本标准规定了食品中大肠埃希氏菌Ｏ１５７：Ｈ７和Ｏ１５７：ＮＭ 的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中大肠埃希氏菌Ｏ１５７：Ｈ７和Ｏ１５７：ＮＭ 的检验。 本标准的第一法与美国ＦＤＡ／ＢＡＭ 方法相比主要差异如下：———增菌培养基以ｍＥＣ＋ｎ肉汤替代了ＥＥＢ肉汤。———增加了ＣＨＲＯＭａｇａｒＯ１５７显色培养基。本标准的第二法与ＮＭＫＬ，Ｎｏ．１６４，１９９９的方法相比主要差异如下：———增菌培养基以ｍＥＣ＋ｎ肉汤替代了ｍＴＳＢ肉汤。———修改增菌培养温度４１．５℃±０．５℃为３６℃±１℃。———增加了ＣＨＲＯＭａｇａｒＯ１５７显色培养基。本标准的第三法与ＡＯＡＣ-ＲＩＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＴｅｓｔｅｄ ＭｅｔｈｏｄＶＩＤＡＳＥ．ColiＯ１５７(ＥＣＯ)Ｔｅｓｔ，Ｎｏ．０１０５０２的方法相比主要差异为增菌培养基以ｍＥＣ＋ｎ肉汤替代了ｍＴＳＢ肉汤。本标准的第四法与ＡＯＡＣ-ＲＩＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＴｅｓｔｅｄＭｅｔｈｏｄｓＢＡＸＥ．ColiＯ１５７：Ｈ７，Ｎｏ．０５０５０１的方法相比主要修改为生肉以外的其他食品增菌培养基以ｍＥＣ＋ｎ肉汤替代了ＥＥＢ肉汤。 GB/T 4789.36-2008 食品卫生微生物学检验 大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验 GB/T4789.36-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

3CS 07. 100. 30
中华人民共和国国家标准
GB/T 4789,36-2008
食品卫生微生物学检验
大肠埃希氏菌0157：H7/NM检验
Microbiological cxamination of food Hygienc-Examination of Escherichia coti O157.17/NM2008-05-16发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2008-11-01实施
本标推分为四法，分为：
第一法：常舰培养法：
第二法：免疫磁珠捕获法；
第三法;全自动酶联荧光免疫分析仪筛选法第四法：全自动病原菌检测系统筛选法。GB/T 4789.36—2008
本标滩的第一法修改采用了美国食品药品管理局(FI)A)纽菌分析手册》第 4A 章(2CC2 年)（ 1ac-teriologiralAnalyticalManiai,Chapter1A，2002);第二法修采用厂北欧食品分析菱员会（NMKL）No.164，1999，第三法修改采用了国际分析家学会（AOACINTERNATIONAL）AOAC-RIPerfrImance Tested Methods VIDAS E, Coti O157(ECO)Test,No, 01C502,第四法修改采用了 AOAC-R1 Per-formance 1csted Mcthods BAX E. Coli O157 H7,No, 050501。本标催的第法与美国FDA/BAM方法相比手要差异如下：-增菌培养基以mEC十n肉汤替代了EEB肉汤。-增加了CIIROMagarO157显色培养基本标谁的第二法与NMK1-,No.164,1999的方法相比主要差异如下：—-增菌培养基以mEC+Ⅱ肉汤替代了uTSB肉汤修改增菌培养温度41,5℃二0,5℃为 36℃±1℃，增加了CHROMagar 0157显色培养基。本标准的第=法与 AOAC-RI Perlormance Tested Methodl VIDAS E.Cali O157(FCO)Test,Nr010502的法相比上要差异为增菌培养基以mEC+n肉汤替代了mTSB肉汤。本标推的第四法与 AOAC RI Pcrfarmancc Testcd Methuds 13AX F.Coli O157:II7,No. 05050l 的方法相比主要修改为生肉以外的其他食品增菌培养基以mEC十n 肉汤替代了EEB肉汤。本标推的附录A为规范性附录。
