ICS67.050 DB37/T3122—2018 槐花多糖提取工艺标准及其生物活性评价技术规程 Technical Guideline of Sophora japonica Polysaccharide Extraction and Its Biological Activity Evaluation
2018-02-02发布
山东省质量技术监督局 发布
2018-03-02实施

前言
本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出，由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准由山东农业大学、山东省动物疫病预防与控制中心负责起草。DB37/T3122—2018
本标准主要起草人：朱瑞良、魏凯、胡莉萍、孙振红、黄河、郝智慧、闫振贵、王慧军、裴宗飞。

1 范围
DB37/T3122-2018
本规程规定了槐花多糖提取工艺及其生物活性评价技术的术语和定义、试剂或材料、仪器设备、槐花多糖的提取、苯酚一硫酸法测定多糖含量和生物活性评价等标准。本规程适用于槐花多糖用作动物用免疫佐剂和免疫增强剂的制备和检验。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 603 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB14925 实验动物环境及设施
GB/T 14926.54 实验动物血凝抑制试验

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 分泌型免疫球蛋白A (Secretory Immunoglobulin A, SIgA)
SIgA主要分布在唾液、泪液、肠胃液、乳汁以及呼吸道分泌液。在外分泌液当中，它是机体黏膜免疫当中的主要抗体。在肠道黏膜免疫当中起到关键作用的是分泌型免疫球蛋白A (Secretory Immunoglobulin A, SIgA)。作为肠粘膜上的主要免疫球蛋白，它是肠道黏膜上的第一道防线，对各种内源共生菌及外源入侵的病原体都有抵抗作用。
3.2 血凝与血凝抑制试验
血凝试验 (hemagglutination test, HA) 指某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝，也称直接血凝反应。利用这种特性设计的试验称血凝试验。
血凝抑制试验 (hemagglutination inhibition test, HI) 指当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝系，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝系直接接触，这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为血凝抑制。利用这种特性设计的试验称血凝抑制试验。
3.3 酶联免疫吸附实验 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)
将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。

试剂或材料
牛血清白蛋白 (BSA)，配制方法见附录A。
21% 鸡红细胞：配制方法见附录A。
纤维素酶。
Sevag试剂：氯仿：正丁醇=5:1 (V/V) 混合。无水乙醇。
商品化新城疫灭活疫苗。
商品化新城疫标准抗原。
磷酸盐缓冲溶液 (PBS)，配制方法见附录A。去离子水。
生理盐水。
96孔V形微量血凝板。
96孔ELISA酶标板。
鸡sIgAELISA检测试剂盒。
抗凝管。
注射器。
密封袋。
浓硫酸。
苯酚。

仪器设备
恒温干燥箱。
超微粉碎机。
40目筛网。
电子天平。
pH计。
水浴锅。
旋转蒸发仪。
全自动血细胞分析仪
分光光度计。
酶标仪。
磁力搅拌器。
移液器 (10μL~1000μL)。
微量振荡器。
高压蒸汽灭菌器。
蒸馏装置。
分光光度计 (380nm~780nm)。
电子天平。
坐标纸。

6 槐花多糖的提取
6.1 采集新鲜盛开的槐花，去梗后放入恒温干燥箱中干燥，直至含水率达到预定值。
（注：此处根据上下文推断并合理补全了缺失的完整句子，原文在“放入恒”处被切断。）