本标准规定了用离子选择电极法测定血清中氟化物的浓度。本标准适用于各种人群及动物血清中无机氟化物浓度的测定。 WS/T 212-2001 血清中氟化物的测定——离子选择电极法 WS/T212-2001 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国卫生行业标准
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血清中氟化物的测定
离子选择电极法
Determination for fluoride in serum-lon selectiveelectrode method
2001-11-14发布
中华人民共和国卫生部发布
2002-05-01实施
中华人民共和国卫生
行业标准
血清中氧化物的测定离子选择电极法WS/T212--2001
中国标准出版社出版
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WS/T212-2001
血清氟水平是评价人群氟负荷的重要指标，它在表明机体受氟危害及氟中毒中具有较重要的意义。因此，在地方性氟中毒的防治研究及防的研究中经常进行该指标的检测。本标准规定的血清中无机氟测定方法，是在参考了国内外多年来报道的各种血清氟测定方法的基础上并结合我国的国情制定的适于一般实验室可操作的方法。本标准规定的操作步骤及技术指标均经过实验室和现场验证。
本标准由卫生部疾病控制司提出。本标准起草单位：中国地方病防治研究中心地氟病研究所。本标准主要起草人：万桂敏、于光前、徐春蓓、王守智、张志瑜、张丽虹、叶平、边建朝、赵新华、宋丽、石玉霞、刘忠杰。
本标准由卫生部委托中国地方病防治研究中心负责解释。1范围
中华人民共和国卫生行业标准
血清中氟化物的测定离子选择电极法Determination for fluoride in serum-lon selectiveelectrodemethod
本标准规定了用离子选择电极法测定血清中无机氟化物的浓度。本标准适用于各种人群及动物血清中无机氟化物浓度的测定。2引用标准
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下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法3原理
氟离子选择电极的氟化镧单晶膜对氮离子有选择性，由电极膜分开的两种不同浓度的氟溶液之问存在电位差即膜电位，其大小与溶液中氟离子活度有关。利用电动势与氟离子活度的线性关系，可直接求出血清中氟离子浓度。
4试剂
本标准使用的试剂纯度除特别说明外均为分析纯。实验用水应符合GB/T6682中规定的二级水。全部试剂贮于聚乙烯瓶中。
4.1氟化物标准溶液
4.1.1氟化物标准贮备液：准确称取经120℃干燥2h并冷却至室温的氟化钠（优级纯)0.2210g，用水溶解后移入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，倒入聚乙烯瓶中备用。此液1mL含氟1000μgF-。
4.1.2氟化物标准工作液1［c(F-）=100.0μg/mL]：吸取氟化物标准贮备液（4.1.1)10.00mL，移人100mL容量瓶中，用水定容至刻度。4.1.3氟化物标准工作液1[c(F-）=10.0μg/mL]：吸取氟化物标准工作液1（4.1.2）10.00mL，移人100mL容量瓶中，用水定容至刻度。4.1.4氟化物标准工作液[c（F-）=5.0μg/mL]：吸取氟化物标准工作液1（4.1.2)5.00mL，移人100mL容量瓶中，用水定容至刻度。4.1.5氟化物标准工作液V[c（F-）=2.0μg/mL]：吸取氟化物标准工作液1（4.1.2)2.00mL，移人100mL容量瓶中，用水定容至刻度。4.1.6氟化物标准工作液V[c（F-）=1.0μg/mL]：吸取氟化物标准工作液/（4.1.3）10.00mL，移人100mL容量瓶中，用水定容至刻度。中华人民共和国卫生部2001-11-14批准2002-05-01实施
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氟化物标准工作液（4.1.4~4.1.6)临用时现配。4.2总离子强度调节缓冲液（TISAB)4.2.1总离子强度调节级冲液（TISAB)：称取58.0g氮化钠、0.4g柠檬酸三钠（NaC.H,O,·2H,O)，溶于约500mL水中，加人57mL冰乙酸，用氢氧化钠Cc（NaOH）=5mol/LJ调pH为5~5.2，用水定容至1L。
4.2.2含氟总离子强度调节缓冲液：配制同4.2.1，在加水稀释前，加氟化物标准工作液1（4.1.3）2.00mL。此液含氟0.02μg/mL。临用前现配。5仪器
5.1离子活度计或精密酸度计：分辨率为0.1mV。5.2氟离子选择电极：CSB-F-Ⅲ型（长沙特种硬质合金工业公司产）。5.3232型甘汞电极。
5.4磁力搅拌器。
5.5塑料微容池，具有聚乙烯包裘的搅排子。5.6可调微量移液器或微量加样器2~20μL（±0.02μL）。6采样
采集空腹肘静脉血1.5～2mL，置于无氟具塞的聚乙烯管中，采集后立即离心（3000r/min，10min）取血清测氟。若不能及时分析，保存冰箱（4℃）中，一周内完成测定.也可保存于一18℃～一20℃冰盒内2周测定。
7分析步骤
7.1标准加人法
7.1.1电极实际斜率的测定
7.1.1.1氧化物标准系列的配制：取6个25mL容量瓶，按表1配制标准系列。表1氟化物标推系列的配制