本标推白中华人民共和国卫生部提出并归口。本标推起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标谁参与起草单位：河南省疾病防控制中心北京市族病预防控制中心、渐江省疾病筑防控制中心吉林省疾病预防控制中心、北省疾病赖防控制中心中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。
本标推上要起萨人刘秀梅、兴广、张秀丽，陈情，程苏云，刘桂华、谢茂慧，李晓虹，田静。1
1范围
食品卫生微生物学检验
大肠埃希氏菌0157:H7/NM检验
本标规定了食品中大肠埃希氏菌0157,H7和O157:NM的检验方法GB/T 4789.36—2008
本标适用于食品和食物毒样品中大肠埃希菌0157：H7和0157+NM的检验。2设省和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设各外,其他设备和材料如下。2.1天平撼量0.1.0.01.g。
2.2均质器。
2.3冰箱2℃~5℃。
恒温培荞籍:35C王1。
2.5恒温水浴箱：46℃±0.5℃，100℃。生物显微镜:10×~1C0×。
菌浓度比浊管：Mac:Farlend0.5号或浊度汁。2.7
无菌锥形瓶:5cCml250ml，
2.9元菌平-而：直径90mtr
无菊试管:10 mm×75 mm。
无菌吸管：1tnL(具0.01mL刻度）10.0mL（具0.1m刻度)或微量移器及吸头。2.12
pH计或 pH 比色管或精密 pH 试纸,2.13长波紫外光灯：366 rum,功率≤6W。2、14磁板、磁板架、I)ynal MX1样品混合器。?.15全自动微生物鉴定系统(VITEK)2?.16全自动酶联荧光免疫分析仪（miniVIDAS或VIIDAS)）2.17
全自动病原菌检测系统（AX系统）3。3培养基和试剂
3,1 改良 EC肉荡(mEC-fn):见第 A. 1 章。3,2玲良[梨醇表康既(CT-SMAC2琼脂:第A.2 章3.3业碲酸钾（AR级）：
3.4头换克游（Celixime)
3.5三糖铁(TSI)琼脂：见第A.3章。1）由挪成I)ymal公可提供的产品的商品名。给出这：-信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产其有相间施效果，则可使用这些等效的产品。白法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这-信息是为了方使不标准的依用者，并不表示对该产品2)
的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品3）由国杜邦公司提供的产品的商品名，给出这一信息是为了方便本标准的使用者、并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。1
GB/T 4789.36—2008
3.64-甲基伞形酮-3-D-葡萄醛酸(MUG)。月桂盐磺酸盐映蛋白陈肉汤-MUC(MUG-LST)：见第A.4章。3.7
3.8氧化酶试剂:见第A.5章。
3.9革兰氏染色液：见第A.6章。3.10
大肠埃希氏菌 0157 和 H7 诊断血清或 0157 享,胶凝集试剂API20E生化鉴定试剂盒或VITEK-GNI+鉴定卡。半固体琼胎：见篇A.7章。
改良科玛嘉（CHROMagar)O157弧菌显色脂或其他同等质量的O157显色琼脂：见第A.8章。改良麦康凯(CT-MAC)肉汤：见第A.9章。抗E.coti0157免疫磁珠（DynalASA，Oslo.Narway)或其他同等质量的抗-E.cotiO157免疫蛛。
PRS-Tween20洗液，第ro章。
4检验程序
检验程序见图
第一法
常规培养法
