DB34/T3283-2018 副猪嗜血杆菌的分子分型MLST方法 Multilocus sequence typing detection method for Haemophilus parasuis 发布单位：安徽省市场监督管理局 发布日期：2018-12-29 实施日期：2019-01-29 前言 本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则》的规定起草，由安徽农业大学提出，安徽省农业标准化技术委员会归口。起草单位包括安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司、安徽省动物卫生监督所、阜阳市动物卫生监督所、合肥市动物疫病预防与控制中心、安徽省兽药饲料监察所及同济大学。主要起草人：李郁、陈章、李雪松、张利亚、黄晓慧、刘晓露、孙裴、汪清峰、张劲松、高亚飞、孟天恺。 1 范围 本标准规定了副猪嗜血杆菌分子分型MLST方法的术语和定义、试剂和材料、仪器设备、操作步骤以及生物安全和防污染措施。适用于副猪嗜血杆菌的分子分型检测。 2 规范性引用文件 下列文件为本标准实施必不可少的引用文件。注明日期的文件，仅适用注明版本；未注明日期的文件，其最新版本包括所有修改单适用。 - GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 - GB19489 实验室生物安全通用要求 - GB/T27401 实验室质量控制规范 - NY/T2417 副猪嗜血杆菌PCR检测方法 3 术语和定义 3.1 管家基因（house-keeping genes） 所有细胞中均要表达的一类基因，其产物是维持细胞生命活动所必需的，其基因序列高度保守，并且在大多数情况下持续表达。 4 试剂和材料 除特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯。实验用水符合GB/T6682一级水要求，所有试剂使用无DNA酶污染容器分装。 4.1 细菌基因组DNA提取试剂盒 4.2 普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 4.3 Taq DNA酶 4.4 dNTP：dATP、dTTP、dCTP、dGTP 4.5 引物：扩增引物和测序引物（见附录A表A.2） 4.6 10x PCR缓冲液：200 mmol/L Tris-HCl (pH 8.4)，200 mmol/L 氯化钾，15 mmol/L 氯化镁 4.7 琼脂糖凝胶 4.8 GelRed核酸染色剂 4.9 6×溴酚蓝上样缓冲液