ICS65.120 B46 DB41 河南省地 方标准 DB41/T1586—2018 饲料中志贺氏菌的检测EMA-PCR法2018-04-17发布 河南省质量技术监督局 2018-07-17实施 发布 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由河南省畜牧局提出并归口。本标准起草单位：河南省兽药饲料监察所、郑州中道生物技术有限公司。DB41/T1586—2018 本标准主要起草人：高延玲、李金磊、狄元冉、董鹏、孟伟、刘素梅、曲登峰。本标准参加起草人：方忠意、刘占通、刘素梅、韩楠、张杰、巩丹、王乐、范念亭、张艳娜、张崇威、王丽、孟祥。 I 1范围 饲料中志贺氏菌的检测EMA-PCR法本标准规定了饲料中志贺氏菌的EMA-PCR检测方法。本标准适用于饲料中志贺氏菌的检测。2规范性引用文件 2 DB41/T1586—2018 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8381.2饲料中志贺氏菌的检测方法GB/T14699.1饲料采样 3原理 叠氮溴化乙锭（EMA）能够透过死细菌的细胞膜，在强光照射下可与其DNA发生不可逆转的结合，使死细菌DNA不能作为模板进行PCR扩增，而活菌能进行PCR扩增，4试剂和材料 4.1除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，试验用水符合GB/T6682级水的要求。4.2GN增菌液：见附录A的A.1。 4.32XPremixTaq缓冲液：内含TaqDNA聚合酶1.25U/25μL，4mmolMg，dNTP各0.4mmol。4.4特异性引物（对）序列为： a）上游引物：5-TTGCTGCTGATGCCACTGAGA-3'：b）下游引物：5'-CCAGAGGGAGAACCAGTCCTTA-3'4.5琼脂糖：电泳级。 4.6Marker 2000。 4.7志贺氏菌ATCC12022。 4.850×TAE缓冲液：见附录A的A.2。4.96×上样缓冲液：见附录A的A.3。4.10叠氮溴化乙锭（EMA，0.2mg/mL）：见附录A的A.4。4.11 溴化乙锭（10mg/mL）。 4.123 灭菌离心管：1.5mL，15mL。 仪器设备 5 1