25g（m1）+225mL改度EC肉话（mEC+n）购质225LuL3
18h21b
CT-SMAC中板和改良CHROMagurO157星色玻脂平板6℃+
挑攻可疑菌落5个～10个，氧化酶阴性，草兰氏明性析菌接种TSIB
36它±1℃
非0157细菌
1B:～24h
血准学批验
生化试验
大肠埃希氏菌 0157;H7 和 0157:VM 常规法检验程序）中法国科玛嘉公提供的产品的商品名。给出这一信思是为了方便本标谁的使用若，并不裁示对该产品的认可。如果其他等效产品只有相同的效果，则可仪川这些等效的产品。2
5操作步骤
5.1增菌
GB/T 4789.36—2008
样品采集后应尽快检验。拆不能及时检验，叫在2℃~4℃保存18h。以无操作取检样25g（ml.）加人到合有225mL.mEC+n肉汤的均质袋中，在拍卡式均质器上连续均质1min2min或放人盛有225mlmEC+n肉荡的均质杯巾，8000r/mi~10000/mit均质1min~2tnin，于36℃=1℃培养18h～24h。同对做阳性及阴性对照。5.2分离
取增菌后的mEC十1肉汤，划线或取0.1mL涂布接种丁CTSMAC平板和改良（CHROMagar0157弧菌显色琼脂平板上，于36℃+1\C培养18h～24h，观察菌形态。必要时将混合菌落分纯。在CT-SMAC平板上，典型菌落为不发酵II梨醇的圆形、光滑、较小的无色菌落，中心现较暗的灰褐色；发酵山梨婷的菊落为红色；在改良CHROMagarO157弧菌显色琼胎平板_上为圆形、较小的菌落，中心毕淡紫色-紫红色，缘无色或浅灰色5.3初步生化试验
在CT-SMAC和改良CHROMagArO157弧菌显色脂-P-板上挑取5个～10个典型或可疑菌落，分别接种 TSI 琼脂,同时接种 MUG-LST 肉汤,于 36℃±1℃培养 18 h～24 h：必要对进行氧化酶试验和萨氏染色。在TSI掠脂中，典型菌株为斜而与底层均呈阳性反应呈黄色，产气或不产气，不产生硫化氢（IIS)。置MUJG-LST肉汤管于长波紫外灯下观察，无荧光产止者为阳性结果，有荧光产生若为阴性结果;对分解乳糖且无荧光的菌株,在营养琼脂平板上分纯，于 36'℃土1℃培养18 h～21 h,并逃行下列鉴定。
5.4鉴定
5.4、1血清学试验
在营养琼脂平板上挑取分纯的菌落,用 0157:H7 标准而清或 (0157 乳胶凝集试剂作玻片凝集试验。对于H7因子血清不凝集者，应穿刺接种半固体琼脂，检查动力，经连续传代3次，动力试验阴性，H7以了血清凝集阴性者，破定为无动力株。5.4.2生化试验
用API2UE化签定试剂盒或VIIEKGNI-检测卡，按照生产商提供的使用说明迹行，大肠埃希底菌0157：H7/NM生化反虚特征见表1：表1大肠埃希氏菌0157:I17/NM生化反应特征生化试验
糖铁琼脂
山梨醇
能基质
氧化酶
西蒙氏柠檬酸盐
氨酸脱羧酶
岛氨酸脱羧酶
纤维二糖发
棉子糖发酵
MUG试验
动力试验
特征反应
底层及翁面圣黄色，硫化氢(H,S)阴性明件或迟缓发酵
MR阳性，VP阴性
阳性(紫色）
阿件（紫色）
有动力或无动力
CB/T 4789.36—2008
5.5结果报告
综合牛化和血清学的试验结果，报告2bg（tmL)样品中检出或未检出大肠埃希氏菌Q57：H7/NM在样品中检出 O157:H7 或(0157:NM 时,如需要进一步检测 Ver0 细胞毒素基因的存在,可通过接种Vero细胞或Hela细胞，观察细胞病变进行判定，地川使用基因操针检测和聚合酶链反应（PCR）方法或送参考实验室进行志贺氏毒素基因(sixl、stx2），eae、hly基因等的检测。第二法免疫磁珠捕获法
6原理
免疫磁珠摘获技术是通过对自的细菌进行选择性增菌，然后利用免疫磁珠进行选择性捕获的方法。捕状的目的细菌被结合到由抗体包被的磁性颗粒上，收集后再将磁性颗粒除布到选择性琼胎平板上进行分离。在CT-SMAC平板上生长的可疑的大肠埃希氏菌O157，因为不分解M梨醇，或作E.coO157显色琼脂平板上产生特定的静促反应呈现颜色变化，而与其他细菌相区别免疫磁珠的应用，寿别皇在样品含有大量杂菌时，对检样中含有少鼠的大肠赖希氏菌0157:1I7NM的检出提供了更大的可能性。7检验程序
