ICS 65.020.01 B05 备案号：56324-2017 吉林省地方标准 DB22/T 2623.3-2017 黑木耳菌种区别性及真实性鉴定 第3部分：SRAP法 Verification of distinctness and genuineness for Black wood ear spawn Part 3: SRAP 2017-06-12发布 2017-08-12实施 吉林省质量技术监督局 发布 前言 《黑木耳菌种区别性及真实性鉴定》分为三个部分： DB22/T 2623.1 黑木耳菌种区别性及真实性鉴定 第1部分：对峙培养法 DB22/T 2623.2 黑木耳菌种区别性及真实性鉴定 第2部分：酯酶同工酶法 DB22/T 2623.3 黑木耳菌种区别性及真实性鉴定 第3部分：SRAP法 本部分为第3部分：SRAP法。本标准按照GB/T 1.1—2009和GB/T 20001.4—2015的规则起草。 本标准由吉林省农业委员会提出并归口。 本标准起草单位：吉林农业大学、吉林省海外农业投资开发集团有限公司。 本标准主要起草人：姚方杰、张友民、方明、陈影、鲁丽鑫、王鹏、姚允武、于娅、刘宏宇、李丹、王晓娥、陈艳秋、刘迪、张伟彤、孔祥会、马晓旭、张媛媛、李玉。 1 范围 本标准规定了黑木耳菌种真实性SRAP法的原理、试剂和材料、仪器设备、样品处理、试验步骤及试验数据处理。 本标准适用于黑木耳菌种真实性鉴定。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 引物（primer） 用于黑木耳菌株真实性鉴定的一定长度和特定顺序的寡核苷酸链。 2.2 PCR空白对照（PCR control check） 以无菌水作为模板进行PCR反应，用于验证PCR过程中是否发生污染。 2.3 阴性提取对照（negative control） 以无菌水代替材料进行DNA提取，用于检测DNA制备过程中是否发生污染。 3 原理 对黑木耳菌种ORFs区域中的内含子和启动子进行特异性扩增，检测其序列长度多态性。通过对PCR扩增产物的检测与比较，识别基因组DNA多态片段，从而鉴定菌种真实性。 4 试剂和材料 4.1 培养基（见附录A） 4.2 四种脱氧核糖核苷酸混合溶液（dATP、dCTP、dGTP、dTTP） 4.3 Taq DNA聚合酶 4.4 核酸染料 4.5 DNA分子量标记 4.6 引物（见附录C） 4.7 剥离硅烷 4.8 亲和硅烷 4.9 1 mol/L Tris-HCl（pH 8.0）（见附录B.1） 4.10 0.5 mol/L EDTA-2Na溶液（见附录B.2） 4.11 CTAB提取缓冲液（见附录B.3）