ICS67.080.20 B39 DB35 福建省地方标准 DB35/T1203—2011 银耳栽培种质量检验规程 Regulations of quality inspection for Tremella spawn 2011-10-28发布 2012-02-15实施 福建省质量技术监督局发布 前言 本标准依据GB/T1.1-2009的起草规则起草。本标准由福建省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：福建农林大学菌物研究中心、全国银耳标准化工作组。本标准主要起草人：温志强、刘新锐、董秀云、郑昭、谢宝贵、吴小平。 1 范围 本标准规定了银耳栽培种质量检验的术语和定义、真实性检验、纯度检验、活力检验及检验判定规则。 本标准适用于银耳栽培种质量的检验。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T1097-2006 食用菌菌种真实性鉴定 酯酶同工酶电泳法 NY/T1284-2007 食用菌菌种中杂菌及害虫的检验 DB35/T137.5 古田银耳菌种制作规程 DB35/T1021-2010 食用菌品种鉴别技术规范 DNA指纹法 DB35/T1022-2010 食用菌菌种纯度检测方法 DB35/T1026-2010 野生食用菌菌种分离与鉴定技术规范 3 术语和定义 NY/T1284-2007、NY/T1097-2006、DB35/T1026-2010界定的以及下列术语和定义适用于本文件。为了便于使用，以下重复列出。 3.1 银耳栽培种 经人工培养可供栽培使用的银耳菌丝与香灰菌的混合培养物。 3.2 银耳栽培种的真实性 指同时含有银耳Tremella fuciformis菌丝和香灰菌Hypoxylon stygium菌丝的菌种。 3.3 银耳栽培种纯度 银耳栽培种受其它生物污染的程度。 3.4 银耳栽培种的活力 指银耳栽培种的健壮程度。 3.5 害虫 各种为害食用菌的昆虫和螨类。[NY/T1284-2007,3.2] 3.6 核糖体转录间隔区 在真菌中，18S、5.8S、28S核糖体RNA的基因串联在一起，同时被转录，这三个基因之间被一段DNA序列隔开（ITS）。18S与5.8S之间、5.8S与28S之间的间隔区分别称为ITS1和ITS2。ITS序列具有较高的保守性，种内不同菌株之间的ITS序列同源性很高，但种间差异较大，可用于种的鉴别。[DB35/T1026-2010,3.9] 3.7 霉菌 具管状菌丝营养体并产生大量孢子的小型真菌。[NY/T1097-2006,2.1.10] 3.8 放线菌 分枝丝状的单细胞原核生物。[NY/T1097-2006,2.1.11] 3.9 酵母菌 营出芽方式繁殖的单细胞真菌。[NY/T1097-2006,2.1.12] 3.10 细菌 以裂殖方式繁殖的单细胞原核生物。[NY/T1097-2006,2.1.13] 3.11 菌龄 接种后菌丝在培养基中生长发育的时间。[NY/T1097-2006,2.3.22] 4 银耳栽培种的真实性检验 4.1 取样 用接种钩均匀取银耳栽培种表面白毛团及基部培养物，称取2g，放到预冷的研钵中。 4.2 DNA的提取 银耳栽培种DNA的提取方法按照DB35/T1021-2010中7.2 DNA的提取方法执行。 4.3 ITS扩增 ITS扩增按照DB35/T1026-2010中7.2.2.2 ITS-PCR的方法执行。所使用的ITS引物为ITS5和ITS4。ITS5：5'-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3'；ITS4：5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'。 4.4 ITS扩增产物的检测 ITS扩增产物的检测按照DB35/T1026-2010中7.2.2.3 ITS-PCR的方法执行。 4.5 ITS片段的回收 将扩增得到的ITS片段进行单一片段分别回收。 4.6 ITS片段的克隆与测序 ITS片段的克隆与测序按照DB35/T1026-2010中7.2.2.4 ITS片段的克隆与测序的方法执行。 4.7 ITS序列相似性计算方法 待检样ITS序列与标准菌株ITS序列匹配的碱基数除以标准菌株ITS序列碱基数，得到相似性百分比。 5 银耳栽培种纯度检验 银耳栽培种中的细菌污染、霉菌污染、酵母菌污染、螨虫为害检测按照NY/T1284-2007及相关标准执行。