ICS 65.020
CCS B05
DB22
吉林省地方标准
DB22/T 3455—2023
分蘖洋葱中洋葱黄矮病毒检测 实时荧光PCR法
Detection of onion yellow dwarf virus by real-time PCR on Shallot
2023-02-27 发布
2023-03-27 实施

前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》和GB/T 20001.4-2015《标准编写规则 第4部分：化学分析方法》的规定起草。
请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。
本文件起草单位：吉林省农业科学院。
本文件主要起草人：李小宇、张春雨、王海鹏、王永志、苏颖、李建平、张金花、杨阳、于红。

分蘖洋葱中洋葱黄矮病毒检测 实时荧光PCR法

警告：使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1 范围
本文件描述了分蘖洋葱中洋葱黄矮病毒实时荧光PCR检测方法。本文件适用于分蘖洋葱中洋葱黄矮病毒的检测。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 28067 甘蔗黄叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法

3 术语和定义
GB/T 28067界定的术语和定义适用于本文件。

4 原理
比对洋葱黄矮病毒外壳蛋白基因，设计一对仅在洋葱黄矮病毒外壳蛋白基因间保守的特异性引物。提取分蘖洋葱总RNA，在反转录酶作用下反转录成cDNA，并以其为模板，利用Taq酶进行实时荧光PCR扩增反应（采用SYBR Green I荧光染料方法）。
SYBR Green I是一种具有绿色激发波长的染料，能够与双链DNA小沟区域结合。游离状态的SYBR Green I只发出微弱的荧光，当与双链DNA结合后，荧光强度会显著增加，而且荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系。

5 试剂或材料
5.1 试剂
5.1.1 水：符合GB/T 6682-2008中一级水的要求。
5.1.2 Trizol核酸提取试剂盒。
5.1.3 反转录试剂盒。
5.1.4 实时荧光PCR试剂盒。
5.1.5 DEPC（焦碳酸二乙酯 Diethyl Pyrocarbonate）。
5.1.6 三氯甲烷。