本标准规定了化学品 藻类生长抑制试验的方法概述、试验准备、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。本标准适用于测试试验条件下溶于水的化学品。 本标准等同采用经济合作与发展组织(ＯＥＣＤ)化学品测试导则Ｎｏ．２０１(２００６年)《藻类生长抑制试验》(英文版)。 GB/T 21805-2008 化学品 藻类生长抑制试验 GB/T21805-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net
本标准规定了化学品 藻类生长抑制试验的方法概述、试验准备、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。本标准适用于测试试验条件下溶于水的化学品。　本标准等同采用经济合作与发展组织（ＯＥＣＤ）化学品测试导则Ｎｏ．２０１（２００６年）《藻类生长抑制试验》（英文版）。
本标准等同采用经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则No.201(2006年)《藻类生长抑制试验》(英文版)。
本标准做了下列编辑性修改:
---将计量单位改为我国法定计量单位。
---将原附录1术语和定义调整为正文。
---增加了普通小球藻(犆犺犾狅狉犲犾犾犪犞狌犾犵犪狉犻狊)为受试生物。
---将原附录4的内容调整到正文6.1.2藻类的储备培养和6.1.3 藻类的预培养。
---删除了原附录2中藻种来源相关内容。
本标准的附录A、附录B和附录C 为资料性附录。
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。
本标准负责起草单位:环境保护部化学品登记中心。
本标准参加起草单位:沈阳化工研究院安全评价中心、上海市检测中心、上海市环境科学研究院。
本标准主要起草人:周红、菅小东、马馨、蔡磊明、赵玉艳、戎志毅、沈根祥。

ICS 13.300;13.020.40
中华人民共和国国家标准
GB/T 21805—2008
化学品
藻类生长抑制试验
Chemicals-Alga growth inhibition test2008-05-12发布
中华入民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-09-01实施
GB/T21805—2008
本标准等同采用经济合作与发展组织（OECD)化学品测试导则Na.201(2006年）藻类生长抑制试验》(英文版)。
本标准做了下列编辑性修改：
将计量单位改为我国法定计量单位。将原附录1术语和定义调整为正文。-增加了普通小球藻（ChlorettaVulgaris）为受试生物。将原附录4的内容调整到正文6.1.2藻类的储备培养和6.1.3藻类的预培养。-删除了原附录2中“藻种来源”相关内容。本标准的附录 A,附录 B和附录 C 为资料性附录。本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。本标准负责起草单位：环境保护部化学品登记中心。本标准参加起草单位：沈阳化工研究院安全评价中心，上海市检测中心上海市环境科学研究院。本标准主要起草人：周红、管小东、马馨、蔡磊明、赵玉艳、戎志毅、沈根祥。T
1范围
化学品藻类生长抑制试验
GB/T 21805—2008
本标推规定了化学品藥类生长抑制试验的方法概述、试验推备、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。
本标推适用于测试试验条件下溶于水的化学品。如果要测试挥发性、强吸随性、有额色、不溶或难溶于水的化学品，以及可能影响培养基中营养物质有效利用的化学品，需要对所述试验程序进行修改（如采用密团系统,适当的试验容器)，参考文献[2]、[3]和[4]提供了部分修改方案。2术语和定义
下列术语和定义适用于本标推。2.1
生物量hiomass
