本标准规定了食用动物肌肉和肝脏中苯并咪唑类药物和代谢物残留量的液相色谱?串联质谱检测方法和液相色谱检测方法。本标准适用于液相色谱法和液相色谱?串联质谱法测定鸡肉、牛肉、猪肉、鸡肝、牛肝、猪肝中奥芬达唑、芬苯达唑及它们的代谢物奥芬达唑砜，阿苯达唑及其代谢物阿苯达唑-2-氨基砜、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜，甲苯咪唑及其代谢物氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑，氟苯咪唑及其代谢物 2-氨基氟苯咪唑，噻苯咪唑及其代谢物 5-羟基噻苯咪唑，噻苯咪唑酯残留量。适用于液相色谱?串联质谱法测定鸡肉、牛肉、猪肉、鸡肝、牛肝、猪肝中丙氧苯咪唑残留量。适用于液相色谱法测定鸡肉、牛肉、猪肉、鸡肝、牛肝中丙氧苯咪唑残留量。 GB/T 21324-2007 食用动物肌肉和肝脏中苯并咪唑类药物残留量检测方法 GB/T21324-2007 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS67.120
中华人民共和国国家标准
GB/T21324—2007
食用动物肌肉和肝脏中苯并咪唑类药物残留量检测方法
Method for the determination of benzimidazoles residuesin edibleanimal muscleand liver2007-10-29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
鼓骗防伤
:com2008-04-01实施
本标准的附录A、附录B、附录 C、附录D均为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。CB/T21324—2007
本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院本标准主要起草人：林峰、林海丹、吴映璇、张美金、谢守新、彭涛、李晓娟、邵琳智、邱月明。1范围
食用动物肌肉和肝脏中苯并咪唑类药物残留量检测方法
GB/T21324—2007
本标准规定了食用动物肌肉和肝脏中苯并咪唑类药物和代谢物残留量的液相色谱-串联质谱检测方法和液相色谱检测方法。
本标准适用于液相色谱法和液相色谱-串联质谱法测定鸡肉、牛肉、猪肉、鸡肝、牛肝、猪肝中奥芬达唑、芬苯达唑及它们的代谢物奥芬达唑砜，阿苯达唑及其代谢物阿苯达唑-2-氨基矾、阿苯达唑亚和阿苯达唑砜，甲苯咪唑及其代谢物氨基甲苯咪噬和羟基甲苯咪唑，氟苯咪唑及其代谢物2-氨基氟苯咪唑，噻苯咪唑及其代谢物5羟基噻苯咪唑，噻苯咪唑酯残留量。适用于液相色谱-串联质谱法测定鸡肉、牛肉、猪肉、鸡肝、牛肝、猪肝中丙氧苯咪唑残留量。适用于液相色谱法测定鸡肉、牛肉、猪肉、鸡肝、牛肝中丙氧苯咪唑残留量。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987）3方法提要
试样在碱性条件下以乙酸乙酯提取、离心，浓缩后残渣以乙睛-0.1mol/L盐酸溶解，正已烷脱脂，经固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪或高效液相色谱仪测定，外标峰面积法定量。4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1乙酸乙酯。此内容来自标准下载网
4.2正已烷。
4.3甲醇：液相色谱级。
乙睛：液相色谱级。
4.5无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，置于干燥器内备用。4.6
BHT(2,6-二救丁基对甲酚）。
盐酸。
氢氧化钾。
25%氮水。
甲酸：优级纯：
乙酸胺。
1%BHT溶液：称取1.0gBHT，乙酸乙酯溶解并稀释至100mL，临用前配制。0.1mol/L盐酸：量取浓盐酸8.3mL，加水稀释至1000mL。0.005mol/L甲酸：准确吸取188μL甲酸，加水稀释至1000ml。4.14
GB/T21324—2007