检验程序见图
25（mL）+225mL微食EC肉汤（mEC+m，的质225r5l18h-24h
361℃
免疫珠辅获
冷方CT-SMAC平板改良CHROMAgEEQI57减谢显色晾百平板36c±1℃
18h~24h
停收可菌落5个～10个，就化魔期性，草兰氏阴性杆菌接种万MUG-I.ST
非（157组南
18h~24h
血蒲学试验
兰化试验
图2大肠埃希氏菌0157免疫磁珠摘获法检验程序8操作步骤
8.1增菌
8.2兔疫磁珠捕获与分离
GB/T4789.36—2008
应按照生产商摄供的使用说明行免疫磁珠捕获与分离。当生产商的使用说明与下面的描述可能有偏差时：接生产商提供的使用说明进行8.7.1将Eppcndor管按样品和质控菌侏进行编号，每个样品使用1支Eppcndar管，然后插人到磁板架上，在漩涡混合器上轻轻振荡E.cotiO15?免疫磁珠溶液后i，月开益器打开每支Eppendor管的盖子,每管加人 20 μL E.coli0157免疫磁珠悬液。8.2.2坡 mF-l·n肉汤增菌培养物1mI.,加人到Eppcndorff 管中，盖上盖子，然后轻微振荡1C s。每个样品更摸1支加样吸头，皮控菌株必须与样品分开进行，避免交支污染。8.2.3结合：在二8℃-~30%环境中，将F.述Eppendorlr管连同磁被架在Dynal MX1样品混合器F转动或用手轻微转[ min，使E.ati(157与免疫磁珠充分接触。8.2.4捕获：将磁板据入到磁板架中浓缩磁珠。在3trni内不断地倾斜磁板架，确保悬液中与盖子F的免疫磁珠全部被收集起来，此时，在Eppeniorll管壁中i明暴可见圆形或椭圆形棕色聚集物8.2.5吸取上清液：圾1支无菌长吸管，从免疫磁珠聚集物对侧深人液面，轻轻吸走上清液。当吸到液而道过免疫磁珠聚集物时，应放慢速度，以确保免疫磁不被吸走如吸取的上清液内含有磁球，则应将其放国到 Lppendorff 管中,并重复8.2.4步骤，每个样品换用1支无菌加长吸管。免疫磁殊的落：某些样品特别足那些宫含脂肪的样品，其磁珠聚集物易丁滑落到管底。在吸圾上清液时,很难做到不丢尖磁珠，在这种情况下,可保留50 μL-～10！ μL 「:液于Eppendorl管中。如果在后续的洗涤过程中也这样做的话，脂防的影响将减小，也可达到充分捕获的月的。8.2.6：洗涤：从磁板架上移走板，在每支Eppendorff 管中加l人lmLPBs-Tween 20洗液，转动磁板架三次以1,洗涤免疫磁珠混合物。章复上述步骤8.2.1~~8.2.6。8,2.7重复上述步骤8.2.4~-8.2.5，8.7.8免疫磁珠悬浮.移走磁板,释免疫磁珠重新悬浮症100 μLPBSTWcen20洗掖中。8.2.9途布-板用诞满混合器将免疫磁珠混到，用加样器齐50卫1，免疫磁珠悬糍分别转移至CTSMAC平板和改良 CHROMagar O157孤菌显色琼脂平-板-侧,然后用无菌涂布棒将免疫磁珠涂有平板的一半，再用接种环划线接种乎板的另一举。待琼胎表面水分完全吸收后，翻转平板，于36℃土1℃培养 18 h~21 h,
注：若C-SMAC平极和改良CHROMagarU157弧齿显色点脂平极表面水分过多时,应在37℃下于燥10Iin~20 min，涂布时逛免将免疫磁珠涂布乎板的达缘，8.3菌落识别
F.rnLiO157:H7/NM乍CT-SMAC平板和改良CHROMagarO157弧菌显色琼脂平板上的菌落特征见5.2：
初步生化试验同5.3，
8.4鉴定
8.5结果报告
同5.5。
GB/T 4789.36—2008
9原理
第三法全自动酶联荧光免疫分析仪筛选法iniVIDAS或VIDAS大肠埃希氏菌O157（ECO)分析，是在白动VTDAS仪器上进行的双抗体夹心酶荧光免疫分析（EI.FA)方法。固相容器(SPR)用抗大肠埃希氏菌O157抗体包被：各种试剂均封闲在试剂条内。煮沸过的增菌肉汤加人试条孔后，在特定时间内样本中的O157抗原与包被在SPR内部的O157抗体结合，未结合的其他成分过洗涤步骤清除。标记有性磷酸的抗体与固定在SPR壁_上:的O157抗原结介，最后洗去米结合的抗体标记物。SPR中所用荧光底物为磷酸4-中基伞型物。结合作SPR壁上的嗨将催化底物转变成其有荧光的产物：4-中基伞形酮。VIDAS光扫猎在波长450nm处捡测该爽光强度。试验完成后由VIDAS白动分析结果，得出检测值，并打印出每份样本的检测结果，
