DB65/T4073—2017 新疆维吾尔自治区地方标准 成年绵羊体外胚胎生产技术操作规程 Technical operation procedures for in vitro embryo production of adult sheep ICS 65.020.30 B43 2017-11-10发布 2017-12-10实施 新疆维吾尔自治区质量技术监督局 发布 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的要求制定。 本标准由新疆维吾尔自治区畜牧厅提出并归口。 本标准起草单位：新疆畜牧科学院生物技术研究所（新疆畜牧科学院中国-澳大利亚绵羊育种研究中心）、新疆维吾尔自治区畜牧总站、新疆华牛天俊种畜繁育工程有限公司。 本标准起草人：汪立芹、耿娟、林嘉鹏、吴阳升、卢全晟、卫新璞、韩冰、阿米娜·阿布都瓦力、唐森、张建光、牛志刚、黄俊成。 1 范围 本标准规定了供体绵羊的选择与饲养管理、激素处理、手术法活体采卵、屠宰后摘取卵巢采卵、体外受精及体外培养的技术操作规程。 本标准适用于供体绵羊体外胚胎生产技术操作。 2 规范性引用文件 GB/T 5458 液氮生物容器 NY/T 1571 羊胚胎移植技术规程 3 术语和定义 3.1 供体（donor）：可用于胚胎生产的绵羊。 3.2 绵羊体外胚胎生产（in vitro embryo production）：指对母体进行激素处理，通过活体采卵或屠宰场摘取卵巢采集卵母细胞，在体外条件下进行卵母细胞成熟培养、体外受精及体外培养，获得可用胚胎，并将胚胎移植至同期发情受体或进行冷冻保存的过程。 4 供体绵羊的选择与饲养管理 4.1 选择条件 按照NY/T 1571对供体羊进行选择，并符合以下要求： （1）品种优良，符合品种外貌特征，谱系清楚，一级以上； （2）1.5～6周岁； （3）产后空怀90 d以上，至少有2次以上正常发情周期； （4）体质健壮，繁殖机能正常，无遗传疾病、生殖系统疾病及传染性疫病。 4.2 饲养管理 （1）保持饲养环境卫生，温湿度适宜，减少应激反应； （2）制定合理日粮配方； （3）饮水清洁卫生； （4）激素处理前2个月加强饲养管理，并适量补充维生素A、维生素D、维生素E。 5 供体绵羊激素处理 5.1 药品 所需药品见附录A。 5.2 激素处理方法 将海绵栓或CIDR（含孕激素阴道栓）置入作为发情周期第0天，第9天开始注射FSH，每日早晚各1次，间隔约12h，连续3d递减注射。第6次注射后间隔12h进行卵母细胞回收并取出海绵栓（见附录B）。 6 手术法活体采卵与屠宰后摘取卵巢采卵 6.1 手术法活体采卵 手术部位位于乳房前端约2cm处腹中线左右约6cm位置，操作如下： （1）手术前空腹24h，禁饮禁食； （2）肌肉注射静松灵0.3mL～0.5mL进行麻醉并仰卧固定； （3）刮除手术部位羊毛并清洗； （4）2%～4%碘伏消毒并停留5min，再用75%酒精脱碘； （5）避开血管纵向切开3mm～5mm切口，分离组织至腹腔； （6）触摸并引出子宫及卵巢； （7）使用10mL注射器抽取卵泡液约6mL并置于37℃水浴； （8）在体视显微镜下收集卵母细胞。 6.2 屠宰后摘取卵巢采卵 （1）FSH第6次注射后12h屠宰采集； （2）生理盐水（37℃）中加入青霉素、链霉素并预热保存； （3）1h内取出卵巢并置保温容器运输； （4）实验室内去除结缔组织并清洗； （5）38℃生理盐水清洗3次并浸泡； （6）用注射器抽吸卵泡液获取卵母细胞。