4.1550%氢氧化钾溶液：50g氢氧化钾溶解于100mL水中，冷却至室温后待用。4.1610%氨乙睛溶液：量取10mL25%氨水，乙睛稀释至100mL，临用前配制。4.170.025mol/L乙酸铵：1.93g乙酸铵溶解于1000mL水中。4.18标准品：奥芬达唑（oxfendazole，CAS号53716-50-0）、芬苯达唑（fenbendazole，CAS号43210-67-9）、奥芬达唑矾（oxlendazolesulfone，CAs号54029-20-8）阿苯达唑（albendazole，CAS号54965218）、阿苯达唑2-氨基（albendazolc-2-aminosullonc，CAS号80983-34-2）、阿苯达唑亚矾（albendazolesulfoxide，CAS号54029-12-8）、阿苯达唑矾（albendazolesulfone，CAS号75184-71-3）、甲苯咪座（mebendazole，CAs号17798000）、氨基甲采咪唑（mebendazole-aminc，CAS号52329-60-9）、羟基甲苯咪唑(p-hydroxymebendazole，CAs号60254-95-7）氟苯咪唑（flubendazoleCAs号13678000）、2氨基氟苯味唑（2-aminoflubendazole）、嘧花咪唑（thiabendazole，CAs号148798）、噻苯咪唑酯（cambendazole，dAS号26097-80-3）、丙氧苯味唑（oxibendazole，CAS号20559-55-1）标准品，含量均在98%以上，5羟基喔苯咪唑（thiabendazole
oky.CAS号17450500）标准溶液浓度为10ng/L4.19标准储备液
准确称取奥芬达吗
唑砜，甲莱咪唑、氨基
苯咪唑标准品各10
混合标准工
达唑、奥芬达唑砜、阿苯达唑、阿苯达唑-2-氨基砜、阿苯达噬亚矾、阿苯达出，并
甲茶咪睡、名木
米隆、安基氧茶
味唑、噻苯咪、萍咪唑酯、丙氧分别用甲醇溶解并定容至1c0mL.配成标准储备清液，流度为100μg/mL。根据需要，用乙晴-水（2十+8.体积比）将标准储备液（4.19）及5-经基塞苯咪唑标准溶液配成供液相色谱测定用的浓度为C
50.0、100.2
的混香标
度为0、2.00、5.00
固相萃举取程
0.1mol/L盐酸平
20.0、40.0
X固相萃联
的混合标准工作浴液
供液相色谱一串联质谱测定用的液作溶液
混合标准工作溶液使用首配制。我相当者，150mg，6mL
滤膜：0.20
um，0.45μm，有机相
液相色谱-电联
仪.配有电喷嘴离子源。
液相色谱仪：配有外检测器或
均质器。
涡旋振荡器。
极管阵列检测器
离心机：转速大于或等于
r/min。
减压旋转蒸发仪。
超声波水浴。
分析天平：感量0.1mg，0.01g。6
制样方法
制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化，甲醇活化、5mL
前依次用车mL
从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500g，用组织碎机充分揭碎均勾，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于一18℃以下冷冻存放。7分析步骤
7.1提取
称取5g样品（准确至0.01g），于50mL离心管中，加人20mL乙酸乙酯、0.15mL50%氢氧化钾（4.15）溶液和1mL1%BHT溶液（4.12）置超声波水浴中振荡5min，加入1g无水硫酸钠，均质器上2
GB/T21324-—2007
以14000r/min速度匀质提取30s.4000r/min离心5min，清液转移至100ml梨形瓶中，另取一离心管，加人20mL乙酸乙酯、0.15mL50%氢氧化钾溶液和1mL1%BHT溶液洗涤均质器刀头：用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头的碱性乙酸乙酯溶液，在涡旋振荡器上振荡2min，置超声波水浴中振荡5min，4000r/min离心5min，清液合并至100mL梨形瓶中，38℃减压旋转蒸发至干。
7.2净化
上述残渣立即用1.5ml乙睛溶解，涡旋混匀，超声5min，加人1.5mL0.1mol/L盐酸，涡旋混勾，转移到15mL离心管，加5mL正已烷洗涤梨形瓶，合并转移到离心管中，涡旋混匀，4000r/min离心5min，弃上层正已烧层，加人3mL正已烧重复操作一次。脱脂后的样液加入3mL0.1mol/L盐酸，涡旋混匀，注人已处理的MCX固相萃取柱（4.21），依次用5mL0.1mol/L盐酸、5mL甲醇淋洗，15mL10%氨乙睛溶液（4.16）洗脱，洗脱液38℃减压旋转蒸发至干，残渣加人0.5mL乙晴，置超声波水浴中振荡5min，加人1.5mL0.025mol/L乙酸铵（4.17），涡旋混匀，过0.45μm滤膜，供液相色谱测定。当采用液相色谱-申联质谱法测定时，吸取100μL液相色谱测定用样液，加人900μL乙睛-水（2十8，体积比）混勾后过0.2μm滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。
