ICS 65.020.01 B05 备案号：56323-2017 吉林省地方标准 DB22/T 2623.2-2017 黑木耳菌种区别性及真实性鉴定 第2部分：酯酶同工酶法 Verification of distinctness and genuineness for Black wood ear spawn Part 2: Esterase isozyme 2017-06-12发布 2017-08-12实施 吉林省质量技术监督局 发布 前言 《黑木耳菌种区别性及真实性鉴定》分为三个部分： DB22/T 2623.1 黑木耳菌种区别性及真实性鉴定 第1部分：对峙培养法 DB22/T 2623.2 黑木耳菌种区别性及真实性鉴定 第2部分：酯酶同工酶法 DB22/T 2623.3 黑木耳菌种区别性及真实性鉴定 第3部分：SRAP法 本部分为第2部分：酯酶同工酶法。本标准按照GB/T 1.1—2009和GB/T 20001.4—2015的规则起草。 本标准由吉林省农业委员会提出并归口。 本标准起草单位：吉林农业大学、吉林省海外农业投资开发集团有限公司。 本标准主要起草人：姚方杰、张友民、方明、陈影、鲁丽鑫、王鹏、姚允武、于娅、刘宏宇、李丹、王晓娥、陈艳秋、刘迪、张伟彤、孔祥会、马晓旭、张媛媛、李玉。 1 范围 本标准规定了黑木耳菌种真实性鉴定中酯酶同工酶法的原理、试剂和材料、仪器设备、样品处理、试验步骤及试验数据处理。 本标准适用于黑木耳菌种真实性的鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 1097 食用菌菌种真实性鉴定 酯酶同工酶电泳法 3 术语和定义 NY/T 1097界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 菌种真实性（genuineness of spawn） 指菌种遗传特性与标准或已知来源一致的程度。 4 原理 在生物体中，酶的表达受遗传基因调控。酯酶是多等位基因调控的酶类。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋白质在分子筛效应和电场作用下分离。菌丝体提取的粗酶液经电泳分离后，通过生化染色显示不同酯酶组分，在凝胶上形成特定酶谱。 由于遗传背景相同的菌种具有相同酶谱特征，因此可利用酯酶同工酶酶谱对黑木耳菌种的真实性进行鉴定。 5 试剂和材料 5.1 培养基（见附录A） 5.2 酯酶同工酶上样缓冲液：4×Protein Native PAGE Loading Buffer 5.3 样品提取液（pH 7.5）（见附录B.1） 5.4 过硫酸铵（见附录B.2） 5.5 分离胶缓冲液（pH 8.9）（见附录B.3） 5.6 浓缩胶缓冲液（pH 6.7）（见附录B.4）