DB12/T884-2019 《天津市地方标准 百合鳞茎中多糖的含量测定 紫外/可见分光光度法》 前言 本标准依据GB/T1.1-2009规则起草，由天津市农业科学院提出并归口，天津市农业质量标准与检测技术研究所负责起草。主要起草人：刘征辉、魏静娜、赵琳琳、张强、赵云平、薛天凯、徐石勇、郑贵忠。 1 范围 本标准规定了紫外/可见分光光度法测定百合鳞茎中多糖含量的原理、试剂材料、仪器设备、分析步骤、分析结果表述和精密度。本标准适用于百合鳞茎干品及鲜品中多糖含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对本标准的应用必不可少。注日期的引用文件，仅所注日期版本适用；不注日期的引用文件，其最新版本适用。 - GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 百合样品经水回流提取后得到水提液，加乙醇沉淀得到百合多糖。百合多糖溶于水后，采用葱酮硫酸法在585 nm波长测定吸光度，以葡萄糖为标准品，采用外标法定量。 4 试剂和材料 4.1 试剂 - 乙醇（CH3CH2OH） - 葱酮（C16H10O4） - 浓硫酸（H2SO4）：95%~98%（g/g） - 水（H2O）：GB/T6682规定的一级水 4.2 试剂配制 - 葱酮硫酸溶液（0.2%）：称取0.20 g葱酮，加100 mL浓硫酸溶解，摇匀，现用现配。 4.3 标准品 - 葡萄糖标准品（C6H12O6）：纯度≥98%或经国家认证的标准物质。 4.4 标准溶液配制 4.4.1 葡萄糖标准储备液（1 mg/mL）：精密称取50 mg干燥葡萄糖，溶于水并定容至50 mL，摇匀，4℃以下保存。 4.4.2 葡萄糖标准系列工作溶液：精密量取储备液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，分别置50 mL容量瓶中，用水定容，摇匀，得浓度20 μg/mL、40 μg/mL、60 μg/mL、80 μg/mL、100 μg/mL。 5 仪器和设备 - 粉碎机 - 天平：感量0.001 g和0.0001 g - 圆底烧瓶：250 mL - 水浴锅 - 聚丙烯具塞离心管：10 mL - 容量瓶：10 mL、50 mL - 具塞比色管或刻度试管：10 mL - 紫外/可见分光光度计：配1 cm玻璃或石英比色杯 - 涡旋混合仪 - 离心机：转速≥6000 r/min - 试验筛：40目 6 分析步骤 6.1 样品制备 6.1.1 干品：采样量>500 g，经粉碎机充分粉碎均匀，过40目筛，分为两份，装入洁净容器，密封标记，0~4℃冷藏保存。 6.1.2 鲜品：采样量>500 g，于真空干燥箱50℃烘干后，按干品处理方法处理。 6.2 样品提取 取约1 g样品粉末，精密称定，置250 mL圆底烧瓶中，加入100 mL水，水浴加热回流2 h，放冷，再称定重量，加水补足减失重量，离心（6000 r/min，10 min），取上清液1.5 mL，加乙醇7.5 mL，摇匀，4℃冰箱放置3 h，离心（6000 r/min，10 min），倾去上清液，沉淀加热水溶解，转移至50 mL容量瓶中，加水定容，摇匀。 6.3 测定 准确吸取样品提取液及标准系列工作溶液各1 mL，置10 mL具塞试管中，加入0.2%葱酮硫酸溶液4 mL，涡旋混合，沸水浴加热10 min，冰浴冷却5 min，以相应试剂为空白，在585 nm波长测定吸光度。以吸光度为纵坐标，标准系列工作溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线（线性相关系数>0.99），待测样液响应值应在标准曲线线性范围内。 分析结果表述 试样中百合多糖含量按式计算：X = (K * cx * 5 * V * V1) / (V2 * m) × 10^6，单位为 g/100 g，其中cx为待测样液显色浓度（μg/mL）。