ICS11.200 B41 备案号：58785-2018 江苏省地 DB32 方标准 DB32/T3395-2018 鸡孵化厂菌落总数检测与评判 Detection and evaluation of thetotalnumber of colonies in incubation plant2018-5-10发布 江苏省质量技术监督局 发布 2018-6-10实施 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由常州市质量技术监督局提出。本标准由常州市农业委员会归口。本标准起草单位：江苏立华牧业股份有限公司。DB32/T33952018 本标准主要起草人：许长娣、黄祖芬、袁青妍、薛亚梅、李得梅、钱程、熊平文。I 1范围 鸡孵化厂菌落总数检测与评判 DB32/T33952018 本标准规定了孵化厂的种蛋表面、空气、水质、绒毛和其它设施设备表面的菌落总数检测方法与评判标准。 本标准适用于孵化厂内部的菌落总数检测与评判。2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修订版）适用手本标准NY5027-2008无公害食品畜禽饮用水水质3种蛋表面 3.1采样与检测 3.1.1采样位置：对于消毒前种蛋，在一个蛋车的最上面一层蛋盘、最中间一层蛋盘、最下面一层蛋盘各取每个蛋盘最中间一枚种蛋，共采取5个蛋车的样本。5个蛋车共计采样15枚种蛋。种蛋消毒过后，采用同样的方法采样。 3.1.2采样方法：将特制规板的圆形部分（直径为3.5cm，面积为9.62cm2）进行火焰灭菌，待冷却后将规板套在待检测种蛋的大头部分，在装有5mL灭菌生理盐水的玻璃试管中浸湿灭菌的棉签，在玻璃试管壁上挤去多余的盐水，然后在规板范围内滚动棉签，涂抹待检测蛋表面30s完成一个采样。规板图示见附录A。折去棉签手持部位，使采样部位落入5mL灭菌生理盐水玻璃试管中，并与生理盐水充分混合，带回实验室检验。 3.1.3检测要求：对于消毒前种蛋，吸取用灭菌生理盐水稀释10倍的样品水溶液0.5mL，注入直径9cm的灭菌平皿中，然后倾注20mL已融化并冷却到40℃~50℃的营养琼脂培养基，并立即旋摇平血，使水溶液与培养基充分混匀。每次检验时，应用单独一个平血只倾注营养琼脂培养基作空白对照。对于消毒后的种蛋，直接吸取0.5mL样品水溶液，处理方法同前。在37℃培养箱内培养24h，进行细菌计数3.2菌落总数计数（CFU/cm2） 3.2.1消毒前种蛋单位面积菌落总数计算方法如下：N=（A×100）/9.62 备注：式中 5 N：种蛋表面每平方厘米菌落总数A：培养Ⅲ中的菌落数 3.2.2消毒后种蛋单位面积菌落总数计算方法如下：N=（A×10）/9.62 备注：式中 N：种蛋表面每平方厘米菌落总数A：培养Ⅲ中的菌落数 3.3判定 判定标准详见表1 表1 采样 消毒前种蛋 消毒后种蛋 4.空气 4.1采样位置及方法 4.1.1采样位置 在以下位置进行空气采样： a) b) c) d) e) g) 孵化机：入口和出口 孵化厅：两头和中间 出雏机：左右两边 出雏厅：两头和中间 苗鸡房：四角和中央 疫苗间：四角和中央 种蛋室： 4.1.2采样器Ⅲ 四角和中央 种蛋菌落总数判定标准 每平方厘米菌落总数（CFU/cm2）<400 ≥400 8.7 ≥8.7 提前24h用平板制作好普通营养琼脂培养基，密闭备用。4.1.3采样方法 DB32/T33952018 判定 合格 不合格 合格 不合格 5 DB32/T33952018 在上述采样位置，各放置一直径9cm的普通营养琼脂培养血，打开培养皿盖暴露15min后盖好盖子回收。 4.2检测 4.2.1回收的平板在37°C培养箱中培养24h。4.2.2计算平板上的菌落数。 4.2.3菌落总数判定标准见表2。表2 采样 苗鸡房 出维机/出雏厅 孵化机/种蛋室/疫苗间/孵化厅 雏鸡绒毛 5 空气菌落总数判定标准 菌落总数（CFU/cm2） 350 ≥350 <30 ≥30 <20 ≥20 5.1采样方法：使用灭菌样品袋采集出维机内的绒毛2g~3g，带回化验室检测。判定 合格 不合格 合格 不合格 合格 不合格 5.2细菌培养：无菌称取0.5g绒毛与50mL无菌蒸馏水混合1h，过滤去除绒毛。取1mL过滤后的水溶液倒在营养琼脂平板上，在37℃培养箱中培养24h。5.3判定标准：单位面积菌落总数小于1.0×10*cFU/cm2，判定为合格。3加湿水 6 加湿水按照NY5027标准进行判定，菌落总数小于10MPN/100mL判定为合格用水。7其它孵化设施设备表面 7.1采样位置 5