ICS 65.020.20 B05 DB13 河北省地方标准 DB13/T 1420—2011 马铃薯晚疫病菌抗药性检测技术规程 Technological Rules for Detecting Fungicide Resistance in Phytophthora infestans on Potato 2011-07-07发布 2011-07-17实施 河北省质量技术监督局 发布 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由河北省质量技术监督局提出并归口。 本标准起草单位：河北省农林科学院植物保护研究所。 本标准主要起草人：王文桥、张小风、马志强、韩秀英、孟润杰、赵建江。 1 范围 本标准规定了马铃薯晚疫病菌抗药性检测的术语和定义及检测方法。 本标准适用于马铃薯晚疫病菌对杀菌剂的抗性检测。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1 抗药性（fungicide resistance） 当杀菌剂按标签推荐剂量使用防治作物病害时，即使重复试验仍无法达到预期防治效果，靶标病菌群体对药剂敏感性下降的遗传变化。 2.2 敏感基线（sensitivity baseline） 在同类作用方式杀菌剂使用之前，靶标病菌群体中不同菌株对药剂的敏感性（EC50值）分布曲线，通常用平均值及95%置信限表示。 2.3 敏感型（sensitivity type） 根据菌株对药剂敏感性（EC50值）或抗性水平，将菌株划分为敏感、低抗、中抗、高抗等类型。 2.4 菌丝生长速率法 将马铃薯晚疫病菌菌丝体在含药培养基平板上培养，通过菌丝生长受抑制程度进行毒力测定的方法。适用于苯基酰胺类、QoI类、羧酸酰胺类、乙酰胺类、氨基甲酸酯类、苯甲酰胺类等杀菌剂抗性检测。 2.5 叶盘漂浮法 将马铃薯晚疫病菌孢子囊接触漂浮于药液上的叶盘背面，通过孢子萌发抑制程度进行毒力测定的方法，适用于具有内吸性的多类杀菌剂抗性检测。 3 测定方法 3.1 菌丝生长速率法 适用于检测马铃薯晚疫病菌对甲霜灵、精甲霜灵、烯酰吗啉、氟吗啉、嘧菌酯、吡唑醚菌酯、双炔酰菌胺、霜脲氰、霜霉威、氟吡菌胺、氰霜唑、氟啶胺、代森锰锌、百菌清及其混剂的抗性。 3.1.1 供试菌株的采集、分离及保存 田间采集感染晚疫病的马铃薯新鲜叶片，夹入洁净并吸干水分的马铃薯块茎中，标记后带回实验室，在16～18℃培养2～3天。 在无菌条件下，将块茎上霉状物接种至含100 μg/mL氨苄青霉素、20 μg/mL利福平及100 μg/mL五氯硝基苯的黑麦琼脂培养基（RA）平板上，于18～20℃培养4～5天。 将未污染菌丝转接至新RA平板培养7～10天后转入试管斜面培养，菌丝长满后于10℃保存，每3个月转接一次。 3.1.2 供试药剂的收集及保存 收集杀菌剂原药，避光、低温（0～4℃）及干燥条件保存。 3.1.3 含药培养基的制作 将原药用丙酮、二甲亚砜等溶解制成母液，再用无菌水稀释成系列浓度药液（丙酮含量低于1%）。 按药液与培养基体积比1:9加入溶化RA培养基中，混匀后制成含药平板，对照加入等量溶剂。 3.1.4 接种及培养 从培养10天的菌落边缘打取直径0.5 cm菌饼，接种于含药RA平板中央，以不含药平板为对照，每处理3次重复，18～20℃培养10天。 3.1.5 结果检查 待对照菌落直径约7 cm时，用直尺十字交叉测量菌落直径，取平均值。 3.1.6 数据统计与分析 抑制率计算公式： P = (D0 - D) / (D0 - 0.5) × 100 式中：P为抑制率（%），D0为对照菌落直径（cm），D为处理菌落直径（cm）。 采用SAS或DPS软件进行毒力回归分析，求得回归方程及EC50值。 3.1.7 敏感基线（EC50）的建立 从未使用相关药剂及同类作用机制药剂地区采集约100株菌株，测定其敏感性并建立基线。