DB15/T1920-2020 马铃薯黄萎病室内抗性鉴定技术规程 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。由内蒙古农业大学提出，并由内蒙古自治区马铃薯生产与种植标准化技术委员会（SM/TC42）归口。 本标准主要起草人：王东、周洪友、孟焕文、赵君、张键、马平、张力群、李社增。 1. 范围 本标准规定了马铃薯黄萎病室内抗性鉴定的材料准备、鉴定方法及品种抗性水平划分等技术内容，适用于马铃薯品种（系）在室内条件下对黄萎病抗性水平的鉴定。 2. 材料准备 2.1 培养基制备 - PDA培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂粉18g，加水定容至1000mL；121℃高压湿热灭菌25分钟，冷却至室温备用。 - 麦麸培养基：将麦麸与水按质量比1:1搅拌均匀后，装入1000mL三角瓶中，每瓶100g；121℃高压湿热灭菌30分钟，冷却至室温备用。 2.2 菌种制备 供试黄萎病菌：选用马铃薯黄萎病菌标准菌株。菌株活化及培养：将保存的黄萎病菌菌株置于PDA平板进行活化。25℃下，培养5天至7天后，用打孔器在菌落边缘打取直径5mm的菌饼，取2～3块菌饼接入灭菌的麦麸培养基中，黑暗条件下培养15天。 2.3 对照品种选择 抗病对照品种：克新号；感病对照品种：费乌瑞它。 3. 鉴定方法 3.1 接种液制备 布满黄萎病菌的麦麸培养物中加入无菌水50mL搅拌均匀，经4层纱布过滤获得孢子悬浮液。通过显微镜计数，将孢子悬浮液的浓度调至0.7万个孢子/mL。 3.2 接种方法 选用鉴定品种的原原种进行育苗，当幼苗长到2～4片叶时，将幼苗取出并剪掉0.5cm，将根系浸入接种液中15分钟；然后移栽至装有灭菌土的花盆中，放置于25℃、光照强度4000lx、光暗交替条件下进行培养30天。 3.3 病情调查 根据马铃薯黄萎病发病程度分级标准（表1），记录室内马铃薯植株的地上部黄萎病发病情况，计算发病率和病情指数。 发病率 =（发病总株数/调查总株数）×100% 病情指数DI = [(各级病株数 × 该病级代表数值) / (调查总株数 × 发病最高级的代表数值)] × 100 表1 马铃薯黄萎病发病程度分级标准 | 发病程度 | 级别 | 病株叶片表现 | |----------|------|--------------| | 健株 | 1 | 叶片无症状 | | 轻度 | 2 | 25%以下出现症状 | | 中度 | 3 | 25%-50%症状 | | 重度 | 4 | 50%以上症状 | | 极重 | 5 | 全株枯死 | 根据病情指数对不同来源品种的抗性级别进行划分，划分标准见表2。 表2 马铃薯对黄萎病抗性分级标准 | 抗病型 | 病情指数DI | 代表数值 | |---------|---------------|----------| | 免疫 | 0 | 0 | | 高抗 | 0
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