本标准规定了饲料中林可霉素的测定方法。本标准适用于浓缩饲料、配合饲料中林可霉素的鉴别和含量测定。采用本方法鉴别果树可霉素的最小含量为10mg/kg。采用本方法测定林可霉素定量的检测限为每千克饲料中含10 000林可霉素效价单位。 GB/T 8381.3-2005 饲料中林可霉素的测定 GB/T8381.3-2005 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS85.120
中华人民共和国国家标准
GB/T 8381.3-—2005
饲料中林可霉素的测定
Determination of lincomycin in feed2005-09-05发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2006-02-01实摊
CB/T8381.320C5
本弥准参专了美巨公职分析化学家协会（AOA公定分析方法.3！\间释中的样可率素微生物学方云\和回内外有关杯川套露产检验等察料-根谣我国间料工业的实际消况制定，本标准的除录A为现范性附录。
本标准中华人以共和而表部摄出本标准山全区桐料1业标准化技术委显会间。本标准日辽文省普药间科监察所负卡起岸，上林省音药监案所和回索料监督检验测试中心（北凉参起草。
本标难1要起中人陈带带、些乐、草在常，刘工红，苗轻海、肖男、战不，全广生，刘顶民，核慢1范围
饲料中林可毒素的试定
本标准规定广划料中林可每的测方法。本标准污旧于浓泛料、配合饲料中林川霉素的整别含量测定，采用本方法鉴别技可将索的最小含量为10ng/kg：GB/T8381.3—2D05
采用本力达测定探以案定量的检德限为每下克饲料合1u外可乘京效价单位。2规范性引用文件
下到文件中的录款通过本标准的引用而成为本标准的条款，是注d期的引用文件，其随后所有的候改单（不包活勘误内奔或悠订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协仪的各力研究足合川使用决些义性第效新版本。凡是不注日期的！用文件，其最新版个适用于本标带。GH1146S，1料兴拉
中华人民共和件药典（2C09年版一部）3术语和定义
下列末语和定义适用于本标准。3. 1
林可罩事效价单收
用微生物法测言书林可海素的生物店性单节，用表示，林川求十所含的抗凿活性部分的质早与生物括性单位的关系为1mg相当于：000林可案效价单。4原理
在酸生条件下、用一氨中烷险去料中能级深人其中的杂，调节流惯尽碱性，用二氟中烷提取溶商中的林可医，纷浓缩，部制转换，制成试样游泌。试样溶减在硅胶薄层板上用两种展下剂股万，与标准比出较R：值，确认试样中是替含有林可世素用微生物标准曲线法测定含盘5试剂和溶液
除非另有说明，在本分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水。林河垂末标准品：符台牛华人昆共和国善药典>2000年版一部的要求，5.1
5.2康黄微球菌Mococsr)MCX2c
5.3中醇、
5.4正己烷。
5. 5一,,甲烷。
5.6祥校G萍层层析爪
58酸浮酸9水至13，滤
5.9垫晚中11.
0氨游液：取漆氨案减50ml.加水至100m.混划5.10
5.11复滴液：取浓算溶液5mT.划水至100mI.混匀。1
GB/T 8381.3—2005
5.12元剂：,丁雨-丙配-水,9,3—2.5+1.5.13展T剂3,三氯甲烷-甲厚浓氧诺液，1十1十1症个，振猛，静置至上下两层均登消：分取下层准合泌咨用：
5.14林可碳案杯痛冲液：圾称可每素标推品SCm加中醇2ml.快解辉，用一氯目烷稀至报度为1g/mL，当大制：供签别用，
5.15林可要或标准端备液：称收0tg林小乐紫标准品，物确至0.1m用水群辉并稀释成约含」00u/m1游最：在2~10可保存？天，供含量测定用，收器及设资
G.1分析人平感量.231。
6.2天平始载0.01g。
6.3量药器，
6,4离心机
6.5 旋特苯发器。
6.6超卢范发生能，
6.了施涡点微型润户器。
E日尽热加品求锅，
