本标准规定了用稳定性染色体畸变估算职业受照者剂量的方法。本标准限于用G-显带法或用染色体核型。本标准适用于慢性职业受照人群的剂量估算，也适用于早先事故受照者的剂量估算，但不适用于近期事故性受照者生物剂量估算。 WS/T 204-2001 用稳定性染色体畸变估算职业受照者剂量的方法 WS/T204-2001 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国卫生行业标准
WS/T204—2001
用稳定性染色体畸变估算
职业受照者剂量的方法
Method of dose estimated using stable chromosomeaberration for occupational irradiated subjects2001-07-20发布
中华人民共和国卫生部发布
2002-01-01实施
WS/T204—2001
本标准是应全国卫生标准技术委员会放射性疾病诊断标准分委会委托，借鉴国内外有关实验资料，特别是近年来发展起来的荧光原位杂交技术实践，结合我国实际情况编写的，为解决职业受照人员剂量估算的方法。
本标准自2002年1月1日起实施。本标准由卫生部卫生法制与监督司提出。本标准附录A、附录B和附录C是提示的附录。本标准起草单位：中国医学科学院放射医学研究所。本标准起草人：主知权。
本标准由卫生部委托中国医学科学院放射医学研究所负责解释。1范围
中华人民共和国卫生行业标准
用稳定性染色体畸变估算
职业受照者剂量的方法
Method of dose estimated using stable chromosomeaberration for occupational irradiated subjects本标准规定了稳定性染色体畸变分析估算职业受照者剂量的方法。本标准限于用G-显带法或用染色体核型。WS/T204—2001
本标准适用于慢性职业受照人群的剂量估算，也适用于早先事故受照者的剂至估算，但不适用于近期事故性受照者生物剂量估算。2定义
本标准采用下列定义
2.1职业照射occupationalexposure除了国家法规，标准所排除的照射以及按规定已予以豁免的实践或源产生的照射以外，工作人员在其工作过程中所受的照射。
2.2G-显带G-bandsbytrypsinusingGiemsaGTG-显带用蛋白水解酶（胰蛋白酶）将染色体消化后，得到深浅颜色不同和宽窄度不等的特有带型。2.3生物剂量计biologicaldosimeter用以估算受照剂量的生物体系，这一生物体系受到照射后的反应与受照剂量之间存在着某种定量关系，从而可用来推定受照的剂量。2.4剂量-效应关系曲线dose-responsecurve当机体受照后引起的反应与受照剂量存在某种定最关系，用适当的数学模式表达，以作出相应的刻度曲线。
3剂量-效应曲线的建立
3.1对供血者要求
3.1.1男女均可，可各选一人或只选一人，3.1.2年龄18～50岁；
3.1.3无肿瘤病史；
3.1.4无慢性病史；
3.1.5无接触有毒有害物质史；
3.1.6未接受过大剂量的放射诊断、治疗史；3.1.7无焖酒嗜好。
1）将带有标本的载片放60C烤箱4h；用胰酶或胰酶-EDTA消化：Giemsa染色。中华人民共和国卫生部2001-07-20批准2002-01-01实施
3.2照射条件
3.2.1物理剂量准确；
3.2.2样品受照均匀；
3.2.3温度控制在37℃±0.5℃；3.2.4剂量范围0.1~5.0Gy；
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3.2.5剂量点7个左右，低于0.5Gy剂量点应选2~3个3.2.6照后即置于37℃恒温箱内，静置90~120min后接种培养。3.3培养方法
微量全血培养法：用0.5mL全血，在无菌条件下接种人pH为6.8~7.2的含有适量植物血细胞凝集索（PHA）、抗生索、牛血清的5mLRPMI-1640培养体系，置37C恒温箱培养52h，终止培养前2～6h或培养开始时加人适量秋水仙素。各剂量点培养瓶数，视剂量大小而定，一般是低剂量点培养数适当增加。
3.4标本制备
培养终止后收获细胞
3.4.1低渗：小心去上清液（切勿使沉淀的细胞松动）转移到10mL锥形刻度离心管中，加0.075mol/L氟化液10mL，放37C水浴锅中低渗30min；3.4.2，预固定：加0.5mL固定液（甲醇：冰乙酸=31）混合，1400rpm（转数/分）离心7min；3.4.3固定：去上清液，常温下固定20min，离心。反复二次；3.4.4去上清液，离心，加固定液，混勺，放置4℃冰箱16h以上3.4.5次日再离心，去上清液，加适量新配置固定液，混勾；3.4.6制片：将适量细胞混悬液立即滴人预温37℃的载玻片上，Giemsa染色。3.5镜检要求
3.5.1盲片分析；
3.5.2分析者应经严格训练，能较熟练识别各种类型畸变；3.5.3阅片必须按一定的规范，先在20×镜下导找标准细胞，然后在油镜下计数和分析；3.5.4作剂量-效应曲线的各剂量点分析细胞的计算\，一般是先分析100个细胞后按式（1)计算：N = 96(1 - P)/P
