ICS 65.020 B16 DB35/T 1220—2011 福建省地方标准 大豆疫霉菌致病性测定 Technical Standard for Pathogenicity Test of Phytophthora sojae 2011-12-31 发布 2012-03-15 实施 发布单位：福建省质量技术监督局 前言 为规范大豆疫霉菌致病性测定技术，确保测定结果的准确性，并有效应用于大豆疫病抗病种质资源筛选和育种工作，特制定本标准。本标准按照 GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》编写。本标准由福建省农业科学院提出，由福建省农业厅归口。 本标准起草单位：福建省农业科学院植物保护研究所。主要起草人：兰成忠、陈庆河、翁启勇、李本金、赵健、邱荣洲。 1 范围 本标准规定了大豆疫霉菌致病性测定的方法、结果计算以及测定材料灭活处理的方法。 本标准适用于大豆疫霉菌致病性的测定。 2 术语与定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1 人工接种（Artificial inoculation） 利用人工培养的病原物，在人工控制条件下接种大豆植株诱发病害，根据植株发病程度判断病原菌致病性强弱。 2.2 接种体（Inoculant） 用于人工接种致病性鉴定的大豆疫霉菌（Phytophthora sojae）卵孢子悬浮液。 2.3 下胚轴伤口接种（Hypocotyl inoculation technique） 供试品种生长至2～3片真叶时，使用带7号针头的2 mL注射器，在大豆苗子叶下茎约0.5 cm处划1 cm长伤口，并将0.5 mL接种体施于伤口处。 2.4 对照品种（Contrast cultivar） 在致病性测定中选定的感病品种Williams及当地主栽品种。 3 致病性测定方法 3.1 育苗 供试大豆品种（品系）及对照品种分别播种于以新蛭石为基质的适宜容器中，株距为（1～2）cm×（1～2）cm。育苗温度控制在20℃～30℃。每处理不少于15株，设置3个重复。 3.2 接种体制备 将供试菌株菌丝块接种于胡萝卜培养基（见附录A），在25℃～28℃黑暗条件下培养8 d～10 d。刮取培养物并加入适量无菌水，用组织捣碎机制成匀浆。在光学显微镜下观察卵孢子数量，使用血球计数板将孢子悬浮液浓度调整至约2×10^4个/mL。接种体应现用现配。 3.3 接种时间 大豆苗生长至2～3片真叶期进行接种。 3.4 接种方法 采用下胚轴伤口接种方法。 3.5 接种后管理 接种后将大豆苗置于20℃～25℃、相对湿度90%以上条件下保湿48 h，然后转入20℃～30℃温室培养，保持土壤含水量70%～80%。 3.6 调查部位 调查大豆苗下胚轴部位。 3.7 调查时间 接种4 d后，当感病对照品种发病株率达到75%以上且病情达到7级（见附录B）时开始调查。每隔1 d调查一次，连续调查不少于5次。 3.8 病情调查与记载 按附录B规定的分级标准逐株调查并记录病级。 4 病情指数计算 供试大豆品种的病情指数按公式（1）计算： 病情指数 = Σ（病级株数 × 相应病级代表值） /（调查总株数 × 最高病级代表值）×100 5 测定材料的灭活处理 5.1 剩余接种体应带回实验室进行灭菌处理。 5.2 致病性测定后的大豆病株应集中焚烧处理。 5.3 栽培大豆苗的基质应带回实验室进行160℃干热灭菌处理。 5.4 栽培用盆钵应带回实验室，采用80℃水浴处理2 h以上。