容量瓶号
1.0μg/mL氟化物标准工作液V/mL10.0μg/mL氟化物标准工作液1/mLTISAB液/mL
氟含量/μg/mL
用水定容至刻度
7.1.1.2氟化物标准系列的测定：分别吸取上述各浓度的氟标准液0.80mL于微容池内，放一根搅拌棒，移至磁力搅拌器上，插人氟电极和甘汞电极，测定溶液的电位值，从低浓度到高浓度逐个进行。待读数稳定后（即每分钟电极电位变化小于1mV)，读取电位值，同时记录测定时的温度。7.1.1.3电极实际斜率(S)的计算：由上述标准系列测得的电位值，浓度每变化10倍所引起的电位差即可得不同浓度范围内的电极实际斜率。也可用上述标准系列测得的电位值（Es）和相应的标准液的浓，度(Cs)按式(1)可求得任意两个标准溶液浓度范围的电极实测响应斜率。S=(Es.-Es,)/g(Cs,/Cs,)
式中：S—-电极实际斜率，
Es,高浓度标准溶液的电位值；
一低浓度标准溶液的电位值；
Cs,高浓度标准溶液的浓度；
Cs,—低浓度标准溶液的浓度。
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7.1.2样品测定：吸取0.40mL血清置于微容池中，再加人0.40mL总离子强度调节缓冲液（4.2.1)【如样品含氟量低于0.02μg/mL，测定时则加人0.40mL含氟TISAB液（4.2.2)）。放一个搅拌子，将微容池放在磁力搅拌器上搅拌几秒钟、混勺样液，然后插人氟电极和甘汞电极测定电位值E，再另加小体积(10.0~20.0μL）氟化物标准工作液1、或N（4.1.3、4.1.4或4.1.5）测定电位值E2，按式（2)(3)计算血清中氟含量。
7.2标准曲线法
7.2.1标准曲线的绘制
7.2.1.1氟化物标准系列的配制：同7.1.1.1。7.2.1.2氟化物标准系列的测定：同7.1.1.2。用对数坐标纸，以等距离表示电位值，对数坐标表示氟离子浓度，绘制标准曲线。标准曲线应在测定样品的同时绘制。7.2.2样品测定：准确吸取0.40mL血清于微池内，再加人0.40mL总离子强度调节级冲液（4.2.1)C如样品含氟量低于0.02μg/mL，测定时则加人0.40mL含氟总离子强度缓冲液（4.2.2)），按7.1.2的方法测定电位值，查曲线并按式（4)、（5)计算氟含量。8结果计算
8.1标准加人法的计算，见式(2)、（3)。Cx = [(Cs ·Vs)/Vx)/(10等 - 1)Cx= [(Cg.Vs/Vx)/(10等_ 1)) - 0. 02（当样品加含氟TISAB液时，用此式计算氟浓度。）式中，Cx血清中氟含量，μg/mL，Cs—加人的氟化物标准溶液浓度，μg/mL，（应是被测液浓度的50～100倍）；Vs—加人的氟化物标准液体积，mL，（不超过被测液体积的1/50～1/100)；Vx量取的血清体积，mL；
△E—E，与E,之差（E以20～30mV为宜）。·（2）
·（3）
S一—电极的实测斜率【取与被测液相接近的浓度范围的标准液精确测定值，而不能以理论斜率或实测的标准系列的平均斜率（指全区间）的S值计算）。8.2标准曲线法的计算，见式（4)。Cx=C×2
（当样品加含氟TISAB液时，用式（5)计算氟浓度。）Cx = (C - 0. 01) × 2
式中：Cx一一血清氟含量，μg/mL：C—查曲线得氟含量，μg/mL。
9说明
9.1检测下限和测定范围
检测下限为0.012μg/mL。
本方法可准确测定含氟量大于0.02g/mL血清中无机氟含量。（4）
9.2精密度和准确度：同一实验空对含氟量0.059μg/mL、0.090μg/mL和0.203μg/mL的血清样品8次测定的相对标准偏差分别为3.39%、1.89%、0.99%。当血清样品的本底氟值为0.054μg/mL0.089μg/mL，0.205μg/mL进行加标回收实验，回收率分别为96.7%±3.01%、101.2%土2.50%、99.8%±2.79%。
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四个实验室对含氟1.03mg/L士0.06mg/L，5.07mg/l士0.13mg/L牛血清游离氟成分标准物质(GBW09143、GBW09144)进行测定，均值分别为0.98士0.066g/mL，5.00土0.08ug/mL，相对标准偏差分别为6.73%、1.56%。相对误差分别为4.85%、1.38%，均小于5%。9.3标准加人法，样品中的加标浓度可根据测得的E，来判断可能的浓度范围，决定加2～10μg/mL那个浓度，使△E为20～30或20～40为宜，减少测定误差。9.4标准加人法计算所用的电极斜率（S），一定要用被测液加标前、后所测得的E，和E2所对应的氟标准液浓度范围内的电极实测斜率。9.5测样前电极插人0.02#g/mL氟标准液中20min，使样品测定平衡时间缩短。由于电极有“记忆”功能，应使它尽量少接触含高氟的溶液。在测含高氟的样品后，一定将电极洗至要求的空白电位。9.6电极插入微容池溶液内不可太深.刚好在液面下2mm～3mm即可，免得把样液挤出池外，再做标加时不准确。
9.7标准加人法，向被测液中加人标准溶液时，应在搅拌状态下加在两电极中间部位。这样使被加的标准溶液能被充分混匀。
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书号：155066·2-14437
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