式中：N器要分析的细胞；
P——畸变细胞率。
3.5.5分析细胞标准
3.5.5.1细胞完整，染色体数目为45士1；3.5.5.2分散良好，各染色体可清楚辨认；3.5.5.3长短适中
+（1）
3.5.6发现有畸变或坏凝有异常时，记下X-Y轴坐标，同时一定征得第二、第三人确认，进行拍照，作进一步分析。
3.6回归方程拟合
3.6.1在算术坐标纸上，将各剂量点所观察到的双着丝粒数作散点图。若呈直线趋势，拟用直线模式：Y=c十αD；若呈抛物线趋势，拟用二次多项式模式见式(2)。Y+αD+BD2
式中：Y—双着丝率；
c自发双着丝率；
1）以分析双着或多着丝粒畸变。2
（2）
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α，β分别为一次和二次击中诱发的畸变系数；D-照射剂量，Gy。
3.6.2通过解方程式或用微机计算回归系数。3.6.3检验回归系数的显著性和曲线的拟合度。对于低LET辐射，多采用二次多项式模式，而高LET辐射，宜采用直线模式。4剂盘估算注意事项
4.1培养方法、标本制备和各类畸变判定标准均应与建立剂量-效应刻度曲线相同：4.2可作群体剂量估算；若对个体剂量估算分析细胞数不得少于100个中期细胞\。4.3病例分析时，应结合放射工龄、职业史和临床表现等；4.4剂量估算除给出均值外，同时应给出95%可信限范围。1）以G-显带法，分析相互易位。从理论和大的实验已经表明：辐射诱发易位和双着丝粒具有相同的频率。易位率可在体内受照后数十年基本恒定。3
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附录A
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稳定性染色体畸变分析在估算职业受照者剂盘中的意义大量的实验已经表明：电离辐射可以引起外周血淋巴细胞染色体结构重排，随着时间的推移，有的结构重排经死亡、丢失而逐渐减少，这类重排叫非稳定性染色体畸变，如双着丝粒、环状染色体和无着丝粒畸变等。然而另一类重排，如相互易位、倒位、缺失和插人等叫稳定性染色体畸变。这类畸变随累积剂量增加面增加，而畸变率可在体内数十年保持相对恒定。特别是近年来，荧光原位杂交方法的建立，大大促进和深化了这一领域，尤其是相互易位在稳定性染色体畸变占有非常大的份额，且与受照剂量有明确的关系。
稳定性染色体晴变类型：
a）相互易位reciprocaltranslocation二条染色体各发生一处断裂，相互交换片段，形成二条结构重排的新染色体。易位translocation
二条染色体各发生一处断裂，仅有一处片段接到另一条染色体上，另一片段末发生连接形成无着丝粒断片和一染色体部分缺失或另一片段丢失只留下一染色体部分缺失。b）倒位inversion
一条染色体同时发生二处断裂，其断裂片段作180°颠倒后，再连接起来形成一新染色体，若倒位片段仅在染色体的长臂或短臂内，不累及着丝粒时，叫臂内倒位（paracentricinversion），若倒位片段累及着丝粒时，叫臂间倒位（pericentricinversion）。c）缺失deletion
一条染色体部分丢失但不累及着丝粒。d）插人insertion
一条或二条染色体臂内发生二处断裂，其断裂片段插人到同一或另一染色体的断裂处。附录B
（提示的附录）
剂量推算及应用实例
B1剂量估算推荐公式见式(B1)
H=[(Y-K)/α]Q
式中，H-剂量,Gy,
Y——受检者易位率(畸变/细胞)；K—自发（本底）易位率（畸变/细胞）α
离体照射时建立的二次多项式方程中的线性项系数；Q辐射品质因子。
B2应用实例
（B1）
某医院一放射科室医生，1949年从事放射性诊断工作。用G显带法分析其外周血淋巴细胞中100个中期相，出现5个易位，本底易位率为0.006畸变/细胞。（α值为0.03易位/细胞·Gy，Q=1）易位率为每细胞0.05，标准误为每细胞0.022。4
95%可信限上限值为0.093。
95%可信限下限值为0.007。
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代人式(B1)求出其相应剂量为1.47(2.9～0.03)Gy。附录C
（提示的附录）
显微照相技术
这是从事细胞遗传学工作过程中的一个很重要的部分，在有条件的单位都应建立这套装置，包括照相显微镜、放大机、上光机、显定影液及有关设备等全套暗室装置。胶片可用12°缩微片，相纸选用放大纸3号或4号，滤片选用深绿色。对底片要求：
a）反差大；
b）画面不得小于纸面积的2/3
c）画面清晰，最好能附淋巴细胞；d）画面与玻片上所照细胞方向一致，e）记下X-Y轴坐标位置。
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行业标准
用稳定性染色体畸变估算
职业受照者剂量的方法
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