单位体积试验介质内活体生物的于重，例如克每升试验溶液。生物量通带被定义为质量，但在本标推中，定义为单位体积的质量，且以单位体积内细胞数量或荧光性等的测定替代生物量的测定。2.2
变异系数cnefficient ofvariation标准差与乎均数之比，通常以百分比表示，记作CV%。变异系数是一个无量纳的数，因而使于样本间的相互比较：对照组各平行平均比生长率的变异系数的平均值按以下方式计算：a）分别计算试验各阶段各平行的平均比生长率，b）计算试验各阶段对照组各平行平均比生长率的变异系数的平均值，2.3
效应浓度EC
引起受试生物生长或生长率比对照下降%（如50%)时的受试物液度。EC有基于生长率的E,C和基于生长量的E,C之分。
藻类生长培养基growtlimedium
含有特定营养成分的液体或胶状物质。藻类在培养基中生长并暴露于受试物。通常是将受试物溶于培养基中。
生长率growthrate
即平均比生长率（averagespecificgrowth rate），是暴露期间谦类生物量的指数增长率。2.6
最低可观察效应浓度Iowest observed effect concenfration；LoEC在一定暴落期内，与对照相比，对藻类生长有明显（力0.05)抑制效应的最低受试物设置浓度。商于LOEC的所有试验浓度均可观察到与LOEC时相同的或更严重的毒性影响。如果未满足上述条件，应就LOEC(以及NOEC)的选择进行详细说。2.7
无可观察效应浓魔noobservedeffcetconcentration；NOEC直接低于最低可观察效应浓度(LOEC)的受试物设置浓度。1
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响应变量 responsc variable
可替代生物量评价受试物对藻类的毒性的各种参数，妞生长率和生长量。2.9
比生长率specific growthrate
试验期间，每天生物量的增长。生物量自然对数之差与时间之差的商。2.10
生长量yield
试验期间，生物量增长的测定值，试验结束时名试验容器中类生物量与试验开始时各试验容器中藻类生物量之差。
3受试物信息
结构式：
蒸气压；
水中溶解用
正辛醇-水的剪
配系数(P。
水溶液中的定量分析方法
光化学程
在水中白
在试验学
光吸妆性
水解离常
4方送概述
4.1原理
降辩性；
的稳定性：
数Ka）
受试的浓度不
(或)蓝藻暴露于含有术属
活回收率和仪器
好处于着数生长期的谈水绿藻和美受试的水溶液中，验扇期为72定并记录：
24 h.48 h 和 72 h 藻类
的生物量,计算抑制率(根比),得出 ECs及其 95%置信区间,并统计得出最低可观察效应浓度KNOEC)。 显然试验周期相对较短,但是道过藻类若干代的繁殖可(LOEC)和（或）无可观察效
以评价其效应。
测定不同时间藻类的生物重以量化类的和生长抑制。由于藻类干重难以测定，多使用其他参数替代，如细胞浓度、炭光性和光密度等。应知晓所使用的替伐参数与生物量之间的换算系数。测定终点为生长抑制。可以试验期间平均比生长率或生物量的增加来表达。从一系列试验浓度下的平均比生长率或生长量可以获得致使类生长率或生长量受到%抑谢（如50%）的被试物质浓度，并表达为E,C或EC（如E,Csp或E,Co。4.2参比物
本标推使用3，5-二氯苯酚作为参比物叫，对于绿藻，也河使用重铬酸钾作为参比物。定期测试参比物对类生长的影响，至少每年两次。5仪器和设备
5.1试验容器
试验容器和其他与试验液直接接触的器匪应完全为玻璃或其他化学情性材料制成，用于测试前应2
彻底湾洗并灭菌。
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试验容器为具有一定容积的玻璃瓶，如三角瓶，以保证试验期间有足够的试验液用于测试，同时也保证CO的充分交换（要有一定的表面积-体积比：125mL三角瓶中试验液的体积应为40mL~60mL，250mL三角瓶应为70mL~100mL，500mL三角瓶应为100mL~150mL。注意必须保证有足够的液体用作分析测定。
