本标准给出了海湾扇贝(Argopecten irradians Lamarck)主要形态构造特征、生长与繁殖习性、遗传学特征以及检测方法。本标准适用于海湾扇贝的种质监测和鉴定。 GB/T 21443-2008 海湾扇贝 GB/T21443-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 65. 150
中华人民共和国国家标准
GB/T21443—2008
海湾扇贝
Bayscallop
2008-02-15发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-05-01实施
本标准的附录 A,附录B、附录C为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标雅化技术委员会海水养殖分技术委员会归口，本标推起草单位：中国科学院海洋研究所。本标推主要起草人：刘保忠、张国范、董波、阙华勇、尤锋、张晓军。GB/T21443—2008
海湾扇贝
GB/T 21443—2008
本标准给出了海湾扇贝（ArgopectenirradiansLamarck）主要形态构造特征、牛长与蔡殖习性、遗传学特征以及检测方法。
本标准适用于游湾扇贝的种质监测和鉴定。2名称与分类
2.1学名
海湾潮贝Argopecten irradiansLamarck2.2分类位置
软体动物门（Mollusca），瓣鳃纲（Larnellibranchia），珍贝日（Pterioida），扇贝科（Pectinidae），游湾扇贝属(Argapecten)。
3主要生物学性状
3.1外部形态特征
3. 1. 1 外形
贝壳形，两壳儿乎相等，右壳高，后耳大于前耳。前耳下方生有足丝孔，成体无足丝，绞合部相连且平直，励较宽而离起，助上无棘。生长纹较明显：壳面有放射助17条～18条，壳面呈黑褐色、褐色、黄色或炭白色。成贝壳高6cm宠有。海湾扇贝的外部形态见图1。
图1海湾扇贝外部形态
3. 1. 2 可数性状
壳面有放射励17条~18条。
3. 1. 3可量性状
对下壳长49.40mm~68.70mml，体重16.43g~36，52g的55个成体进行数量性状的测量，统计数据见表1。
GB/T 21443---2008
平均值
标准差
表 1海湾扇贝数量性状统计值
壳长 L/
体重、壳长生长关系式
莞宽/mm
海湾扇贝在自然条件下体长与休重关系见式（1)：W = 0. 003 2XL2 824
武中：
海湾贝体长L时的体重，单位为克（g）：海湾扇贝体重W 时剂壳长，单应毫来(mm）3.2内部构造特征
3.2.1外套膜
简单型外套胺，县外套能
3.2.2生殖系统
都外套触
理雄同体，精巢侵乱膜精外周丝4生长与繁殖特征
4.1生长　
纯8个月平均
在适宜生长额
4.2繁殖习性
·代有吞秋商值期。黄渤
海湾扇贝茶殖强
一只亲长
期产品1501%粒200×104
5细胞遗传学特德
体细胞染色体：
即业中部着丝粒案
9对，染色体臂数（NF）
6生化遗传学特征
殖期在5月下包
壳高 H/mm
群个月。
体重w/g
秋季为9前至寻月
X10~数～期0×+，一个产剪
6对烯部丝粒染色体（E组)
JAnn NOBAA aA AO
图2海湾扇贝染色体核型
肌肉中草果酸脱酶（MI)H)向工酶为单态，酶谱见图3。2
7分子遗传学特征
16S rDNA序列(547bp)
图3苹果酸脱氧酶（MDH）酶谱
GB/T 21443—2008
CGCCTGTTTATCAAAATGGCTCCCTTGAATACCAT AGGAGTCGGT
GCCTTCCCGG T
TAGCTTAAGT
AGTTTTCT
AAIGCTTC
AATGTGC&
GGGCAGC
AATGAC
GATAAC
ACCTCG
TGGTTO
8检测方法
TAAACTTAAACGGATGCGGTAAG
GTGCTAAGG
TAGCCT
ATAGTO
AAGIGGGGCA
TGGCTO
GCCCAT
染色体和
染色体标露
剪取活休
离组织，
从秋水仙资取山
从低渗海水能免费标准bzxz.net
剧定完毕后，叠
从冰箱中斑出在
GACCCCT
TGTOAATGTFFGACG
FTGATGTGCA
GTGAGGT
TATA&T
GAAATT
IIGGCTO
TCTGETGAGT
AGAAG TACTCCGGG
TGGG TGGGTITGCG
GCGG TTICAAGGGT
AGTTCACACCG
，置于Carnoy's鼠定液中固定1次，每次就s4C冰箱中过夜；
1-30cm处滴下，玻片接56℃
10%Giermsa染液染10minssoin(Gipe蝶液配制录.A)：流水冲洗，显微镜下观察
