DB42/T1593—2020 4型禽腺病毒抗体ELISA检测规程
Technical procedures of the ELISA assays for detection of type 4 avian adenovirus

发布日期：2020-07-07
实施日期：2020-11-07

前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规则起草。
本文件由华中农业大学提出。
本文件由湖北省农业厅归口管理。
本文件起草单位：华中农业大学，武汉科前生物股份有限公司。
本文件主要起草人：金梅林、张雪、邹忠、林显、孙小美、董晓辉、徐高原。
本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话：027-87665821，邮箱：hbsnab@126.com；华中农业大学，联系电话：027-87282038，邮箱：xys@mail.hzau.edu.cn。对本文件的有关修改意见建议请反馈至华中农业大学，电话：027-87286905，邮箱：jml8328@126.com。

引言
禽腺病毒属于禽腺病毒科禽腺病毒属，根据其抗原性的不同可分为3个群。根据血清中和反应，I群禽腺病毒包含12个血清型。4型禽腺病毒主要感染3周龄～5周龄鸡。我国主要流行血清型有：2型、4型8a/b型和10型。近期在豫南、皖北、苏北、鲁西北和胶东地区流行的禽腺病毒主要是血清4型和8a/b型，造成鸡群的死亡率较高，发病急，有蔓延的趋势，对我国的养禽业造成了巨大的经济损失。

1 范围
本文件规定了4型禽腺病毒抗体ELISA检测的术语和定义、实验原理、检测条件、检测方法、结果判定、废弃物处理和防止污染的措施。本文件适用于4型禽腺病毒鸡血清抗体的检测。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法。

3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。

4 实验原理
本文件采用酶联免疫吸附法（ELISA），该方法利用抗原抗体反应具有特异性，将特异性的4型禽腺病毒五邻体蛋白（penton）吸附到固相载体的表面后，待测物中若含有相应的4型禽腺病毒抗体，则可与所包被的五邻体蛋白（penton）相结合，并能继续和相应的辣根过氧化物酶标记的鸡IgG抗体结合形成复合物。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与待测物中4型禽腺病毒抗体的量直接相关，故可根据呈色深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高敏感度。

5 检测条件
5.1 试剂及耗材
5.1.1 试剂
纯化的4型禽腺病毒五邻体蛋白（penton）、酶标记物（辣根过氧化物酶标记的鸡IgG抗体）、底物液、显色液、终止液、阳性对照、阴性对照、样品稀释液、20倍浓缩洗涤液、包被液、封闭液。试剂配方及4型禽腺病毒五邻体蛋白、阳性对照、阴性对照的制备见附录A。
5.1.2 耗材
酶标板（96孔）。
5.2 设备