HG/T 3645-1999 天然橡胶手套中水抽提蛋白质测定方法 Lowry法 HG/T3645-1999 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS83.140.99
备案号：4063—1999
中华人民共和国化工行业标准
HG/T 3645---1999
天然橡胶手套中水抽提蛋白质
测定方法Lowry法
Method for the determination of agueous extractableprotein in natural rubber gloves using the Lowry method1999-08-12发布
2000-10-01实施下载标准就来标准下载网
国家石油和化学工业局发布
HG/T3645—1999
本标准的制定，可改变我国生产企业胶乳及干胶制品中可水抽提蛋白质含量无试验方法的现状，为提高我国企业胶乳制品的测量水平及我国胶乳制品出口创汇打下坚实的基础。本标出中华人民共和国原化学工业部技术监督司提出。本标由全国橡标委胶乳制品分技术委员会归口。本标雄主要起草单位：化工部株洲橡胶塑料工业研究设计院。本标准主要起草人;烫胜修,盛腊云,李枚辉。中华人民共和国化工行业标准
天然橡胶手套中水抽提蛋白质
测定方法Lowry法
Method for the deternination of aqueous extractable proteinin natural ruhher gloves using the Lowry method告：
HG/T3645—1999
使用本标准的人应该熟悉通常的实验牵操作。本标准不意味着提出所有的安全问题，只涉及与本标准有关的安全问题。使用者有责任建立适当的安全和健康规范,并保证遵守国家的任何规定。本标准要求由具有实验室操作技能的并达到相当水平的分析工作者在装备了适当设备的实验垒里进行。1范围
本标准提供了一个测定大然像胶手套中水溶性蛋白质含量的方法。本标准也适合于其他橡胶制品中水溶性蛋白质含量的测定。2原理
水溶性蛋白质可从缓冲溶液中抽提出来，然后沉淀提纯，把蛋血质从有可能干扰沉淀的水溶性物质中分离；再溶解提纯出来的蛋白质，用Lowry方法进行比色，测定蛋白质含量。3定义
本标准采用下列定义。
3. 1浓缩因子F(Concentration factor)被用来沉淀的蛋白质提抽液与用来再溶解蛋白质沉淀的溶液的体积比。例如;将 4 mL 蛋白质提抽液进行沉淀，然后用1mL溶液再溶解沉淀，则浓缩因子F等于4。3.2 Lowry
对本标准求说，\Luwry\这个词用来表示原 Lowry分析法的任何改进形式。3.3蛋白质Protein
本标准中提及的蛋白质是来自关然乳胶及其制品中的水溶性蛋白质和多肽。4仪器、设备
4.1离心机：性能至少为10000×g。离心管:容量为 50 ml,和 10 mL,对蛋白质吸附力小的案丙烯管。4.2分光光度计和比色血。
4.3旋祸混合器。
4.4微量移液管、容量瓶。
4.5聚丙烯管：容量为50mL和10mL,对蛋白质吸附力小的骤丙烯管。国家石油和化学工业局1999-08-12批准2000-10-01买施
5试剂
HG/T3645-1999
5. 所用水均为重蒸馏水,所用试剂均为分析纯或相当纯度的试剂。5.2抽提试剂：0.02m1ol/L、pH=7.4的磷酸盐缓冲溶液。5.3改进的 Lowry 蛋白质试验试剂。5. 3. 1 试剂 A;将 10 份试剂 C 和 0. 2 份试剂 D 混匀,检验的当天配制。试剂B，稀释的福林试剂（7.2份福林试剂+2.8份水）。5. 3.2
试剂 C:6g碳酸钠溶解在100 mL水中。5. 3. 4
试剂 D:1. 5 g 硫酸铜和 3 g 柠檬酸销溶解在 100 mL 水中。5.3.5
氢氧化钠溶液：c(NaOH)=0.2.mol/L。5.3.6
脱氧胆酸钠(DO0C),0.15%(质量/体积),0.15g脱氧胆酸钠溶解在100mL水中。三氯乙酸(TCA).72%(质量/体积),72 g三氮乙酸溶解在 100 mL水中。磷钨酸（PTA）：72%（质量/体积），72g磷钨酸溶解在100ml.水中5.3.8
5.3.9蛋白质母液：制备一个浓度为1mg/mL的牛血清自蛋白标准蛋白质溶液，冷藏下，溶液能贮存48 h,温度为一18 ℃时,可贮存 2 个月;融化时,要求用水浴加热到 45 ℃并保温 15 mim。注1冷时问为幕计时问间。为避免反复的冷冻和融化，建将蛋白质母液分几份照存，每份足够制备一条标准曲线，或在试验步骤中足够使用。6测定步骤
6.1蛋白质的拙提
6. 1. 1在整个抽提过程中,应用 pH = 7. 4 的磷酸盐缓冲溶液作为抽提介质,其温度应保持在(25土5)C.