8测定
8.1液相色谱-串联质谱法
8.1.1液相色请条件
8.1.1.1色谱柱：C柱，50mm×2.1mm（内径）,1.8um，或性能相当者。8.1.1.2流动相：乙腈+0.005mol/L甲酸，梯度洗脱；乙腈：15%80%（4min内线性增加），80%保持0.5min，80%15%（0.01min内线性递减），15%保持3.5min：8.1.1.3流速：0.35ml/min。
8.1.1.4柱温：60℃。
8.1.1.5进样量：5μL
8.1.2质谱条件
8.1.2.1离子化模式：电喷雾电离正离子模式（ESI十），质谱扫描方式：多反应监测（MRM）；分辨率单位分率，其他参考质谱条件见附录A：8.1.2.2雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求。8.1.2.3喷雾电压、去集族电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度8.1.2.4各种苯并咪唑类药物和代谢物的定性离子对、定量离子对及相关质谱参数参见附录A，8.1.3液相色谱-串联质谱测定
8.1.3.1定性测定
每种被测物质选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物的保留时间与标准溶液相比在土2.5%的充许偏差之内：待测物的定性离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或等于3（S/N≥3），定量离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或等于10（S/N≥10）；定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准浴液相比，相对半度偏差不超过表1的规定，则可判断样品中存在相应的自标化合物。
表1定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的最大偏差
>20%~50%
>10%~20%
:com10%
GB/T 21324—2007
8.1.3.2定量测定
用米并咪唑混合标准工作溶液（4.20）分别进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中苯并咪唑类药物和代谢物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，各种苯并咪唑类药物和代谢物的参考保留时间见附录A，标准溶液的液相色谱-串联质谱定量离子重构离子质量色谱图参见附录B。8.2液相色谱法
8.2.1液相色谱条件
8.2. 1. 1 色谱住:Ca柱,250 mmX4. 6 mm(内径),5赶理，或性能相当者
8.2.1.2流动相：乙睛+0.025mol/乙酸铵，梯度洗脱，乙腊：20%~55%（30min内线性增加），55%保持2min，55%~20%（0.1mir内线性递减）20%保持8min。CHINA
8.2.1.3流速：1.0mL/mi
8.2.1.4检测波长：292
8.2.1.5柱温35℃
8.2.1.6进样量：40
8.2.2液相色谱测定
8.2.2.1定性测定
在相同实验条牛
8.2.2.2定量测定
用苹并咪噬消
准工作曲线，用标
器测定的线性范围
详品中待测物的保留时间与标准咨液相比在土2.5%的允许偏差之内。S
工作溶液
分别进样以略
标，工作浴控浓度为横坐标绘制标积为家型
作曲线对样品进行定量，样品落液中茶并药物和代谢物的响应值均应在仪咪唑类
在上述色谱条
准溶液的液相色谱固参见附录C
空白试验
除不加试样外
结果计算与表述
，各种米并咪唑类药物和代谢物的参考保留时间见附录A，标上述测定步骤进行
结果按式（1)计算
果需扣除空白值
试样中待测药物残留量，单位为微克每于克（上）从标准工作曲线得到的待测药物溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；样品溶液最终定容体积，单位为毫升（m）样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g）。测定低限与回收率
测定低限
-（1)
本标准液相色谱法和液相色谱-串联质谱法的测定低限（LOQ）：奥芬达唑、芬苯达座、奥芬达唑砜、阿苯达唑、阿苯达唑-2-氨基矾、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、甲苯咪唑、氨基甲苯咪唑、羟基甲米咪唑、氟苯咪唑、2-氨基氟苯咪唑、噻米咪唑、5羟基噻苯咪唑、噻苯咪唑酯、丙氧苯咪唑均为0.010mg/kg。11.2回收率
