ICS 11.220 B41 备案号：56330-2017 吉林省地方标准 DB22/T 2629—2017 猪肠道微孢子虫检测 聚合酶链式反应（PCR）法 Detection method of polymerase chain reaction (PCR) of Enterocytozoon bieneusi in pigs 2017-06-12发布 2017-08-12实施 吉林省质量技术监督局 发布 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009和GB/T 20001.4—2015给出的规则起草。 本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。 本标准起草单位：吉林省畜牧兽医科学研究院。 本标准主要起草人：曹利利、郭衍冰、姚新华、苑淑贤、程荣华、姚琳、董航、邵洪泽。 1 范围 本标准规定了猪肠道微孢子虫PCR检测方法的技术要求。 本标准适用于猪肠道微孢子虫的实验室检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室生物安全通用要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 猪肠道微孢子病（Intestinal microsporidiosis of pig） 由肠道微孢子虫（Enterocytozoon bieneusi）引起的猪的一种人兽共患寄生虫病，以腹泻为主要临床特征。 4 试剂和材料 4.1 试剂 除另有规定外，本标准所用试剂均为分析纯，实验用水为符合GB/T 6682的双重蒸馏水（ddH2O）。 4.1.1 粪便DNA提取试剂盒 4.1.2 10 mg/mL溴化乙锭（EB）溶液（见附录A.1） 4.1.3 50×TAE电泳缓冲液（见附录A.2） 4.1.4 1.5%琼脂糖凝胶（见附录A.3） 4.1.5 上样缓冲液（见附录A.4） 4.1.6 10×PCR缓冲液（见附录A.5） 4.1.7 Taq DNA聚合酶（200 U或2 U/μL） 4.1.8 10 mmol/L dNTPs 4.1.9 标准分子量DL2000 Marker 4.1.10 1.4 g/mL CsCl溶液（见附录A.7） 4.1.11 猪肠道微孢子虫阳性对照：肠道微孢子虫基因组DNA（10 ng/μL） 4.1.12 引物序列及浓度见表1