10仪器下载标准就来标准下载网
miniVIDAS或VIDAS
11试剂
11. 1 E. cot O157 试剂条(VIDAS FCO):11.2校止液：纯化灭活的E.coti0157抗原标准溶液11. 3阳性对照。
11. 4阴性对照。
11.5 MLE 卡。
12操作步骤
12.1前增菌
以无菌操作取检样25g（mL加人到含有225ml.mFC+n肉汤的均质袋Fi，在拍击式均质器_上:连续均质lmin～2min;或放入盛有225ml.mEc+n肉汤的.均质杯,8000r/min~～10000r/min均质1min~2min。于36℃+1℃培养6h~7li。同时做阳性及阴性对照。12. 2 增菌与处理
取1mL前增菌肉汤接种于9mL改良麦凯肉汤（C1-MAC)，于36C+1℃培养17h~19h然后取1mL增菌的Cr-MAC肉汤加人试管中，在IG0℃水浴巾加热15min剩余增菌肉汤存于2℃～8'C，以备对阳性检测结果确认。12.3上机操作
12.3.1输入MI.E卡信息
每个试剂盒在使用之前，首先要用试剂盒中的MLE卡向仪器输人试剂规格（或曲线数据）。每盒诚剂只需输人一次。
12.3.2校正
在翰人MLE卡信息后，使用试剂盒内的校正液进行校正，校正应做双份测试。以后每14行：-次校正。
12.3.3捡测
取出试剂条，待恢复牟室温后进行样本编号，建立工作列表（wurk list)，输入样本缓号，分别吸取500μl.对照和样本（冷却至室温）川入到试剂条样本孔中央。依屏幕提示，将试剂条放入6
仪器相应的位置。
所有分析过程均击仪器自动完成，检测约需45min。12.4结果报告
GB/T 4789.362008
检测值是由每份样本的相对炎光值(RVF)与标准溶液RVF相比得出，见(1)检测值一
样品RFV
标准RFV
若检测值<.0.10,则报告为阴性;若检测值0.10,则报告为阳性。12.5阳性结果的碚认
用第一法或第一法对保存于2℃~~8℃的增菊肉汤分离鉴定确认。12.6阴性结果的报告
阴性结果可直接报告25g(mL)样品中未检山大肠埃希氏菌0157:H7。第四法全自动病原菌检测系统筛选法13原理
I3AX系统利用多聚酶链反应(PCR)来扩增并检测细菌DNA特异片段来判断日标菌是否存在反应所需的引物、LNA聚合酶和核苷酸等被合并成为一个稳定、十燥的片剂,并装人 PCR管中,检测系统运用爽光检测来分析PCR产物，每个PCR试剂片都包含有爽光染料，该染料能结合双链LVA，并且受光激发后发出荧光信号，在检测过程中.BAX系统通过测量荧光信的变化，分析测量数据.从而判定阳性或阴性结累。
14仪器和材料
14.1IAX系统主机及1作站
14.2仪校正板。
14.3带帽裂解八联管及管架
14.4盖增2器
14.5加热措两个。
14.6温度计，
14.7单道川样器：20μ200μl.、5ul.~0m、8道加样器，范用为5μ-50μl及配套带滤芯的吸头。
14.8冷却，
14.9PCR管支架
14.10打印机。
15试剂
15. 1 PCR 管。
15.2解缓冲液。
15.3蛋白两
15.4溶菌试剂：第A.11章，
16操作步骤
16.1增茵
同5.1。
GB/T 4789.36—2008
16.2上机操作
16.2、1打开加热搏分别至37°C和95℃：检在冷藏过夜的冷却槽(4℃）。开机并启动BAX系统软件。如果仪器白检底设校止，按屏幕提示进行校止操作，16.2.2例建“rack\文件：根据提示在完整的“rack”文件和\个样\资料中输识别数锯。16.2.3溶菌操作：在管渠上蔽上标记好的溶菌管。作每支溶菊管加入200L配制好的溶菌试剂，将每个增荫后的5μl.样品加人相应的溶菌管中，益上盖子。把管架放在 37℃血热槽中20 min。再将管架放在5℃的第一块加热中10 mil，最后将管架放在冷却槽1（冷却槽从冰箱取出后30 min内使用完毕),样品冷却5 min。
