ICS 11.220 CCS B41 DB35 福建省地方标准 DB35/T1995-2021 禽心包积液-肝炎综合征荧光定量PCR诊断技术 Fluorescence quantitative PCR diagnosis of fowl hydropericardium-hepatitis syndrome 2021-08-17发布 福建省市场监督管理局发布 2021-11-17实施 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 本文件由福建省农业科学院提出，由福建省农业农村厅归口。 本文件起草单位：福建省农业科学院畜牧兽医研究所、福州海关技术中心。 本文件主要起草人：施少华、陈珍、陈翠腾、叶洪、张体银、郑腾、黄瑜、朱春华、傅光华、程龙飞、春和、彭春香、刘荣昌、陈红梅、傅秋玲。 1 范围 本文件规定了禽心包积液-肝炎综合征荧光定量PCR诊断技术的设备、材料和试剂，样品采集、处理与保存，样品中病毒DNA提取，荧光定量PCR操作步骤及结果判定等技术要求。 本文件适用于禽心包积液-肝炎综合征的分子生物学诊断及流行病学监测。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 禽心包积液-肝炎综合征（fowl hydropericardium-hepatitis syndrome，HHS） 由禽腺病毒4型引起禽类以心包积液和肝炎为主要特征的一种综合征。 3.2 禽腺病毒4型（fowl adenovirus serotype 4，FAdV-4） 引起禽心包积液-肝炎综合征的病原。 3.3 循环阈值（cycle threshold，Ct值） 荧光定量PCR反应中，当反应管内荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数。 4 疫病概述 禽心包积液-肝炎综合征（HHS）最早于1987年发生于巴基斯坦安卡拉地区，目前已呈世界范围分布。多个国家和地区均有报道，不同地区分离毒株略有差异，但多为FAdV-4且具有较强致病性。 我国自2010年以来多地发生该病，并从发病鸡群中分离到FAdV-4。 主要临床特征为心包积液，心包内含淡黄色液体或胶冻样物；肝脏不同程度肿胀，质地较脆易碎，有出血斑或出血点；肾脏肿大并呈“花斑肾”。 主要发生于3～5周龄肉鸡，10～20周龄蛋鸡偶有发生，鸭、鹅、鸽及野鸟也可感染。 发病鸡在4 d后开始死亡，死亡期可持续7～10 d，发病率10%～30%，病死率20%～75%。该病一年四季均可发生，以水平传播为主，也可垂直传播，感染鸡排毒期可达9周，发病日龄越早死亡率越高。 5 设备、材料和试剂 5.1 设备 5.1.1 台式冷冻高速离心机（转速＞12000 r/min） 5.1.2 水浴锅或金属浴 5.1.3 微量可调移液器（100 μL～1000 μL、20 μL～200 μL、2 μL～20 μL、0.5 μL～10 μL） 5.1.4 荧光定量PCR仪 5.1.5 旋涡混合仪 5.2 材料和试剂 5.2.1 棉拭子稀释液（见附录A） 5.2.2 组织稀释液（见附录A） 5.2.3 10% SDS溶液（见附录A） 5.2.4 3 mol/L醋酸钠缓冲液（pH 5.2）（见附录A） 5.2.5 75%乙醇（见附录A） 5.2.6 荧光定量PCR引物与探针（见附录A） 5.2.7 蛋白酶K、Tris饱和苯酚、酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）、无水乙醇（成品） 5.2.8 探针qPCR试剂盒（与仪器配套） 5.2.9 PCR反应管（与荧光定量PCR仪配套） 5.2.10 阳性对照