参见表D.1~表D.6。
组分名称
奥芬达唑
芬苯达唑
奥芬达唑碱
阿苯达唑
阿苯达唑-2-氨基砜
阿苯达唑亚砜
阿苯达唑矾
甲苯咪唑
氨基甲苯咪唑
羟基甲苯唑
唑苯咪唑
5-羟基噻苯咪唑
氟苯咪噬
2-氨基氟苯咪唑
附录A
（资料性附录）
16种苯并咪唑类药物和代谢物的色谱保留时间、质谱参数GB/T21324—2007
表A.116种苯并咪唑类药物和代谢物的色谱保留时间、质谱参数定性
离子对(m/z）
316/159
316/191
300/159
300/268
332/159
332/300
266/191
266/234
240/133
240/198
282/191
282/208
298/224
298/159
296/105
296/264
238/105
238/133
298/160
298/266
202/131
202/175
218/147
218/191
314/123
314/283
256/95
256/123
定量离子对
316/159
300/268
332/159
266/234
240/133
282/208
293/159
296/264
238/105
298/266
202/175
218/191
314/123
256/95
去簇电压/
碰撞能/
色谱保留时间（t)/min
液相色谱
串联质谱法
液相色谱法
GB/T21324-2007
组分名称
噻苯咪唑酯
丙氧苯咪唑
离子对(m/z)
303/217
303/261
250/176
250/218
定量离子对
303/217
250/218
表A1续）
去镁电压/
碰撞能/
色谱保留时间(t)/min
液相色谱
串联质谱法
液相色谱法
附录B
（资料性附录）
GB/T21324—2007
16种苯并咪唑类药物和代谢物标准溶液的液相色谱-串联质谱定量离子重构离子质量色谱图2.47
奥芬达壁；
奥芬达壁矾；
阿苯达题；
阿苯达壁-2-氨基：
阿苯达唑亚：
阿苯达唑砜：
噬苯咪唑酯：
噬苯咪唑：
5羟基噬苯咪唑；
箫苯咪唑
甲苯咪唑；
丙氧苯咪唑
芬苯达唑；
羟基甲苯咪唑
氨基甲莱咪唑：
2-氨基氟苯咪唑，
3:000+
图B.116种苯并咪唑类药物和代谢物标准溶液的液相色谱-串联质谱定量离子重构离子质量色谱图0,85
GB/T21324—2007
5-羟基噻苯咪避：
附录C
（资料性附录）
16种苯并咪唑类药物和代谢物标准溶液的液相色谱图BC
阿苯达唑-2-氨基砜，
阿苯达唑亚砜；
噻苯咪唑；
阿苯达唑矾；
奥芬达唑；
氨基甲苯咪唑；
羟基甲苯咪唑；
-2-氨基氟苯咪唑；
噻茉咪唑醋
奥芬达唑矾：
内氧苯味唑！
甲苯咪唑；
氟苯咪噬；
耐苯达型：
芬苯达塑。
图C.116种苯并咪唑类药物和代谢物标准溶液的液相色谱图35.00
药物名称
5-羟基噻苯咪唑
阿苯达唑-2-氨基矾
阿苯达唑亚砜
噻苯咪唑
阿苯达唑砜
奥芬达唑
氨基甲苯咪唑
羟基甲苯咪唑
2-氨基氟苯咪唑
噬苯咪唑酯
（资料性附录）
添加回收率
猪肉中16种苯并咪唑回收率（%）的实验数据（n=10）添加浓度/（μg/kg）
液相色谱-串联质谱法
81.6~98.2
102~119
80.0~96.8
72.7~84.3
83.6~97.7
80.4~98.2
78.1~95.6
74.0~97.0
70.3~92.6
72.0~89.4
70.8~89.1
72.8~91.0
GB/T21324—2007
液相色谱法
104~109
103~114
103~112
103~111
100~109
101~108
GB/T21324—2007
药物名称
奥芬达壁砜
丙氧苯咪唑
甲苯咪唑
氟苯咪唑
阿苯达唑
芬苯达唑
药物名称
5-羟基噬苯咪唑
阿苯达唑-2-氨基砜
阿苯达唑亚
噻苯咪唑
阿苯达唑矾
表D.1(续）
添加浓度/（μg/kg）
液相色谱串联质谱法
82.0~98.3
81.4~96.6
71.3~90.4
80.7~98.3
83.0~97.2
83.5~97.2
76.5~98.2
79.0~98.6
78.4~97.8
猪肝中16种苯并咪唑回收率（%）的实验数据（n=10）添加浓度/（μg/kg）
液相色谱-串联质谱法
70. 0--118
106~120
76.6~96.9
103~111
86.4--92.7
101~116
液相色谱法
液相色谱法
80.9~97.2
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