16.2.4血热宿环仪/检测仪：从菜单中选择\RUNFULJ.PROCESS\，呱热到设定温度（加热槽90C，盖子100℃）
16,2.5溶菌产物转移:将 FCR管支渠放到专用冷却上,然后将 PCR 管放入到支架内。将所有的管盖放松并除去-排管盖。用多道圳样器将50μ1溶菌产物切人此排管中，并用替代的透明盖密封PCR管，换用新啵头，重复上述操作，直率将所有样邮较人PC尺管巾。T6.2.6扩增和检测：按“PCRWizard\的房幕提示，将转移后的PCR管放人PCR仪/检测仪中开始扩增，全过程(扩增和检测)需婴大约3.5h。当检测完坡后，“PCRWizard\提示收山样品，并白动显示结果：
16.3结果报告
绿色“一\表示阴性结果。
红色“十”表示阳性结果。
黄色“\衰示不确定结果
黄色“？”带斜线装示错误结果16.4不确定和错误结果的处理
取保存于2℃～8℃的增菌肉汤重新上机检测。16.5阳性结果的确认
用第一法或第二法对保存于2℃～8℃的增菌肉荡分离鉴定确认。16.6阴性结果的报告
阴性结果可直接报告25gml)样品中未检出大畅埃希氏菌(157:H78
A.1改良EC 肉汤(mEC+n)
A.1,1成分
胰蛋白陈
3号胆盐
磷酸氢二钾（K2PD,o)
磷酸一氢钾(KAPO)
氯化钠（NaCU
新生霉素钠盘缩（20ing/mL)
蒸馏水
pH6.9±0.h
A.1.2制法
除新生霉事
121℃高压灭菌
度冷至50℃以
(规范性附录）
培养剂和试剂
GB/T4789,36--2008
所有成分溶解在水中，加热煮沸，在20℃-25℃下校正H至6.910.1，分装，min.备用，制备浓度为20mg/mL的新生霖素储备溶液，过滤法除菌。待培养基温时
按1000mL培养基内加1mL新生荐素储备液，使最终浓度为20mg/LA.2改良山梨麦康凯(C-SMAC)琼脂A.2.1山梨醇麦
A.2.1.1成分
蛋白陈
3号胆盐
氟化钠
中性红
结晶紫
蒸馅水
pH 7. 2±0. 2
A.2. 1.2制法
SMAC)琼脂
1 000. 0 rnL
所有成分溶解在蒸溜水巾,加熟煮沸,在20%~25℃下校正PH 至7.210.2,分装,121C高片灭菌15 inin
A.2.2亚碲酸钾溶液
4.2.2.1成分
亚碲酸钾
蒸馏水
GB/T 4789.36—2008
A, 2. 2. 2制法
将业碲酸钾溶于水，过滤法除菌。A.2.3头孢克（Ccfixime)溶滴
A.2.3.1成分
头孢克脖
96%乙醇
A. 2.3.2制法
200.0 ml.
将头孢克肟溶解于酒精巾,前皆1待其充分溶解片过滤除菌。分裴试管，储存于一20℃),有效期年：解冻后的义孢克溶液不应再冻存，且在2℃～8℃下有效期14d。A, 2、4CT-SMAC制法
坂1C0OmL灭菌强化并冷却至45℃二1℃的山裂醇麦康部(SMAC)琼脂，加入1mI.亚碲酸钾溶液和 _0 mL 头孢克溶液,使亚碲酸钾浓度达到 2.5 mg/1.,头孢克浓度达到 U.05 mg/L,混勾后倾注平板。
A.3三糖铁(ISI)琼脂
A.3.1成分
造白陈
牛肉膏
衡萄糖
氯化钠
硫酸亚铁铵[Fc(NH,)，·6H20
硫代硫酸钠
蒸馏水
pII 7. 40. 2
A.3.2制法
1 00.CmI.
将除琼脂和酚红以外的各种成分溶解于蒸馏水中,在 20℃～~25℃下校正 pH 至 7. 4±0. 2。加入琼胎,加热煮沸以溶化琼脂;圳人 0.2%酚红水溶液12.5 mI,摇勾。分装试符，装量它多些，以便得到较高的底层，21C高压灭菌15min，放置高层斜面备用，A.4月桂基磺酸盐蛋白陈肉汤-MUG（LST-MUG）A.4.1成分
胰蛋白陈
氯化钠
磷酸氢二钾（K,HPO）
磷酸二氧钾(KH,PO,）
月桂基硫酸钠
4-甲基伞形酮-B-D-葡翁糖醛酸苷（MLG)）蒸瘤水
pH 6. 8±0. 2
1 000,0 mL
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