DB15/T2855—2023 马铃薯腐烂茎线虫的PCR检测技术规程 发布单位：内蒙古自治区市场监督管理局 发布日期：2023-01-28 实施日期：2023-02-28 前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草，由内蒙古自治区农牧厅提出，归口单位为内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC20）。起草单位包括内蒙古自治区农牧业科学院、中国农业大学、鄂尔多斯市农牧技术推广中心、内蒙古自治区农牧业技术推广中心、鄂托克前旗农牧业技术推广中心。主要起草人：席先梅、张力群、霍宏丽、陈伟、苗春乐、融晓君、路奇、尤俊文、张晓霞、贺小勇、孔庆全、张冬梅、田晓燕。 1 范围 本文件规定了利用qPCR检测技术对马铃薯腐烂茎线虫进行检测的试剂、仪器、样品处理、DNA提取、结果记录和样品保存等内容，适用于土壤和马铃薯植物样品中腐烂茎线虫的qPCR检测。 2 规范性引用文件 下列文件通过文中的规范性引用构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用： - GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 - NY/T1121.1 土壤检测 第1部分：土壤样品的采集、处理和储存 3 术语和定义 3.1 腐烂茎线虫 Ditylenchus destructor 腐烂茎线虫属于线虫门（Nematoda）、侧尾腺纲（Secernentea）、垫刃目（Tylenchida）、粒科（Anguinidae）、茎线属（Ditylenchus），是危害马铃薯的重要病原线虫，可引起马铃薯叶片黄化、萎蔫、块茎干腐等症状，导致产量和品质降低，参见附录A。 3.2 定量PCR Quantitative PCR 定量PCR技术（qPCR）是在PCR体系中加入可与靶标DNA结合的荧光基团，通过实时监测荧光信号的强度，对扩增产物进行定量分析，从而实现对目标DNA模板量进行定量。根据荧光信号来源，可分为染料法和探针法。 4 试剂和仪器 4.1 试剂 4.1.1 除特别规定外，所有实验用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682相关规定。 4.1.2 土壤提取缓冲液：1M Tris-HCl，0.1M EDTA，1.5M NaCl，2% CTAB，0.1M NaHPO4/Na2HPO4，pH=8.0。