DB15/T3323—2024
番茄抗颈腐根腐病室内鉴定技术规程
Technical code of practice for evaluating resistance of tomato against Fusarium oxysporum f.sp. radicis-lycopersici

发布日期：2024-01-25
实施日期：2024-02-25
发布单位：内蒙古自治区市场监督管理局

前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（SAM/TC25）归口。本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古农业大学、内蒙古包头市九原区农业技术推广中心、辽宁省绥中县农业事务服务中心。本文件主要起草人：杨永青、王永、刘燕、高婧、李正男、孙平平、张磊、张俊、党媛玥、宋培玲、贾晓清、康立茹、乔慧蕾、刘富贵、白金。

1 范围
本文件规定了番茄抗颈腐根腐病室内鉴定方法，包括主要仪器、培养基的配制、分生孢子液的制备、鉴定材料的准备、人工接种、室内抗性鉴定。本文件适用于在室内条件下对番茄幼苗进行颈腐根腐病抗性鉴定。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
NY/T 1858.3《番茄抗枯萎病鉴定技术规程 第3部分：番茄抗枯萎病鉴定技术规程》

3 术语和定义
NY/T 1858.3界定的以及下列术语和定义适用于本文件。
3.1 番茄颈腐根腐病 (Fusarium crown and root rot)：由尖孢镶刀菌番茄颈腐专化型（Fusarium oxysporum f.sp. radicis-lycopersici, FORL）引起的一种番茄土传病害，其主要症状为：初始发生时主根基部开始褐变，后扩展到土壤与植株茎基部交接处，环绕茎基部有浅褐色至深褐色病斑；严重时维管束褐变和根部腐烂；苗期发病时茎基部萎缩变褐，可从发病部位折倒而死亡；成株期发病重时导致全株性萎蔫。

4 主要仪器
高压灭菌锅、超纯水系统、恒温培养箱、超净工作台、光学显微镜、恒温振荡摇床、电子天平、血球计数板等。

5 培养基的配制
5.1 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：将马铃薯洗净去皮切块，称200g加1000mL蒸馏水，煮沸10min～20min，用四层纱布过滤，加入20g葡萄糖和20g琼脂粉，补加蒸馏水至1000mL，121℃高压灭菌20min。
5.2 马铃薯葡萄糖液体培养基（PDB）：同5.1中PDA的配制方法，不加琼脂粉。

6 分生孢子液的制备
将已纯化并鉴定的番茄颈腐根腐病菌接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）上培养5d~7d，从培养皿3/4处打取3块直径为5mm的菌块置于盛有100mL马铃薯葡萄糖液体培养基（PDB）的500ml三角瓶中，25℃，150 rpm/min振荡培养3d，用4层无菌纱布过滤去除菌丝体获得分生孢子液，利用血球计数板计数，用无菌水调节分生孢子液浓度至1×10⁶个/mL，备用。

7 鉴定材料的准备
育苗基质预先装入不锈钢托盘中，在105℃烘箱中干热灭菌3h，自然冷却后加一定量无菌水拌匀（基质含水量约为50%），装入21孔加深穴盘。选取饱满的种子，放入50℃～55℃的温水中浸种15min～20min，播种于穴盘中；待幼苗生长至3～4叶期时，进行室内人工接种。

8 人工接种
8.1 鉴定对照材料
设“Moneymaker”番茄作为感病对照品种。
8.2 接种方法
将水果刀（或手术刀）插入幼苗周围的基质中，对植株侧根进行伤根处理，然后将30mL病原菌孢子液灌入其根系周围；将穴盘置于18℃～22℃，16h光照、8h黑暗人工气候室中常规管理。每个材料设置3次重复，每次重复接种20株幼苗；同时设置接无菌水的植株为对照。

9 室内抗性鉴定
9.1 发病情况调查
接种30d后，将株根系清洗干净，按照附录A中的图A.1中病情分级标准和表A.1中各病情级别标准进行发病等级调查。
9.2 病情指数计算
根据公式（1）计算病情指数：
DI = [∑(DVi × ni) / (DVx × N)] × 100
式中：DI为病情指数 (disease index)；DVi为病情级别代表的数值，分别为0、1、2、3、4；ni为各病情级别的植株数；DVx为最高病情级别的代表数值，本文件中为4；N为同一种材料调查的总株数。
9.3 抗性评价
按照下列抗性鉴定标准对供试材料进行抗性评价：
免疫：DI=0；
高抗：0 < DI < 12.5；
抗病：12.5 $le$ DI < 25；
中抗：25 $le$ DI < 50；
感病：50 $le$ DI < 75；
高感：75 $le$ DI $le$ 100。
9.4 鉴定有效性判定
感病对照材料“Moneymaker”的病情指数 $ge$ 50时，该批次抗性鉴定视为有效。