6.3注射群，个玻离.5mL.配有9*针头。6. 10 浓端瓶,资4 10 mLH案,底部其 3. 2 mT 刻度压些6.11玻璃板，现格20cm×10cm。6.12感开相，立或，双错，或格1Ccm5cm入2m。6.137低双媒，白径药50mm1.高1m=-17m；符今中人民共和国学商典>2300年版一部的要成，
6.14不锈证/些高10.0mm士0.1mm，外径8.3mm5.1mm.内径5.0m=0.1mm符中华人民共国兽特32000年版部的要求6.15惯湿养箱。
G. 16高与灭菌销。
6.17范标F尺（精度.92m)成冲菌图测量仪：7试样的制备
将接（GH/T14g99.1取科射样品，四分法缅分，最约2ccg.经粉碎，企部过1mum孔筛，混匀.装人老口新中用，
8鉴别
8.1净化
8. 1. 1 提取
你取0试样准确到.0)1只塞影用（5.探30过滤收格源·在旋转蒸发端（e.5)上干减儿蒸发至约mL。8.1.2转移
将浓缩夜转移到11ml离肾.吊2m！中欧分次冲沈兼&瓶，洗液并人离心管.立60%水济(68)宁游1。加0I/盐落液（5.8)2mL.超声1mi.使什可密素溶解，穿范转格到与离心肾再向残清中加0,n01/1.盐降落液0.5，超声30s。2
8.1.3洗涤
GB/T 8381.3-—2005
台并两次落液%.1.2>，加人1mE.正己统（5.1）于微型泻合器（6.7)上合36弃去上是正已悦，用？-ml.二载十统（5.5)分三次微涤醛提双液(3.2、2m[），每次混食305,日注射器(6.9>吸去下二氧甲死，如果H现乳化现案，可于31离心5rmi辰除乳化，惯溶液分会。3.2武样露游的制管
用氮穿没(5.11)期节酸准收液(3.1.3)至pH10,用7L二氯甲烷分=次（3、22ml)提取熔策的林蛋素，每达混会1mir.吸出下层一氟中篇提取滋，合并到浓循版（e.1C>中，在30水浴中蒸十，放冷至宝温后加人0.2m工二氮甲烷第解残适，留微薄层层析用：当天倪用。8.3测定
8.3.1薄品板的制备
股硅疫（3，6）.刘水约24mL，耐照2mir至量效状，销成三决博层摄（6，1），过室避十烟厅，于05活化h，收十燥器中各用。一面内说用。8.3,2点样
收两块冲层报（8.3.二）.在死下端2cm处外为基线点样：通块板各点一个样点：50μL林可案素标证落滋5.14）,2:L试样落般（%.?1利25L校可华亲标准游波，5试样辫微，名点间臣商底不小于m.
日.3.3展开
在此个展并请内分别例人10ml.并剂15,12)和10m！展并剂2(5.31.游点灯偿的州米薄板分别互装有底开剂的底于格中（不没人展于户！.预地和？再没人展开剂中展开m取击，通风挥下.
日. 3. 4显影
将展开斤的薄后板放胃在充满碘（7效气的密闭容送内：意妮紧：薄层板上的林可每素标准溶波斑点凝断显现直至清所川乐，取出薄层板立却观案。8.4观景与判定
比较尊层板下备效点方假高及酸色，学定方据妇：在两次薄层板上.，试样择液在与标准落被脏点对应处均无脏点出现，且视合加样点的期点颜色比标汇溶液册点浅，判定试样中林可素阴性！内决薄尺版，具中一决版上的试指保没左与杯准率液班点对应处光求点出现，而另一失校出现斑点，判定成样中林可垂索现性一在两块薄层版【.如试样游就在与标隆溶波斑点欢成处均口现斑点，合加样点显现-个土灶点（标准品落液4最大的、题色成蛋的班点对应处）且所显现的庭点与标难确成班点的完置改色相同司，能判定称叫豪阳性，维以下青量测是。9含量测定
9.1菌悬液的制备
以萨英征球菌（.2的吉养琼脂斜清养物.接种于盛有声养琼指培养基（第A.1的培苏流中在262°*24b或采用适当方法制备的科面：币u.！%灭苗氧化钠激（第A，：单将菌吉洗日造1冰摘温产（人宜超两周）。9.2双踩的制备
成平拨培养茶（第A.5卓)加热融化，冷却率(0士1C刘人站量菊悬（，1以参考旅度标准作游效所至扩菌图直在18.5 rm士mm为宜\:必安时.每1m养基中可如人他错游液第4.3章2mT播均.每1双磷（6.13)LI人1Gml.,均与挪布.效水平台上冷却.待培养基凝周后，游双媒例益于4它冷1以，临前出在41个双碟内半行为2.8cm因周上等距商3
GA/T8381.3--205
6个不诱据小些(6.-4)。
9. 3标准曲线的制备
9.3.1标准工作游液
