本标准规定了蛋白质的测定方法。本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中蛋白质的测定。 GB/T 5413.1-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 蛋白质的测定 GB/T5413.1-1997 标准下载解压密码：www.bzxz.net

GB/T5413.1—1997
本标准仅对GB5413一85中A.3章“半微量凯氏定氮法”的文本格式进行了修改，内容未做改动。本系列标准从实施之日起，代替GB5413—85。本标准由中国轻工总会提出。
本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位：国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位：卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢（中国）投资服务有限公司。本标准主要起草人，王芸、黄敏、李玉贤。221
中华人民共和国国家标准
婴幼儿配方食品和乳粉
蛋白质的测定
Milk powder and formula foods for infant and young children-Determination of protein
本标准规定了蛋白质的测定方法。本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中蛋白质的测定。2方法提要
GB/T 5413. 1--1997
代替GB5413--85
在加热时，硫酸分解成亚硫酸酐、水和氧。有机物被氧化为二氧化碳和水，而蛋白质的氨态氮与过量硫酸反应转变为硫酸铵，硫酸铵在碱性溶液中进行蒸馏。将蒸馏出来的氨用硼酸吸收，再用酸标准溶液滴定。
3试剂
所有试剂，如未注明规格，均指分析纯，所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1浓硫酸。
3.2硫酸钾。
3.3硫酸铜。
3.4过氧化氢溶液：体积分数为30%。3.5 硼酸溶液:c(H,BO,)为 30g/L。取 30 g硼酸,溶解在 1L水中。3.6甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：用体积分数为95%的乙醇，将溴甲酚绿及甲基红分别配成1g/L的乙醇溶液，使用时按1g/L漠甲酚绿：1g/L甲基红为5：1的比例混合。3.7硫酸标准溶液：c（H+）为0.0500mol/L。取3mL浓硫酸加到15mL水中，冷却后洗入1000mL容量瓶中,定容。
3.8氢氧化钠溶液，质量比为400/1000。称取400g氢氧化钠，用1000mL水溶解，待冷却后移入试剂瓶中。
4仪器
常用实验室仪器及：
4.1凯氏烧瓶：500mL或250nL。
4.2定氮蒸汽蒸馏器。
4.3 滴定管:25mL。
4.4三角烧瓶：250mL。
国家技术监督局1997-05-28批准222
1998-09-01实施
5操作步骤
5.1样品的制备
GB/T 5413.1-1997
将样品全部移入约两倍于样品体积的洁净干燥容器中，立即盖紧容器，反复旋转振荡，使样品彻底混合均匀。
5.2测定
5.2.1称取样品2g，精确至0.2mg，放入凯氏烧瓶（4.1）中，入10g硫酸钾（3.2）和1g硫酸铜（3.3），量取20mL浓硫酸（3.1），徐徐加人凯氏烧瓶中，混合。注
1加入样品及试剂时，避免粘附在瓶颈上。2加入硫酸钾的作用：提高硫酸的沸点（338℃),增进反应速度。10g硫酸钾将沸点提商到400℃,但过多的硫酸钾会造成沸点太高，生成的硫酸氢铵在513℃会分解。3加入硫酸铜的作用：作催化剂，使氧化作用加速。5.2.2凯氏烧瓶的瓶口放一小漏斗，用微火加热（小心瓶内泡沫冲出而影响结果），当瓶内发泡停止，稍加大火力。同时，可分数次加入10mL过氧化氢溶液（3.4）（但必须将烧瓶冷却数分钟以后加入）。当烧瓶内容物的颜色逐渐转化成透明的淡绿色时，继续消化0.5～1h（若凯氏烧瓶壁粘有碳化粒时，进行摇动或待瓶中内容物冷却数分钟后，用过氧化氢溶液冲下，继续消化至呈透明为止）。然后取下并使之冷却。5.2.3将澄清的消化液小心移人100mL容量瓶中，以水洗三次凯氏烧瓶，洗涤液并入上述容量瓶中，冷却后稀释至刻度并摇勾。
5.2.4吸取25mL消化液于定氮蒸馏器中，在冷凝器的下端放置一个盛有50mL硼酸溶液（3.5）、3滴甲基红-甲酚绿混合指示剂（3.6）的250mL锥形瓶，使冷凝器下端的玻璃管在液面以下。将25mL氢氧化钠溶液慢慢地加入蒸馏瓶中（溶液应呈强碱性），迅速将塞子塞好，然后通入蒸汽进行蒸馏，蒸至液面达150mL时，提出冷凝器下端的玻璃管，用蒸馏水冲洗冷凝管下端，将洗液一并聚集于翻酸溶液中，让玻璃管幕在锥形瓶的瓶壁，出液口在200mL刻度线以上，继续蒸馏，蒸至液位达200mL。注：蒸馏时要注意蒸馏情况，避免瓶中的液体发泡冲出，进入接受瓶。火力太弱，蒸馏瓶内压力减低，则接受瓶内液体会倒流，造成实验失败。
5.2.5用硫酸标准溶液（3.7)滴定至溶液出现酒红色为止，记录所用硫酸标准溶液的体积。同时进行空白试验，并在结果中加以校正。6分析结果的表述
样品中蛋白质含量(g/100g）=（V）×c(H+)×2×0.014×F、X 100........( 1 )
m×100
V—一滴定时消耗硫酸标准溶液的体积，mL；式中：
V。空白试验消耗硫酸标准溶液的体积，mL；c(H+)—-硫酸标准溶液中H+的浓度，mol/L；m—样品的质量，g;
0.014-—氮原子的摩尔质量，kg/mol；F
氮换算为蛋白质的系数。乳粉为6.38，纯谷物类（配方）食品为5.90，含乳婴幼儿谷物（配方）食品为6.25。
注：空白实验仅不加入样品，操作步骤与样品相同。223bzxZ.net
7允许差
GB/T5413.1—1997
同一样品的两次测定值之差不得超过平均值的1.5%。224
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