DB42/T1592—2020 鸭坦布苏病毒双抗夹心ELISA抗原检测规程
Technical procedures of the double antibody sandwich ELISA assays for detection of duck tembusu virus
（报批稿）
2020-07-07发布
2020-11-07实施
发布单位：湖北省市场监督管理局

前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由华中农业大学提出。本文件由湖北省农业农村厅归口。本文件起草单位：华中农业大学、武汉科前生物股份有限公司。本文件主要起草人：金梅林、孙小云、陈伦勇、张雪、孙小美、但汉并、赵联忠、李冉、董晓辉、徐高原。
本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话：027-87665821，邮箱：hbsnab@126.com；华中农业大学，联系电话：027-87282038，邮箱：xys@mail.hzau.edu.cn；对本文件的有关修改意见建议请反馈至华中农业大学，电话：027-87286905，邮箱：jml8328@126.com。

引言
鸭坦布苏病毒病（Duck Tembusu Virus Disease）是主要引起蛋鸭产蛋量急剧下降的一种疾病，严重的则会出现绝产。该病传播极为迅速，短时间内波及全群，发病率高达100%，死亡淘汰率则根据不同的品种在2%-55%之间。在2011年召开的第一届水禽疫病防控研讨会期间，中国畜牧兽医学会将该传染病正式统一命名，称为“鸭坦布苏病毒病”。鸭坦布苏病毒病的疾病传播特点和危害使得病原的监测和检测成为各地疫控部门和各个规模化养殖场的重要工作之一。

1 范围
本文件规定了鸭坦布苏病毒双抗夹心ELISA抗原检测的术语和定义、试剂和材料、抗体包被板的制备、待检样品处理、检测步骤、废弃物处理和防止污染的措施。本文件适用于鸭坦布苏病毒病原的检测。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法。

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 鸭坦布苏病毒 Tembusu virus
鸭坦布苏病毒是一种急性传染病，以蛋鸭、种鸭产蛋骤然下降为主要临床特征、以出血性卵巢炎为主要病变特征。
3.2 酶联免疫吸附法 Enzyme-linked immunosorbent assay
酶联免疫吸附法是使抗原-抗体反应的高度特异性与酶标记技术相结合，将已知的抗原或抗体标记上酶示踪物质，利用酶对底物的高效催化作用，通过酶标仪测定酶分解底物产生的有色物质的光密度值，计算抗原或抗体的含量。
3.3 630nm吸光度值 Optical density at 630nm (OD值)
OD值表示被检测物吸收掉的光密度，是检测方法量的专有名词，检测单位用OD值表示，OD=lg(1/trans)，其中trans为检测物的透光值，因此又叫通光率。在630nm的波长下测OD值。

4 试剂和材料
4.1 试剂
鸭坦布苏病毒单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记鸭坦布苏病毒单克隆抗体、TMB底物显色液、终止液、阳性对照品、阴性对照品、样品稀释液、20倍浓缩洗涤液、碳酸盐包被液、封闭液。鸭坦布苏病毒单克隆体制备、纯化及HRP标记鸭坦布苏病毒单克隆体制备方法见附录A。