本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中磺胺类药物：磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉含量的方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中磺胺类药物的测定。 GB/T 19542-2007 饲料中磺胺类药物的测定高效液相色谱法 GB/T19542-2007 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 65. 120
中华人民共和国国家标准
GB/T19542—2007
代替GB/T19542—2004
饲料中磺胺类药物的测定
高效液相色谱法
Determination of suifonanides in feeds-High-performance liquid chromatography2007-06-21 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2007-09-01实施
GB/T19542—2007
术标准是GB/T19542一2004饲料中磺胺一中基啶和磺胺间甲氧嘧啶的测定高效液相色谱
法”的修订版：
本标准与GB/T19542—2004主要差异如下：一补充了磺胺嘧啶、磺胺喹恶啉、磺胺甲恶唑三种磺胺药物的测定；一增加了净化步骤。
本标准自实施之日起代替GB/T19542—20C4。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口本标准起草单位：国家饲料质量监督检验中心（北京）本标准主要起草人：李兰、杨曙明、索德成、田河山I、范埋、赵根龙：本标准所代替标准的历次版本发布情况为：--GB/T 19542 -2004.
1范围
饲料中磺腰类药物的测定
高效液相谱法
GB/T19542—2007
本标锥规定了用高效滋相色谱饺测是饲料中胺类药阙：磺胺嘧啶，磺腰三甲基嘧啶、碰胺间甲氧嘧、磺胺甲恶呼、磺腰哮嘛含量的方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中磺胺类药物的测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修收单（不包括误的内容）或修订版均不适非于本标准，然而，鼓励根据本标准退成协设的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用丁本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样
3原理
试样中磺胺类药物经乙振荡提取后，用碱性氧化铝小柱净化，注人高效被相色谱仪反相色谱系统中进行分离，用紫外检测器或二极管矩阵检测器检测，外标法计葬磺胺类药物的含量注：该方法最低定过限分别对，磺腰嘧啶，磺胺间甲氧嘧啶5 区/k区;磺腰二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶2mg/kg.
4试剂和溶液
除非另有规定·在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合G3/T6682规定的=三级用水。4.1冰乙酸：优级纯。
4.2乙睛：色谱纯。
乙:分析纯。
甲醇：色谱纯。
4.5 流动相:在 1 00c tmL容量瓶中如人 750 mI. 去离子水，移取冰乙酸(4.I)3 rnl 加人水中，与250 tnl.乙(4.2)混合摇勾，过0.45 μm滤膜，脱气，备用。磺胺嘧啶标准品：纯度应大于07%。4.6
磺胺二甲基嘧啶标准品:纯度应大于97%。4.7
磺胺间甲氧嘧啶标准品：纯度应大于97%。4.8
磺胺甲恶唑标准品：纯度应大于97%。4.9
4.10磺胺喹恶啉标准品：纯度应大于97%。4.11磺胺嘧啶标准溶液
4.11.1磺胺嘧啶标准贮备被：准确称取已知纯度的磺胺嘧啶标准品100 mg，精确至0.000 1 g,置于100 mI.棕色容量瓶中，加乙睛（4.2)超声使之完全溶解，并定容至刻度，摇勾，该溶液中磺胺嘧啶浓度为1 mg/ml.，于一16℃保存可使用 6个月 u4.11.2磺胺嘧啶标准中间液：准确移取磺胺嘧啶标准贮备液（4.11.1)5mL十5onL棕色容量瓶中，用乙睛(4.2)定容至刻度，该溶皴中磺胺嘧啶浓度为100%/mL，于1℃保存可使用1个月。1
