ICS65.020.30 CCSB41 内蒙古自治 区 DB15 地方标准 DB15/T2742——2022 羊溶血性曼氏杆菌分离与鉴定操作规程Operating procedures for isolation and identification of sheepMannheimia haemolytica 地方标准信息服务平台 2022-07-29发布 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 2022-08-29实施 地方标准信息服务平台 前言 DB15/T2742—2022 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 本文件由内蒙古畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）归口。本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院，本文件主要起草人：张月梅、赵世华、宋越、白帆、王娜、戴伶俐、张帆、杨斌、刘威。地方标准信息服务平台 地方标准信息服务平台 1范围 羊溶血性曼氏杆菌分离与鉴定操作规程本文件规定了羊溶血性受氏杆菌分离与鉴定的操作方法。本文件适用于羊及其产品中溶血性曼氏杆菌的分离鉴定。2规范性引用文件 DB15/T2742—2022 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注口期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 溶血性曼氏杆菌Mannheimiahaemolytica，Mh巴氏杆菌科曼氏杆菌属的微生物，球杆状或短杆状菌，两端钝圆，革兰氏染色阴性，典型两端深染，地方标准信息服 中间浅，单个或成双在，无鞭毛，有荚膜，不形成芽孢4操作步骤 4.1方法概要 检验程序的流程示意图见附录A。4.2试剂和材料 4.2.1除另有规定，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682的超约水。4.2.2普通琼脂绵羊血平板。称取牛肉膏3.0g，蛋白陈10.0g，氯化钠50s，磷酸二氢钾1.0g，琼脂15.0g超纯水1000mL，混合，加热溶解，调pH至7.6，115℃灭菌15min，冷却至45℃时加入无菌脱纤维绵羊血50mL并在无菌操作要求下倾注约20mL至无菌平皿中。加盖后主室温放至凝固。制备好的培养基平皿宜在2℃～8℃保存。4.2.35%马血清的TSB。称取胰酪陈15.0g，大豆木瓜蛋白酶水解物5.0g，氯化钠5.0g，超纯水950mL，混合，微热溶解，调节pH值为7.3，121℃高压蒸汽灭菌15min，冷却至约60℃时添加50mL马血清，混匀。制备好的培养基宜在2℃～8℃保存。4.2.4麦康凯琼脂培养基。称取蛋白陈20.0g，乳糖10.0g，牛胆盐5.0g，氯化钠5.0g，中性红1