为了防止有机或无机污染物影响藻类的生长和培养基的组成，容器应用棉塞、海绵塞、滤纸，纱布(2层～3层）、锡箔纸等封闭。
挥发佐化学品试验时应用磨口玻璃塞完全密封。同一批试验的容器应规格一致。5.2培养设备免费标准下载网bzxz
使用可控制温度在士2℃范围内的光照培养箱，5.3照度计
测定光照强度的仪器：注意，光照强度的测定方法非常重要，使用不同类的光接受器得到的结果可能不同。最好使用4元的面照度计（可接受来自各方向各角度的直射或反射光照）或2元球面照度讨(可接受来自上方各角度的直射或反射光照)。5.4测定类生物量的仪器设备
细胞计数是最常用的替代参数，用于计数的仪器设备主要有电子颗粒计数仪，显微镜、浮游植物计数框或血球计数板、手动计数器等。应明确细胞计数和干重之间的转换关系。也可使用分光光度计、比色计、荧光计、流动细胞计数仪等测定其他替代参数。为了在低生物量时进行有效测定，使用分光光度计吸收池的光径必须至少为1亡m。5.5其他仪器设备
-pH计;
电子分析天平；
.一高压灭菌锅；
机械振荡器等。
6试验准备
6. 1受试生物
6.1.1．受试生物的选择
选择一些不易附着于瓶壁上的绿藻和蓝藻作为受试生物。a）绿菜
羊角月芽藻（Pseudokirchneriellasubcapitata）：-椰(Desmodesmus subspicatus);普通小球藻（Chiorellatulgaris）b）硅藻
舟形藻（Naviculapelliculosa）c）蓝藻
水华鱼腥藻（Anabaenaflos-aguae）：聚球(Synechococcus leopoliensis)。上述藻类的详细信息见附录 A。也可选用其他藻类，但应在报告中说明其品系和（或）来源，并确保在试验期间相应的试验条件下保持指数生长。
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6.1.2藻类的储备培葬
得到纯藻补后，需要加以保存，以备试验时用。藥种可在试管内固体培养基斜面上保存。在培养基中加入0.8%的琼脂，灭菌后倒入试管，冷却成斜面，然后接种藻类，棉塞封闭，在较低光照和温度条件“下可保存较长时间。大约每隔2个月转接一软。如果经常进行试验。储备培养物应在液体培养基中保存。在三角瓶中加人约100mL培养基，接种藻类，在试验要求的相同温度和光照条件下培养，每周转接一次，以保持培养物生长良好，随时有足够的数量可用于试验。对于生长快速的类，接种量为转接前萍细胞浓度的1%。一般应在类进人生长停滞期前转接。
应该经常检查储备培养中藻类的坐长情况，包括形态和生长速度，以及有无菌类和其他藻类的污染。培养物有畸逐生长或受到其他藻类或菌类的初染肿应予废弃或采最纯化、复壮等措施。为了避免藻种受到细菌研其他藻类的污染，必须在无菌室进操作。6.1.3藻类的预培养
自储备培养物中骏出
一寇的藻液，接融到新鲜的无菌培养基中，在试验要求的相同条件下培养。应候藻类在 2 d~4 d内还到着数生卡(如畸形等)应废弃
6.2试验条件
6. 2. 1 培养基
使用 OECD
物在不同培养基中
当受试物为金有
的藻类培
藜类的影
合物或遗：
崩录B。种培亲
中应说明修改后培既基
基的组分,并
6.2.2其他条件1
温度 21℃~2
4℃,,一试验中
置。如果使用了非犹身红推荐的落，养温度。
连续均勾光服，蓝藻的占
范围400nm~~700nm
120 μE - m-3 8-1).
荐的挚
养基的合理
帮藻种，为
时于试题，若类被染或生长异常值和缓冲量不同因此，向一受试中离子化程度较高时。
时，可适当修改理养基，但在报告故并每天恐变其在培养籍中的位控制的要求,可需要适当提高培
照强度应适宜于被试生物。光谱-~8 850 lx60 μE - m-2 . s-1 -他推荐藻种，特别是永华鱼藻（Anabaeflasaquae)在光照强度为
2 960 1x-~4 440 1x (40μE
±15%范围内。
-1 ～60 μE - ㎡-2· 8-)时生长好。光照强度差异应保特在
机械振荡器：(100土10)次/in或定时%工摇动若干效7试验程序
7.1制备
7.1.1受试物溶液的制备
