DB23/T2735-2020 水稻穗颈瘟人工接种鉴定技术规程
Classification management rules for artificial inoculation identification of rice neck blast

ICS 65.020.20
B38
黑龙江省地方标准

发布：2020-12-03
实施：2021-01-02
发布单位：黑龙江省市场监督管理局

前言
本标准依据GB/T 1.1-2009的编写规则起草，由黑龙江省农业农村厅提出。起草单位为黑龙江省农业科学院生物技术研究所。主要起草人包括张国民、马军韬、邓凌韦、赵文生、宋显东、张丽艳、王春荣、胡亚军、王永力、张齐凤、高洪儒、张君、王南博、任洋。

1 范围
本标准规定了水稻穗颈瘟人工接种鉴定技术的术语与定义、环境条件、技术流程、评价标准和技术档案。本标准适用于水稻资源、品种（系）等材料对穗颈瘟抗性的人工鉴定。

2 规范性引用文件
下列文件对于本标准的应用是必不可少的，注日期的引用文件仅适用所注日期的版本，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用本标准。
GB 3095 环境空气质量标准
GB 5084 农田灌溉水质标准
GB 15618 土壤环境质量农用地土壤污染风险管控标准（试行）
GB/T 15970 稻瘟病测报调查规范
NY/T 3257-2018 水稻稻瘟病抗性室内离体叶片鉴定技术规程

3 术语与定义
3.1 穗颈瘟和枝梗瘟：稻瘟病的一种形式，发生在穗颈、穗轴和枝梗上，初期为暗褐色小斑点，后逐步呈环状或扩展，品种不同病部呈现黄褐色、褐色或黑褐色。早期发病形成全白穗或局部白穗，晚期发病则谷粒不饱满，千粒重下降。
3.2 谷粒瘟：稻瘟病的一种形式，发生在谷壳上，病斑椭圆形，中央灰白色，逐渐扩展至整个谷粒，严重时谷粒不饱满，米粒变黑。
3.3 人工接种：在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于水稻植株适当部位以致病的过程。
3.4 接种体：能够侵染水稻并引起病害的病原体。
3.5 注射接种：用医用注射器将一定量接种体注入水稻植株体内的接种方法。
3.6 对照品种：人工接种鉴定时以全感水稻品种为对照。
3.7 抗病性：植物体减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状。
3.8 病情指数：评价植物病害发生程度的综合性指标，包括发病率（感病样本数占总样本数百分率）和严重度（用分级法表示）。
3.9 水稻品种：包括对照品种和待测水稻材料。
3.10 产量损失率：评价植物受逆性条件影响后产量损失程度的指标，以穗为单位，计算公式为A=(B-C)/B×100%，其中A为产量损失率，B为同小区内未发病穗产量（kg），C为同小区内接种发病穗产量（kg）。

4 环境条件
鉴定时环境空气质量应符合GB 3095规定，土壤环境质量应符合GB 15618规定。

5 技术流程
5.1 鉴定圃建立与小区设计：选择易发病、较为中间的整块田块，有独立进排水口，在鉴定圃内种植对照和待测材料。依据水稻材料数量，布局若干小区，小区设置为2行区，行距30cm，株距12cm，每行15株，单株插秧，根据试验目的设置重复。
5.2 田间管理：水稻种植全过程在常规管理基础上创造利于稻瘟病发病条件，不带药移栽，适当增加氮肥（比生产用氮肥增加约30%），生长过程中可防虫、除草，但不得使用杀菌剂。水稻中后期若倒伏，应及时搭建竹架。
5.3 接种鉴定
5.3.1 接种体制备：稻瘟病菌接种于燕麦片番茄汁琼脂培养基，于25～27℃培养5～7天，用无菌水轻轻洗下菌丝（菌丝团要小）和分生孢子，将悬浮液均匀涂于新平板培养基上（培养基适当硬），每皿约400μL，超净工作台中吹干。置于25℃培养箱培养约35～40小时至培养基表面长出稀疏气生菌丝体，向菌落上加少量无菌水，用棉签轻轻擦去表面气生菌丝，并清洗培养基表面菌丝和分生孢子，晾干后罩上2层纱布，用皮筋绑好，在25℃光照条件下培养至大量分生孢子产生。