ICS13.060.99 CCSZ10 辽宁省地 DB21 方标准 DB21/T3794—2023 水质底栖动物鉴定DNA条形码法 Water Qualityldentification of MacrobenthosDNA Barcoding地方标准信息服务平台 2023-08-30发布 辽宁省市场监督管理局 发布 2023-09-30实施 地方标准信息服务平台 前 1范围 2规范性引用文件 3术语和定 4缩略语 5方法原理 6试剂和材料 7仪器和设备 8样品 9分析步骤 10结果计算 11质量保证与质量控制 12废物处理 13注意事项 附录A（资料性） 附录B（资料性） 参考文献．. 序列搜索与比对 目 次 进化树的构建与遗传距离的计算DB21/T3794—2023 II 11 地方标准信息服务平台 13 DB21/T3794—2023 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由辽宁省生态环境厅提出并归口。本文件起草单位：辽宁省生态环境监测中心。本文件主要起草人：丁振军、李杨、姜永伟、王星蒙、问青春、王秋丽、张爽、胥学鹏、张、卢雁。 本文件为首次发布 本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。归口管理部门通讯地址：辽宁省生态环境厅（辽宁省沈阳市浑南区双园路30甲），联系电话：024-62788591。 文件起草单位通讯地址：辽宁省生态环境监测中心（辽宁省沈阳市浑南区双园路30甲-3），联系电话：024-627804716 地方标准信息服务平台 II 水质底栖动物鉴定DNA条形码法 DB21/T3794—2023 警告：EB溶液具有遗传毒性，操作时应按规定要求佩戴防护器具，避免接触皮肤和衣物。1范围 本文件规定了利用DNA条形码技术鉴定底栖动物的方法。本文件适用于河流、湖泊和水库中底栖动物的鉴定。2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T30989高通量基因测序技术规程HJ710.8生物多样性观测技术导则淡水底栖大型无脊椎动物T/CSES81淡水生物监测环境DNA宏条形码法3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 底栖动物macrobenthos 指生活史的全部或至少一个时期栖息于水体底部或底部基质中的不能通过0.5mm（40目）孔径网筛的无脊椎动物。 ［来源：HJ710.8-2014，22，有修改】3.2 细胞色素c氧化酶亚基cytohromcxidasesubunit1，col后生动物线粒体基因组上的线粒体细胞电素氧化酶亚基I对应的DNA序列。[来源：T/CSES81-2023，3.7，有修改】3.3 引物primer 服 在DNA复制过程中，结合于模板链上并作为复制延伸的起始位点机/或终正位点的，具有一定长度和顺序的寡核苷酸链。 【来源：GB/T30989-2014，3.11]3.4 退火annealing 模板双链DNA经热变性、双螺旋解开成单链后，通过缓慢冷却到特定温度，使引物与该模板DNA1