如果受试物为易溶于水的化学物质，用经灭菌后的新鲜培养基配制受试物的储备液，其浓度为测试时所需最高度的2倍。用此储备液稀释配制成一系列不同浓度的受试物溶，其浓度也分别为测试时所需浓度的 2 倍。
如果受试物为难溶于水的化学物质,用适当的溶剂，例如丙翻、t丁基乙醇和二甲基甲酰胺[2.[3等，制备受试物的储备液，其浓度应是测试时所需最高浓度的10倍。用此储备液稀配制成一系列不同浓度的受试物溶液，其浓度也分别为测试时所需浓度的10倍。应选用对藻类生长无影响的溶剂，试验液中溶剂最大允许使用量为100g/L。1
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7.1.2藻液的制备
镜检并计数预培养的藻类，若类生长良好即可用于试验。试验液中藻类的初始生物是（干重）应小于0.5mg/L，因此，各种藻类在试验液中的初始细胞浓度如下：a）羊角月芽(Pseudakirchneriel&a subcapitata）,5×（1o°~1o*)个/mL：b）栅藻（Desmodesmussubspicatus)，(2~5)×10°个/mLc）普通小球藻（Chiorellauiguris）1o*个/mLd）舟形(Naiculapellicutosa）,lo个/me）水华鱼腥藻（Anabaenaftos-aquae），lo+个/mL：f)聚球（Synechocaccuseupotiensis),5×(1o*~105)个/mL如果受试物为易溶于水的化学物质，藻液中的藻细胞浓度为初始细胞浓度的2倍；如晃受试物为难溶于水的化学物质，藻液中的藻细胞浓度为初始细胞浓度。7.1.3试验液的制备
如果受试物为易溶于水的化学物质，将受试物辫液和藻液以1：1的比例混合，为试验液。对服组不加人变试物溶液而加入同体积的无菌培养基。如果受试物为难溶于水的化学物质，间一定体积的藻液中加人10μL受试物溶液，即为试验液。增设浴剂对照组，其中加人10μL溶剂。7.2试验操作
7.2.1预备试验
正式试验之前，先进行较大范围浓度系列的预备试验，为正式试验设置受试物的浓度提供依据。预备试验不设平行。
7.2. 2正式试验
根据预备试验的结果进行正式试验，最好在对藻产生5%～75%生长抑制效应之间以儿何级数设置受试物浓度系列。正式试验至少设5个浓度，浓度的间隔系数大于或等于3.2，每个浓度3个平行。
如果试验不需要得出无可观察效应浓度（NOEC)，可以适当减少平行数而增加试验浓度。应同时设置空白对照组，若使用溶剂，还应增设溶剂对照组，对照组至少设3个平行。如果条件允许，对照组平行数为处理组的2倍。7.2.3试验周期
试验周期为72h。但如果为了满足质量保证与质量控制的各项要求，也可根据实际情况缩短或延长试验周期。
7.2.4藻类生长情况测定
试验开始店，每隔24h，即在24h、48h、72h时，从每个试验容器中取样镜检并进行生长测定。吸少量试验液进行测定，测定完成后，严禁将取出的试验液放回至试验容器中。测定项目包括藻细胞浓度、光密度或叶绿素等，测定方法如下：a）细胞计数：在显微镜下，用0.1mL计数框或血球计数板对瀚细胞的数量计数。用计数框时可采用视野法，即对显微镜视野中的所有细跑计数。放大倍数40×10，每片至少计数10个规野，如果藻细胞密度小，则要适当增加计数视野，藻数按视野累妞。每次计数（同一批取样的样品）应采用相同方法（视野数自、放大倍数等）。每一样品至少计数2次，如计数结果相差大于15%，应予重复计数。如工作量过大，可先取样，用餐哥氏液固定后保存，留待以后计数。镜检计数工作量较大，有条件时可采用电子颗粒计数仪。b）光密度：取一定量的测试液在分光光度计上测定其光密度，波长可选用650nm、663nm或其他波长。亦可用荧光光度计测定。c）叶绿素：样品经离心或过滤后，用丙酮、乙醇其他溶剂萃取，进行分光测定。亦可用荧光光度5
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计测定。
7.2.5分析检测