GB/T19542-2007
4.11.3磺胺嘧啶标准T作液：准确移取磺胺啶标准4间液（4.11.2)5mL.于：50ml.棕色容量瓶中，用流动相（4.5)定容至刻度，该溶液中磺胺嘧啶浓度为10^g/mT.，当口使用，4.12磺胺二甲基嘧啶标准溶液：配制过程同磁胺啶。4.13磺胺问甲氧嘧啶标准溶液：配制过程同磺胺嘧啶。4.14磺胺甲恶唑标准溶液：配制过程同磺胺嘧啶。4.15磺胺哇恶啉标准溶液
4.15.1磺腰喹恶啉标准贮备液：准确称取已知纯度的磺胺唑恶啉标准品100mg，精确至.0.0001，置于100mL棕色容量瓶中，加甲醇（4.4)超声使之完全解，并定容至刻度，摇匀，该溶液巾磺胺噻恶啉浓度为1mg/mL，于一16℃保存可使用6个月。4.15.2磺胺唑恶啉标准中间液：准确移取磺胺喹恶啉标准贮备液（4.15.1)51mL于5mL棕色容量瓶中，用乙睛（4.2)定容至刻度，该溶液中横胺喹恶啉浓度为100ug/1mL，于4℃保存可使用1个月。4.15.3磺胺喹恶啉标准工作液：准确移取磺胺喹恶啉标准中间液（4.15.2)5mL于50mL棕色容量瓶中，用流动相（4.5)定容至刻度，该游液中磺腰噻恶啉浓度为10g/mL，当日使用，注；若单独测定各组分，也可配制标准工作液便测定组分的浓度在20m~100ng之间。4.16磺胺类药物混合标准工作液分别移取磺胺类药物标准中间液各5L于50mL棕色容最瓶中，用流动相(.4.3)定容至刻度，该溶液中磺胺药物的浓度均为10μg/mL，当日使用。注：若同时测定可配制混合标准工作液。5仪器此内容来自标准下载网
5.1实验室常用仪器设备。
5.2具塞锥形瓶：15cml.。
5.3振荡器
5.4高效液相色谱仪：紫外检测器或一极管汇阵检测器。5.5针头过滤器，备孔径为0.45±m有机微滤膜，5.6碱性氧化销SPE小柱：1(00mg/12mL、120A。6试样的选取和制备
6.1按GB/T14699.1采样。
6.2选取有代表性例料样品至少500g，四分法缩减至100区·磨碎，全部通过43目筛，混勾，装人密闭器中，避光低温保存，备用。
7分析步骤
7.1试液的制备
7.1.1提取
称取配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料样品2g（精确至0.C01g）.置于具塞锥形瓶（5.2）中，加人50mL的乙腈（4.3），于振荡器（5.3)振荡提取30min，过滤，滤液备用。7.1.2净化
准确吸取试液（7.1.1)：配合饲料10mL～20mL；浓缩饲料、添加剂预混合饲料2mL，移人用10ml.乙睛淋洗过的碱性氧化铝小柱（5.5)中，令其自然流速流出。待试液（7.1.1)全部流出后，吹干：用两次2mL流动相（4.5)洗脱，收集洗脱液，并过0.45μm的滤膜，滤液上机测定。7.2色谱亲件
7.2.1色谱柱：具有Cs填料的柱子（粒度为um），柱长250mm，内径4.6mtn，2
7.2.2流动相:25%乙水(4.5),以1.0 mL/min流速洗脱。7.2.3进样量:20 μL
GB/T19542—2007
7.2.4检测器：紫外检测器或二极管矩阵检测器，检测波长270nm。若单独测定磺胺嘧啶检测波长为268ttn；磺胺二甲基嘧啶检测波长为266nm磺胺间甲氧嘧啶检测波长为271nm；磺胺甲恶唑检测波长为268t11:磺胺喹恶嘛检谢波长为246nm.8定量测定
按高效液相色谱仪说明：书调整仪器操作参数。向液相色谱柱中注人待测定磺胺标准亡作液或混合标准工作液（4.16)及试样溶液（7.1)得到色谱峰面积响应值，用外标法定量。9结果计期
9.1试样中每种磺胺的含量分别按式(1)计算：PixVxcxV.
式中：
ui—一试样中每种磺胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg)P——试样溶液峰面积值：
V一样品的总稀释体积,单位为毫升（rmIL）#c一标准溶液浓度，单位为微克每毫升（\g/mL）V.—一标准液进样体积，单位为微升（μL)；P，——标准溶液峰面积半均值：m——试样质量，单位为克（g），V:--—试样淬液进样体积,单位为微升（μI)，9.2平行测定结果用算术平均值表示,保留三位有效数字。10量复性
同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10%I)
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