量取林F孕素标准请务(5,15)，用磷晚盐冲液（p117.5)稀需使成0.15u/uL、.30u/m!..0.6Ju/mL1.20u/inL2.4Uu/mL浓废的标准工作溶液，以0.60u/n:L为象考浓度标准工作落波。9.3.2培
收当天制备好的双狱（9.2>半为分为5组，标雅工作液（9.3.11每一微庞为1判，个双媒的5个不添制小什，位的个滴划整考浓度标谢工件滑授，另外，个滴加该组标准工作游液，每组滴至少3个双，于36~37塔16h~18h
9.3.3标准曲据
测查务组参考浓度标痛下作率液和设组标准.作格较抑函图数值，分别计算半均值，再计+算所有双供势求座标推工作落液拆的围的总与伯作,为停正值，各依度组的抑菌圈激值按试(1)修正；A, =B, -B 4
武中：
4，该浓度杯谁工作率差修正后的抑菌照数值B.修正值
—核浓度组中参普浓度标准工作滑波所至抑菌读数平均A该限度标准1作避液整删读教平均值，.? 1)
以各卧溶液裁盘的对数与该组落液被惨正后的抑菌阐数值作或性回归，求山同归力程。柜关系数r小小于.ss。此内容来自标准下载网
9.4试样落液的制备
9.4.1控取
称取15gu推（），描确至-0mg，胃152ml.锂形瓶中，准碳人0.1mol/.盐酸-甲醇（:.9）50ml据据anmin.转多至1lmL离心管中3)1/min离心bm.n9. 4. 2净化
准确量双离心含中的上清变（9.4.15到25mL分满人0.ml.正已烷，二氧用烧，旋摇心去下层二缴币烷，反操作的饮月数落液5，10)调“分该漏斗中溶减的H值至约1C必要时可间箍中加一滴酚函指不满，帮助确以），加入10mI.一氯甲烷，辨握提取1mir.，于细分凹下层二然甲烷，反友操作三政。9. 4. 3试样溶液
台并三氯甲烷提取绒于施转燕发山，低于U乙诚压热下，量眼罐够盐战冲够适最到然发瓶中，起声不于2in，倪炭酒中的林可每本完全错出准确定容（爱浮液巾林可录款的浓在3，15u/-2.4C之间到式样游漫，于光天使用9.5剩定
取与标准曲线同时制备的至少3个双操，标准山载的制备方法（9.3)分别滴细试样游做（9.1.3）和参考依废标准.作举液，与标雅曲线时案作利培养：15判定与结果计章
10.1判定
试择阅没不产生抑菌，判定怀可教医性：一证箱落没产牛因，判定林可需案作并计算舍盘。10.2结果计算
用回山力程求山标爬工作落液警考波度刘应的抑菌图数值作为烤止信，抵式)校止试样猝液抑南4
图读效的斗与值，再出回归方和求出试详溶减中恢可来衰的变则他要（）。试栏可每款的含量按式(2)计算：w-xrx1ou
W—成拦中核可要素的告量，色为林可露案效价单位每于点（u/k)：GH/T8381.3—2005
试栏容中林可箱素的实诺，单位殊可每系效价单位每笔升（um）：试栏的释俯嫩：
河一，试质，单位为克（g）
测定结果用平行测定物算术平为值表.保留至整数位11
蓝复性
同一操省对同一成样同时两次乎行测定所等结果的相对偏差不大于20长。5
心H/18381.3—2005
A.10,9%灭菌氧化钠溶液
时录A
【规范性附录”
溶夜受培养基的配置
取氯化制！g，水使或1m[.然过分装.115火30ri。A,2烘睡益缓冲液(PH'T.E)
必磷酸划二钾 . 59 g 与磷慢二氢扫 0. 41 9-加水便症 1 0(0 ml.-选过,分装,:1; t:灭当,1(r min,1.350%硫萄糖溶商
收确糖50.加水便1u3mI斗，分装，10:灭min，4.4音养球脂培养基
氨化钠
因考液
13 ~-25 R
除航脂外混合上述成分，调节F！使比最悠的H值略产（>一（4，加人琼脂，加热游化厅滤进洲节pH信使火菌后为7.2--7.4.分装，115℃火菊30mi，整热料顺使准固成斜面：A.5平板培养基
牛肉浸出粉
醇母授出粉
西都描
-5 g--20 g
除琼脂和制菊快外，混合上述成分.阔\(H使比最然的\H值略高U.2~心.4.加人统脂，加热落化后选过，葡萄糖溶辉后，播勺.调节I值使灭苗为7.88,，分装，1无菌0min培养基以朵而忙司成分的扰生衰微生物控定养基Ⅱ（中作人民共和州典药典32033计版形)药十操治养基代些，临用，使用说明配制和灭幽.6
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