DB22/T2563—2016 甲型H1N1流感病毒核酸检测 Real-time PCR法 本标准根据GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015的规则起草，由吉林省卫生和计划生育委员会提出并归口，起草单位为吉林省疾病预防控制中心，主要起草人包括柳鸿敏、李静、吴东林和藏希卉。 本标准于2016年12月9日发布，2017年3月1日起实施。 1 范围 本标准规定了甲型H1N1流感病毒核酸检测的Real-time PCR方法，适用于甲型H1N1流感病毒的核酸检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注有日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本标准： - GB19489-2008 实验室生物安全通用要求 - WS/T230-2002 临床诊断中聚合酶链式反应（PCR）技术的应用 - WS285-2008 流行性感冒诊断标准 3 试剂与材料 3.1 试剂 3.1.1 水：无菌 RNase Free 水 3.1.2 RNA 提取试剂：RNA 提取试剂盒，一步法反应试剂盒 3.1.3 病毒采样液：内带拭子 3.2 阳性对照和阴性对照 3.2.1 阳性对照：甲型H1N1流感病毒毒株提取的核酸，且稀释至 Ct 值在 20～30 之间 3.2.2 阴性对照：无菌 RNase Free 水 3.3 引物及探针 3.3.1 流感病毒 A 型特异性引物及探针 a) FluA-Forward: 5'-GAC CRATCC TGTCAC CTC TGAC-3' b) FluA-Reverse: 5'-GGGCATTYTGGACAAAKCGTCTACG-3' c) FluA-probe: FAM 5'-TGCAGTCCTCGCTCACTGGGCACG-3' BHQ1 3.3.2 甲型H1N1流感病毒特异性引物及探针