DB12/T862-2019 《水产微生态制剂乳酸菌生产技术规程》 前言 本标准依据GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》起草，由天津市农业科学院提出并归口，起草单位为天津市农业生物技术研究中心。主要起草人：谢风行、张峰峰、周可、赵琼、赵玉洁、孙海波、高宝山。 1 范围 本标准规定了水产微生态制剂乳酸菌的生产技术，包括术语和定义、生产环境和设备要求、生产流程、质量检测及储运等内容。适用于水产微生态制剂乳酸菌的生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的： - GB3095 环境空气质量标准 - GB3838 地表水环境质量标准 - GB20287 农用微生物菌剂 3 术语和定义 3.1 乳酸菌 Lactic acid bacteria：能利用碳水化合物产生乳酸的一类无芽孢、革兰氏阳性细菌，常用于水产养殖作为饲料添加剂和水质净化剂。主要包括植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、戊糖乳杆菌、德氏乳杆菌和粪肠球菌等。 3.2 原菌种：由单菌落分离纯化，并在试管上穿刺繁殖保存的菌种。 3.3 一级菌种：原菌种在培养皿上活化，挑取单菌落接种至玻璃瓶中并厌氧培养的菌种。 3.4 二级菌种：将一级菌种接种至种子罐中，在种子罐中厌氧放大培养的菌种。 4 生产环境和设备要求 4.1 生产环境 4.1.1 厂区空气质量应符合大气环境质量标准GB3095中II类要求。 4.1.2 发酵用水应符合地表水环境质量标准GB3838中III类水质要求，冷却水及其他用水符合该标准中V类水质要求。 4.1.3 生产车间配备消毒灭菌设施，菌种储藏室和无菌操作间应与生产车间分开。 4.2 生产设备 生产设备需为不锈钢发酵罐，体积根据生产规模自定。 5 生产技术流程 5.1 生产流程 生产流程见附录A。 5.2 菌种质量 5.2.1 用于发酵的菌种应提供菌种鉴定报告或菌株来源相关信息。 5.2.2 发酵前应检测菌种的纯度和性能，如不纯或退化，应进行提纯复壮。 5.2.3 菌种在上罐生产前需检测种子罐中菌体的纯度和浓度，浓度需达到每毫升亿级以上，发酵菌液pH<4.0。 5.3 培养基 5.3.1 原菌种和一级菌种的培养基应保证菌种生长的延滞期短，生长旺盛，碳、氮源丰富。 5.3.2 二级菌种培养基应为发酵培养基或接近发酵培养基。 5.3.3 发酵培养基应尽量利用来源充足、价格低廉的原料。 5.4 灭菌 5.4.1 液体发酵，发酵罐的装液量应为60%～70%，采用高压蒸汽灭菌，灭菌条件为115℃~121℃，0.1MPa~0.15MPa，灭菌20~30分钟。 5.4.2 固体物料含水率应为50%~55%，灭菌条件为115℃~121℃，0.1MPa~0.15MPa，灭菌1.0~1.5小时。 5.4.3 灭菌后进行无菌操作，确认灭菌是否彻底。 5.5 接种 接种量为一级菌种到二级菌种3%～5%，二级菌种到发酵罐接种量为5%～7%。接种时需进行无菌操作，调节进排气阀，保证气体排出。 5.6 发酵 5.6.1 发酵温度控制在25℃~35℃。 5.6.2 发酵过程中不通气或通入氮气，搅拌转数为50r/min～100r/min。 5.6.3 当有效活菌数达到每毫升十亿级，且pH降低到4.0以下时，结束发酵。 5.6.4 发酵周期为24~48小时。 5.7 发酵后处理 发酵后的液体菌剂或固体菌剂可直接分装，或用载体吸附处理，包装容器需灭菌处理。 6 质量检测 6.1 检测指标 每个批次产品抽样检测项目包括感官、水分、有效活菌数、芽胞率、杂菌率等指标。