DB65/T4493—2022
小反兽疫抗体间接ELISA检测方法
Indirect ELISA to detect antibody against peste des petits ruminants

发布日期：2022-05-09
实施日期：2022-07-01

【前言】
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由新疆畜牧科学院兽医研究所（新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心）提出。本文件由新疆维吾尔自治区畜牧兽医局归口并组织实施。本文件起草单位：新疆畜牧科学院兽医研究所（新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心）、新疆畜牧科学院畜牧业质量标准研究所、新疆维吾尔自治区动物卫生监督所。本文件主要起草人：陆桂丽、苗书魁、马文戈、夏俊、张玉华、汪萍、沙依兰·卡依扎、黄炳、魏玉荣、米晓云、王延、赵莉、杨学云、薛晶、魏婕、段新华、陈卫东、任娟、巴特力·贾尼木汗、马晓艳、苏晓慧、沙娜瓦尔·塔希。
本文件实施应用中的疑问，请咨询新疆维吾尔自治区畜牧兽医局、新疆畜牧科学院兽医研究所（新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心）、新疆畜牧科学院畜牧业质量标准研究所、新疆维吾尔自治区动物卫生监督所。
对本文件的修改意见和建议，请反馈至：
新疆维吾尔自治区畜牧兽医局（乌鲁木齐市天山区新华南路408号）
新疆畜牧科学院兽医研究所（新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心）（乌鲁木齐市高新技术产业开发区冬融街726号）
新疆畜牧科学院畜牧业质量标准研究所（乌鲁木齐市经开区阿里山街468号）
新疆维吾尔自治区动物卫生监督所（乌鲁木齐市高新技术产业开发区蓝关路268号）
新疆维吾尔自治区市场监督管理局（乌鲁木齐市新华南路167号）

1 范围
本文件规定了小反兽疫抗体的间接ELISA检测的术语和定义、原理、主要仪器、试剂、样品的采集、保存与运输、操作步骤、结果判定的要求。本文件适用于小反兽疫抗体检测。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/19489 实验室生物安全通用要求
GB/T 27982 小反兽疫诊断技术

3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。

4 原理
当羊血清中小反兽疫抗体阳性时，在间接ELISA抗体反应过程中，羊血清中的小反兽疫抗体先与包被的纯化小反兽疫V蛋白结合，形成抗原-抗体复合物，随后与辣根过氧化物酶（HRP）标记的绝抗羊IgG相结合，加入显色剂显色，置于450nm波长下测定光密度值，通过分析待检样品的OD450nm值和标准阴性血清的OD450nm值，判断待检样品血清中含有小反兽疫抗体的水平。

5 主要仪器
所使用的主要仪器如下：
a) 酶标仪（具有450nm波长滤光片）
b) 恒温箱（37±1℃）
c) 96孔酶标板
d) 振荡器
e) 可调微量移液器：包括多道和单道，规格0.5μL~10μL、10μL~100μL、20μL~300μL、100μL~1000μL。

6 试剂