本标准规定了尿中对氨基酚(PAP)的高效液相色谱测定方法。本法最低检测浓度为0.5mg/L。本标准适用于接触苯胺的工人尿中对氨基酚的测定。 WS/T 56-1996 尿中对氨基酚的高效液相色谱测定方法 WS/T56-1996 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国卫生行业标准
尿中对氨基酚的高效液相色谱测定方法Urine-Determination of p-aminophenol .-- Highperformance liquid chromatographic method1主题内容与适用范围
WS/T 56—1996
本标准规定了尿中对氨基酚(PAP)的高效液相色谱测定方法。本法最低检测浓度为 0. 5 mg/L。本标适用于接触苯胺的丁人尿中对氨基酚的测定。2原理
尿样加盐酸加热水解后，酸性下用乙酸乙酯萃取，除去部分干扰物，然后在中性溶液中，用乙酸乙酯萃取尿样中对氨基酚，反相C1柱分离，在254 nm波长下测定，以保留时间定性，峰高定量。3仪器
3.1高效液相色谱仪，紫外检测器。3.2恒温水浴。
3-3全玻璃磨口蒸馏器，2L。
3.4微量注射器，10L。
3-5容量瓶.100mL，
3.6具塞刻度试管.25 ml-。
3.7璃瓶,200--500 ml。
3. 8尿比重计。
4试剂
本标准所用试剂，除另有说明者外，均为分析纯级试剂。4.1实验用水，为去离子水或经全玻璃蒸馏器重蒸馏的水。4.2盐酸.优级纯,P2o=1. 19 g/mL。4.3磷酸氢二钾。
4.4甲醇,重蒸的。
4.5 乙酸乙酯。
4.6对氨基酚，升华精制,避光保存。4.7对氨基酚标准溶液:准确称取 8. 0 mg精制对氨基酚(4. 6),加水溶解并加入 4 滴盐酸(4. 2),加水稀释至100ml.。此溶液1 ml.相当于80 μg对氮基酚。4.8质控样：用加标的模拟尿，接触者混合尿或加标的正常人混合尿作质控样。中华人民共和国卫生部1996-10-14批准1997-05-01实施
5采样,运输和保存
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使用硬质玻璃瓶，收集接触苯胺工人的班末或班后2h内的尿。尽快测定比重后，按100nl尿样4～5滴的比例加入盐酸（4.2)，4下可保存4天。6分析步骤
6.1仪器操作条件
色谱柱：柱长25 cm，内径4.6 mm，不锈钢柱。柱填料：反相C键合固定相5um
柱温：50℃
流动相：中醇+水=30+70(V/V)。流速1.0mL/min。
检测器波长：254nm。
6.2空白试验
取2 mI.正常人混合尿样与样品同时测定。6.3样品处理
6.3.1取2mI.尿样于25mL试管中，加1ml.水，1mL盐酸（4.2)，摇.加盖。6.3.2放在沸水浴中加热1h,取出冷系宰温，加水补足体积至4mL。加5mL乙酸乙酯萃敢尿中部分干扰物质，再加5mL乙酸乙酯重复萃取一次，弃掉有机相。于水相中加入4多磷酸氢二钾，摄匀。加入5mJ.乙酸乙酯萃取对氨基酚。静置分层，轻轻摇动，使苯取液中的棕色悬浮物下沉。上清液供分析用。6.4标准曲线的绘制
6.4.1取4支25mL试管，按下表配制标准管。对氨基酚标准管的配制
正常人混合尿,mL
对氨基酚标唯溶液(4.7),mL
水，mL
相当于尿中对氮基酚浓度
6.4.2以下操作按6.3.2条进行。1
6.4.3取10μL萃取物上清液进高效液相色谱仪，按操作条件（6.1)测定。重复进样三次。6.4.4以对氨基酚浓度为横坐标，各浓度对应的峰高平均值为纵坐标，绘制标准曲线。6.5样品测定
6.5.1取10μl.样品及空白样萃取物的E清液（6.3、6.2)分别注入高效液相色谱仪中，按操作条件(6.1)测定。
6.5.2用保留时间定性，峰高定量。对氮基酚色谱图见下图。在测定前后以及每测定10个样品后：测定一次质控样。
7计算
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尿中对氨基酚的液相色谱图
时间，min
7.1按式(1)计算尿样换算标准比重(1.020)下的浓度校正系数()。1, 020 — 1.000免费标准下载网bzxz
实测比重--1.000
7.2按式(2)计算尿中对氮基酚的浓度。X-
式中:X——尿中对氨基酚的浓度,mg/l.;出标准曲线查得的对氨基酚的浓度.mg/I.。8说明
（1）
8.1本法的最低检测浓度为0.5mg/L（空白值的3倍标准差）；测量范围为0～20mg/1.（乙酸乙酯萃取后的浓度）；当尿中对氮基酚浓度为4.0～40.0mg/L时，变异系数分别为CV=3.7%～6.9%；尿中对氮基酚浓度为3.0~0.7mg/1.时，加标回收率为95.0%~103.8%。8.2苯胺在体内的代谢速度快，所以要在班末或班后2h内采样，以正确地反映接触剂。采样后应尽早加酸，低温保存。
8.3尿中对氨基酚部分以结合态存在，为测得对氨基酚总浓度，须将结合态对氮基酚水解。尿样加酸后，于沸水溶中加热1h，可完全水解。8.4水解后的尿样中有一未知组分,在巾性条件下能与对氨基酚一起被萃取出来，干扰测定。因此必须先在酸性条件下,用乙酸乙酯颜萃取,除掉干扰物。然后再于中性茶件下萃取对氨基酚。预萃取过程中对氨基酚基本尤摄失。
8.5用碱溶液调节溶液PH值不易控制。而用周体磷酸氢二钾调节，操作简单，但加入量要足够、否则影响萃取率。
8.6质控样瓜加标的模拟尿时可考察准确度和精密度。用接触者尿或加标的正常尿时，可考察精密度。但人尿不宣久存。模拟尿只含人尿的大量成分。附加说明：
本标准由卫生部卫生监督可提出。wS/r 561996
本标罹由辽宁省劳动卫生研究所负责起草。本标谁主要起草人曲于。
木标准出卫生部委托技术口单位中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负贡解释。
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