ICS 65.020.20 CCS B15 DB23/T 2979—2021 黑龙江省地方标准 大豆对大豆拟茎点种腐病抗病性鉴定技术规程 发布：2021-09-08 实施：2021-10-07 黑龙江省市场监督管理局 发布 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》起草。 本文件可能涉及专利，发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由黑龙江省农业农村厅提出。 本文件由黑龙江省农业标准化技术委员会归口。 起草单位：中国科学院东北地理与农业生态研究所。 主要起草人：许艳丽、陆欣春、韩晓增、潘凤娟、邹文秀、李雪光、战丽莉、严君、陈旭等。 1 范围 本文件规定了大豆对由大豆拟茎点种腐病菌（Phomopsis longicolla Hobbs）引起的种腐病抗病性鉴定的术语与定义、病原菌接种体制备、大豆种子要求、种子抗病性鉴定及植株抗病性鉴定方法。 本文件适用于大豆对拟茎点种腐病抗病性的鉴定与评价。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期版本适用；不注日期的文件，其最新版本（包括修改单）适用。 GB 4404.2 粮食作物种子 第2部分：豆类 SN/T 4865 大豆拟茎点种腐病菌检疫鉴定方法 3 术语和定义 菌丝覆盖率：在种子抗病性鉴定中，被病原菌菌丝完全覆盖的种子数占供试种子总数的百分率。 4 病原菌接种体制备 4.1 培养基准备 采用酸性PDA培养基（APDA）：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g。冷却至45℃~50℃后，用过滤除菌的85%乳酸调节pH至4.5，倒平板备用。 4.2 接种体制备 挑取活化的大豆拟茎点种腐病菌菌丝接种于APDA平板，在25℃~28℃条件下，12h光照/12h黑暗交替培养，直至形成典型菌落，并符合SN/T 4865要求。 5 大豆种子要求 供试种子质量应符合GB 4404.2规定。 6 大豆种子抗病性鉴定 6.1 鉴定方法与计算 将病原菌接种于APDA平板，25℃暗培养5d。健康种子经75%酒精消毒3min，无菌水冲洗3次后风干，均匀置于菌落边缘接种培养。对照为未接菌处理。每处理10粒，3次重复。 培养条件：25℃暗培养5d。 第4天统计发芽势，第5天统计发芽率及菌丝覆盖情况。 公式： 种子菌丝覆盖率（%）=（被菌丝覆盖种子数/总种子数）×100 发芽势（%）=（第4天正常发芽数/总种子数）×100 发芽率（%）=（第5天正常发芽数/总种子数）×100 6.2 抗病性评价标准 以菌丝覆盖率、发芽势及发芽率降低综合评价： 菌丝覆盖率≥80%时，以覆盖率为主；<80%时，以发芽势与发芽率为主。 分级标准： 低于40.0%； 40.0%~59.9%； 60.0%~79.9%； 80.0%~99.9%； 100.0%。 7 大豆植株抗病性鉴定 7.1 植株准备 采用苗期切顶端法。在温室盆栽种植大豆，第一片三出复叶展开时，在茎节下方切断，供接种使用。 7.2 鉴定方法 病原菌在APDA培养基上25℃暗培养10d，在菌落边缘取直径5mm菌块接种于切口茎部，用封口膜包裹并保湿48h。接种30株，对照为无菌培养基块接种。 7.3 抗病性评价标准 接种后7d测量茎部病斑长度，并计算病斑占比： 茎病斑率（%）=（病斑长度/植株茎长度）×100 分级标准： 抗病：<4.0% 中抗：4.0%~5.9% 中感：6.0%~7.9% 感病：8.0%~9.9% 高感：≥10.0% 7.4 调查记录见附录表A、表B。