ICS 11.200
B41
备案号：58785-2018

江苏省地方标准
DB32/T 3395-2018

鸡孵化厂菌落总数检测与评判
Detection and evaluation of the total number of colonies in incubation plant

2018-05-10 发布
2018-06-10 实施

江苏省质量技术监督局 发布


前言

本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由常州市质量技术监督局提出。
本标准由常州市农业委员会归口。
本标准起草单位：江苏立华牧业股份有限公司。
本标准主要起草人：许长娣、黄祖芬、袁青妍、薛亚梅、李得梅、钱程、熊平文。


1 范围

本标准规定了孵化厂的种蛋表面、空气、水质、绒毛和其它设施设备表面的菌落总数检测方法与评判标准。
本标准适用于孵化厂内部的菌落总数检测与评判。


2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修订版）适用于本标准。
NY 5027-2008 无公害食品 畜禽饮用水水质


3 种蛋表面

3.1 采样与检测
3.1.1 采样位置：对于消毒前种蛋，在一个蛋车的最上面一层蛋盘、最中间一层蛋盘、最下面一层蛋盘各取每个蛋盘最中间一枚种蛋，共采取5个蛋车的样本。5个蛋车共计采样15枚种蛋。种蛋消毒过后，采用同样的方法采样。

3.1.2 采样方法：将特制规板的圆形部分（直径为3.5cm，面积为9.62cm²）进行火焰灭菌，待冷却后将规板套在待检测种蛋的大头部分，在装有5mL灭菌生理盐水的玻璃试管中浸湿灭菌的棉签，在玻璃试管壁上挤去多余的盐水，然后在规板范围内滚动棉签，涂抹待检测蛋表面30s完成一个采样。规板图示见附录A。折去棉签手持部位，使采样部位落入5mL灭菌生理盐水玻璃试管中，并与生理盐水充分混合，带回实验室检验。

3.1.3 检测要求：对于消毒前种蛋，吸取用灭菌生理盐水稀释10倍的样品水溶液0.5mL，注入直径9cm的灭菌平皿中，然后倾注20mL已融化并冷却到40℃~50℃的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水溶液与培养基充分混匀。每次检验时，应用单独一个平皿只倾注营养琼脂培养基作空白对照。对于消毒后的种蛋，直接吸取0.5mL样品水溶液，处理方法同前。在37℃培养箱内培养24h，进行细菌计数。

3.2 菌落总数计数（CFU/cm²）
3.2.1 消毒前种蛋单位面积菌落总数计算方法如下：
N = (A × 100) / 9.62
备注：式中 N：种蛋表面每平方厘米菌落总数；A：培养皿中的菌落数。

3.2.2 消毒后种蛋单位面积菌落总数计算方法如下：
N = (A × 10) / 9.62
备注：式中 N：种蛋表面每平方厘米菌落总数；A：培养皿中的菌落数。

3.3 判定
判定标准详见表1。

表1 种蛋菌落总数判定标准
采样项目 | 消毒前种蛋 | 消毒后种蛋
每平方厘米菌落总数（CFU/cm²） | <400 合格；≥400 不合格 | <8.7 合格；≥8.7 不合格


4 空气

4.1 采样位置及方法
4.1.1 采样位置
在以下位置进行空气采样：
a) 孵化机：入口和出口
b) 孵化厅：两头和中间
c) 出雏机：左右两边
d) 出雏厅：两头和中间
e) 苗鸡房：四角和中央
f) 疫苗间：四角和中央
g) 种蛋室：四角和中央

4.1.2 采样器皿
提前24h用平板制作好普通营养琼脂培养基，密闭备用。

4.1.3 采样方法
在上述采样位置，各放置一直径9cm的普通营养琼脂培养皿，打开培养皿盖暴露15min后盖好盖子回收。

4.2 检测
4.2.1 回收的平板在37℃培养箱中培养24h。
4.2.2 计算平板上的菌落数。
4.2.3 菌落总数判定标准见表2。

表2 空气菌落总数判定标准
采样位置 | 菌落总数（CFU/皿） | 判定
苗鸡房 | <350 | 合格；≥350 不合格
出雏机/出雏厅 | <30 | 合格；≥30 不合格
孵化机/种蛋室/疫苗间/孵化厅 | <20 | 合格；≥20 不合格


5 绒毛

5.1 采样方法：使用灭菌样品袋采集出雏机内的绒毛2g~3g，带回化验室检测。
5.2 细菌培养：无菌称取0.5g绒毛与50mL无菌蒸馏水混合1h，过滤去除绒毛。取1mL过滤后的水溶液倒在营养琼脂平板上，在37℃培养箱中培养24h。
5.3 判定标准：单位面积菌落总数小于1.0×10⁴ CFU/cm²，判定为合格。


6 加湿水

加湿水按照NY 5027标准进行判定，菌落总数小于10 MPN/100mL判定为合格用水。


7 其它孵化设施设备表面

7.1 采样位置
（注：原文此处内容缺失或截断，仅保留标题）