DB22/T2692-2017《饲料中金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌检测双重微滴数字PCR法》由中华人民共和国吉林出入境检验检疫局提出并归口，吉林省质量技术监督局发布实施。标准起草单位为吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心，主要起草人包括聂丹丹、王宁宁、王准、曲辉、彭勃、孙晶莹、王玮琳、刘金华、罗雁非。 前言 本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015规则起草，标准仅供内部使用。使用本标准的人员应具备正规实验室操作经验，并自行采取安全防护措施，确保符合国家相关法规。 1 范围 本标准规定了饲料中金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌检测的双重微滴数字PCR方法，包括所需试剂、材料、仪器设备、样品准备、试验步骤、数据处理及防污染措施，适用于上述两种菌在饲料中的检测。 2 规范性引用文件 以下文件对本标准的应用必不可少： - GB4789.10-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 - GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 - GB/T14699.1 饲料采样 - GB19489 实验室生物安全通用要求 - GB/T26427-2010 饲料中蜡样芽孢杆菌的检测 - WS/T230-2002 临床诊断中聚合酶链式反应（PCR）技术应用 3 原理 微滴数字PCR平台通过形成微小油包水体系实现反应体系分割，根据金黄色葡萄球菌的nuc基因和蜡样芽孢杆菌16S保守基因进行鉴定。PCR扩增后，通过阳性微滴的数量与比例并结合泊松分布计算靶分子的初始拷贝数或浓度，实现快速定性检验。 4 试剂和材料 所有试剂除另有说明外均为分析纯，实验用水符合GB/T6682二级水要求。 4.1 菌株：金黄色葡萄球菌阳性标准菌株、蜡样芽孢杆菌阳性标准菌株。 4.2 2X ddPCR预混液。 4.3 7.5%氯化钠肉汤（见GB4789.10-2016 3.1）。 4.4 蛋白酶生理盐水（见GB/T26427-2010 5.1）。 4.5 甘露醇卵黄多粘菌素（MYP）琼脂培养基（见GB/T26427-2010 5.2）。