ICS65.020 CCSB16 内蒙古自治 区 DB15 地方标准 DB15/T3148—2023 油菜籽携带黑胫病菌分子检测技术规程Technicalcode of practice for molecular detection ofleptosphaeriaspp.fromcontaminatedoilseedrape地方标准信息服务平台 2023-08-25发布 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 2023-09-25实施 地方标准信息服务平台 前言 DB15/T3148—2023 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC20）归口。本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、特泥河农牧场有限公司、巴彦漳尔市乌拉特中旗现代农牧事业发展中心、呼和浩特市园林植保站。本文件主要起草人：宋培玲、李子钦、燕孟娇、杨永青、贾晓清、皇甫海燕、霍宏丽、赵丽丽、郭晨、皇甫九茹、张英、袁喜丽、斯琴、高树娟。地方标准信息服务平台 地方标准信息服务平台 1范围 油菜籽携带黑胫病菌分子检测技术规程DB15/T3148—2023 本文件规定了油菜籽携带黑胫病菌的分子检测方法，主要包括样品DNA提取、PCR扩增检测、琼脂糖凝胶电泳、结果判定。 本文件适用于油菜籽携带黑胫病菌的检测。2规范性引用文件 2 本文件没有规范性引用文件。 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 油菜黑胫病phomastemcankerofrapeseed由小球腔菌属真菌Leptosphaeriamaculans或Leptosphaeriabiglobosa侵染引起的油菜病害，危害叶片和茎秆。 L.biglobosa致病性较弱，侵染油菜叶片和茎秆后，形成黑色病斑，病斑上散有零星的小黑点（分生孢子器），叶片上病斑的周围可见有黄色晕圈L.maculans致癌性较强，侵染油菜叶片后，形成大的、黑褐色病斑，上面分布有较多的小黑点（分生孢子器），后期在茎基部也能形成病斑，从而造成茎基部的腐烂。主要仪器设备和试剂 4 4.1主要仪器设备 服务平 高压灭菌锅、超纯水系统、制冰机、水浴锅、冰箱、离心机、涡旋振荡器、移液器。4.2主要试剂 4.2.1DNA提取试剂：QIAGENsminikit提取试剂盒，CTAB提取液（1.4mol/LNacl，100mmol/LTris-HClpH8.0，20mmol/LEDTApH8.0，2%CTAB），氯仿，异戊醇，醋酸钠，另丙醇，乙醇。4.2.2PCR检测试剂：10×PCR缓冲液，Taq酶，dNTP，ddH0。4.2.3凝胶电泳试剂：琼脂糖，TAE，loadingbuffer，核酸染料。5样品DNA提取 1