6. 1.2推确称取试样(4±0.5)g(精确到 0.000 1g),剪成 1 cmX4cm大小的片状,置于50 ml.聚丙烯管（4.5)中,按试样量：抽提试剂体积小于等于1：10比例移取抽提试剂(5.2)于装有试片的聚丙烯管中，使被测试样全部均匀地漫泡在抽提试剂中，并保持在（25土5）℃，拙提2h，每间隔30min搅动试片一次。
6.1.3将抽提液倒 50 mL离心管中,在 3000×g的条件下离心15 min，小心注出上层清液，立即进人下步操作，否则必须将上层清液在2~8℃贮存,贮存时间不超过 48 h。6.2蛋白质标准液的制备
用水稀释蛋白质母液（5.3.9），制备如下系列的蛋白质标准溶液：100μg/mL、50ug/mL、20g/ml.、10μg/mL.5μg/mL、2μg/mL。注2如果蛋白质母液在冷戴下贮存，应注意冷下的累计时间不超过2天。6.3蛋白质的沉淀与浓缩
6.3.1在(25±5)℃,用三份平行样完成试验。6.3.2分别移取4ml水（空白）、标准蛋白质溶液（六个）和手套抽提液（兰个）分别置于10ml.案丙烯离心管中,各加人 0. 4 mL DOC(5. 3. 6),用旋涡混合器混匀,室温条件下静置 10 mi;然后各加人 0. 4mLTCA(5.3.7);用旋涡混合器混勾，再分别加0.4mLPTA（5.3.8),用旋祸混合器混勾,在室漏条件下静置30min。
6.3.3将离心管(6.3.2)在10 000×多条件下离心30min。倾去上层清液，把离心管倒置在滤纸上，让水流干。
6. 3.4移取最小体积(根据固体沉淀的量可为 1. 0~4. 0 mL)的 NaOH(5.3.5)到各离心管(6.3.3)中（包括空白），用旋涡混合器混勾，再溶解沉淀约20min。在（3士1）C条件下，重溶解蛋白质溶液可贮存48h.
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注3若离心速度太低，可能不能充分分离蛋白质沉淀而导致错误结论。6. 4比色检验
6. 4. 1 分别移取 0. 8 mL 再溶解蛋白质溶液(包括空片)于聚内烯管(4. 5)中,各加人 0. 3 mL 试剂 A(5.3. 1),混勾;加入 1.1 ml.试剂 B(5.3. 2),立即用旋涡混合器混匀.室温下静置 30 min6. 4. 2 加人试剂 B 后 1 h 内,移取 1 ml.(6. 4. 1)溶液到比色血中,在 750 nm 波长处对照空白测定其吸光度。取三份平行样定值的平均值注 4 在测定过程中,时间、仪器和被长的一致性对试验结果非常重要。7结果表示
7.1计算
7.1.1标准曲线
以蛋白质标准溶液的浓度与吸光度的对应关系制备标准曲线，蛋白质标准溶液浓度低于100g/ml.时,标难曲线呈线性。
7.1.2浓度确定
直接从标准曲线的线性部分确定样品的蛋白质浓度。7.2结果
样品中蛋白质含量（μg/g)按下式计算：可抽提蛋白质含量(μ/g）=
式中:V…抽提液的体积,mI,
—--从标推曲线上测得的蛋白质浓度，ug/mL;F一-浓缩因子,F4 mL/再溶解蛋自质沉淀所用 NaOH的体积,mL；m-被抽提的手套质量,g。
平行结果的极差不大于10g/g。
8试验报告
试验报告至少包括下列内容：
采用的标准；
b被测定的样品名称：
c试验结果；
d试骏日期；
试验者。
（京）新登字039号
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化工行业标准
天然橡胶手套中水抽提蛋白质
测定方法Lowry法
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开本 88×1230毫米1/16印张始字数11于字2000年8月第1版 2000年8月北京第1次印刷书号：155025·0013
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