染色体计数
在显微镜下观案，计数100个以上清晰、分做良好的中期分裂相，測定染色体数日，统计得出二倍体染色体祭数，
8.1.3核型分析
选取7套～10套染色休分裂相进行拍照，放大，测量染色体及其长臂，短臂的长度，计算其相对长度、臂比、臂指数、着丝粒指数。根据二倍体染色体相对长度、臂比、者丝粒指数，参照L.evan的分类标准，得山二倍体的染色体核型公式。8.2同工酶分析
8.2.1样品制备
样本活体，解剖取其闭壳肌0.1 g0.2g，加2倍体积的1Fis-HCl缓冲液(0.01 mo1/L,FH=7.0),并3
GB/T 21443—2008
如适量处理过的石英砂冰上句浆,然后在1C,12 000 r/min 离心20 min,取上满液分装后用于电泳。8.2.2电泳方法
采用淀粉凝胶TC缓冲系统Tris-柠檬酸，PH=6.9进行电泳分析。凝胶浓度为13%（质量分数），胶制好后，样品加在靠阴极一侧，用滤纸髓样品液插人孔中。电泳在4℃冰箱内进行，电压120V，电流22mA/板(TC)。
电泳结束后逊行染色，染色被配方见附录B。8.3DNA特征标记分析
8.3.1DNA的提取
取闭壳肌300mg剪碎后，放入600μL毅解液，55℃水浴消化至组织碎块完全裂解，裂解液分别用等体积的饱和酚.酚：三氣中烷（1：1）,三氟甲烷：异戎醇(21：1)抽提,加入2倍体积的无水乙醇和终浓度10%的乙酸钠离心沉淀DNVA,最后用70%的乙醇洗2饮后晾十，裂解液配方见附录C,8.3.2片段克隆和纯化
以提取的 DNA 为模板,利用两个特异性引物进行 PCR扩增：8.3.2.1引物序列
f:5'-CGCCTGTTTATCAAAAACAT-3 r;5*-CCGGTCTGAACTCAGATCACGT-38.3.2.2反应条件
94℃变性2min,1个循环;94C变性30 s.55℃退火min,72℃延伸1min,35个循环;72℃延伸10min，1个循环。
反应液配方见附录C,
8. 3. 3序列测定
用基因白动分析仪测序，反应程序按照所使用的测序试剂盒说明书给出的规程操作，最后读出16SIDNA的序列，
A.1Giemsa染色母液的配制
附录A
(规范性附录）
吉姆萨(Gicmsa)染色液配制
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称取0.5gGiemsa粉，量取甘油33mL，在研钵中先用少量甘油与Giemsa粉混合，研磨至无颗粒时再将剩余甘汕加人，在56℃条件下保温2h后，再加33mL甲醇，混勾，保存于棕色瓶内。A.2磷酸缓冲液(0.2mul/L,pH7.2)的配制磷酸缓冲没由A液和B液按比例混合而成。A较(0.2no1/L,Na,IIPO,)配制
取36.61g含1个结晶水的磷酸氢二钠(NaIPO4·H.0)定容于1000mL蒸馏水中，或取71.64g含2个结晶水的磷酸氢二钠(NaeHPO.·2HI,O)定容于1a0mL蒸馅水中，即可。B液(0.2 mDl/L,NaH,PO)配制:
取27.6多含1个结晶水的磷酸二氢钠(NaHaP().·H0)定穿于1000mI.蒸馏水中，或取81.21g含2个结晶水的磷酸二氢钠(NaH，PO.·2H,0)定容1000mL蒸馏水中即可。取A液720mL,加上1液28.0mL，混合即成所需的磷酸缓冲液：A.3Giemsa工作染色液的配制
取100mL磷酸缓冲液，加人3mLGiemsa染色母液即可.附B
(规范性附录）
同工酶染液配方
苹果酸脱氢酸（MDH).DL-苹果酸钠，392mg;0.1mol/LTris-HCI缓冲液（pH值8.0),2mL1.15mo1/LMgCl，+0.05mol/LNaCl0.4mL，MTT噻睡盐），4Ⅱg;PMS(N-甲基份嗪甲基硫酸盐),2.5mg辅I,5mg
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C.1DNA提取裂解液
附录℃
（规范性附录）
DNA提取裂解液和 PCR扩增反应液组成HB(10 mmol/LTris-HCl,pH8.0;100 mmol/LEDTA)SDS(十二烷柴磺酸钠)(10%)
蛋白酶K
C.2扩增PCR反应液
DNA模板
10倍扩增缓冲液
MgCl, (23 mmol/L)
dNTP(1o rmmol/L)
引物 f(50 pml/μl.)
引物 r(50 pmol/μL)
Taq 酶(5 U/μL)
加超纯水配制成25L的反应体系：540 μL
150ng-~200ng
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