DB42/T1586—2020
牛沙门氏菌病诊断技术规程
Diagnostic technical guideline for bovine salmonellosis

【前言】
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由华中农业大学提出。本文件由湖北省农业农村厅归口。本文件起草单位：华中农业大学、湖北劲牛牧业有限公司、松滋市春珍肉牛养殖场、随州市弘大畜牧有限责任公司。
本文件主要起草人：郭爱珍、王杰、陈颖钰、王宇、王琛、胡长敏、栗绍文、陈焕春、彭清洁、曹永强、周春、曾稳兵。
本标准实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话：027-87665821，邮箱：hbsnab@126.com；华中农业大学，联系电话：027-87282038，邮箱：xys@mai1.hzau.edu.cn。对本文件的有关修改意见建议请反馈至华中农业大学，电话：027-87286861，邮箱：aizhen@mail.hzau.edu.cn。

1 范围
本文件规定了牛沙门氏菌病的临床初步诊断、实验室诊断、诊断检验流程及结果判断的技术要求。本文件适用于湖北省范围内牛沙门氏菌病的诊断、检疫与监测。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 4789.4 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
GB 19489 实验室生物安全通用要求

3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。

4 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
bp：碱基对 (base pair)
BPW：缓冲蛋白水 (buffered peptone water)
BS：亚硫酸铋 (bismuth sulfite)
DNA：脱氧核糖核酸 (deoxyribonucleic acid)
EDTA：乙二胺四乙酸 (ethylenediamine tetraacetic acid)
EP：微型离心管 (eppendorf tube)
PCR：聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction)
stn：沙门氏菌肠毒素基因 (salmonella enterotoxin gene)
TAE：三羟甲基氨基甲烷、乙酸和乙二胺四乙酸缓冲液 (tris(hydroxymethyl)aminomethane, acetic acid and ethylenediamine tetraacetic acid buffer)
TTB：四硫磺酸钠煌绿增菌液 (tetrathionate broth)

5 临床初步诊断
对牛进行临床观察，若体温升高至40℃～41℃，精神沉郁，呼吸加快，食欲降低或废绝，出现明显腹泻症状，排出黄色或灰黄色难闻稀粪，或排泄物含黏膜碎片和黏液或血丝，或呈血汤样者，初步判定为牛沙门氏菌病。填写附录B，将“临床初步诊断”栏记录为“+”并进行下一步操作。否则判定为无沙门氏菌病。

6 实验室诊断
6.1 检验程序
包括病料预增菌、PCR初筛、可疑菌落生化鉴定和PCR验证、血清型鉴定等步骤。
6.2 主要仪器与耗材
6.2.1 仪器
仪器主要包括：
a) 涡旋仪；
b) 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃；
c) 水浴锅；
d) 离心机；
e) PCR仪；
f) 核酸电泳仪；
g) 紫外灯；
h) 高压消毒锅；
i) 超净工作台或生物安全柜。
6.2.2 耗材
耗材主要包括：
a) EP管和离心管：容量1.5mL、10mL、15mL；
b) PCR反应管；
c) 无菌棉签；
d) 接种环。
6.3 培养基和试剂
6.3.1 BPW培养基：相关试剂配制应符合附录A.1的规定。
6.3.2 TTB增菌液：相关试剂应符合附录A.2的规定。
6.3.3 BS琼脂培养基：相关试剂应符合附录A.3的规定。
6.3.4 TAE缓冲液：三羟甲基氨基甲烷、乙酸和乙二胺四乙酸缓冲液。