试验汗始和结束时,应测定对照组和各处理组试验液的PH值PH 值的差异小于1.5。如果受试物是金属或混合物，且在试验的pH值在右发生部分离子化，那么必须限制pH值的偏移，以确保获得可重复的试验结果。偏移小于0.5在理论上是可行的，并且可以通过确保有充足的CO。在空气和试验液间交换来实现，例如增大摇动频率。另一个途径是减少初始生物量或缩短试验周期来减少对CO，的需求。
建立试验液中受试物浓度的分析测定方法，试验开始和试验期间定期取样测定，以验证各处理组试验液的初始浓度以及试验期间的暴露浓度。如果试验期间受试物的浓度能维持在设定浓度（或初始测定浓度）士20%的范围内，测定试验开始和结束时一个高浓度组、一个浓度组和约50%生长抑制浓度组试验液中受试物的浓度：如果不能，则测定各浓度组试验液中受试物的浓度。如果受试物具有挥发性、不稳定性或强吸附性，则每24 h应测定一次。用于受试物浓度分析的培养基应与成验用培养基经过同样的处理，即它必须接种了绿且在与试验相同的茶件下培养。如果需要分析溶解的受试物浓度，必须将藻类从塔养基中分离出来。最好使用离心法进行分离，较低转速就可使藻类沉淀。结果计算以测定浓度为准。如果测定浓度为设定浓度（或初始测定浓度）的80%～120%，可以用设定浓度或初始测定浓度来计算；如果超出该范固，则使用测定浓度的儿何平均值或受试物浓度下降的模型进行结果计算[[。
相对于其他绝大多的短期水生生物毒性试验而言，藻类生长抑谢试验是一个动态的试验系统。试验中实际的暴露浓度难以确定，尤其是对于强吸附性物质在低浓度时。因此，由于吸附于生物量塔孤的藻类上，试验液中被试物质的消失并不意殊着它从该试验系统中消失。结果计算时，须核查在被试物质浓度降低过程中是否伴随着类生长抑制效应的减小。如果发生此类情况，寒议应用合适的被试钩质浓度下降的模型。如果未发生此类情况，最好采用初始浓度（设定或测定）的分析结果进行计算。7.2.6试验观察
试验结束时，镜检试验液中藻细胞生长是否健康正常，记录并说明细胞的任何常情说，如畸形等(暴露于受试翻中引起的)。
7.3限度试验
若预试验的结果表明，受试物在100mg/L的浓下（或在试验溶液中的最大溶解度下，该溶解度大于100mg/L)对受试藻类没有产生任何可观察效应，正式试验可使用限度试验，限度试验的浓度为100血g/L，如果受试物在试验液中的最大溶解度大于100mg/工，则取该最大溶解度作为限度试验的浓度。
限度试验设6个重复，对照组与处理组应同时进行。所有上迹有关试验条件和质量保证与质量控制的内容均适用于限度试验。对照组和处理组中测得的响应变量需用统计学方法进行比较分析，例如学生民(Studet)t检验：如累两组所得变量不规则，应调整t检验的方法。8质量保证与质控制
试验送到以下指标方为有效：
a）试验开始的72h内，对照组藻细胞浓度应至少增加16倍，即比生长率不小于0.92d-1。对于常用的试验藻种，生长率远高于此（见附录A）。如果试验使用了其他生长较慢的藻种，该指标可能不能被满足。如果发生此类情况，应延长试验周期，直至对照组藻细胞呈指数增长且浓度增加16倍：同时，也可缩短试验周期，但至少应为48h且供给充足，同样应达到对照组藻细胞皇指数增长且度增加16倍。
b）试验各阶段，如0d～1d,1d~2d和2d-3d,对照组比生长率的变异系数的平均值小6
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于35%。
熟个试验期闻，对照组各平行的平均比生长率的变异系数，羊角月芽藻（Pseudokirchneriellasubcapitata）和栅藻（Desnadesmussubspicatus）不大于7%，其他推荐藻类不大于10%。9数据与报告
9.1数据处理
9.1.1绘制生长曲线
用测定的替代参数(如藻细胞浓度、荧光性)表示试验容器中藻类的生物量。以表格形式列出24h、48h和72h对照组和各处理组的试验容器中的藻类生物量。以肘间为横轴，藻类生物量为纵轴，敢各平行的平均值，绘制对照组和各处理组的藻类生长曲线。对数坐标轴和直线坐标轴均可使用，但是用对数坐标轴作出的生长曲线是一条直线，其斜率就是藻类的比生长率，它可以更好地表达藻类的生长模式。观察生长曲线，检查试验期间对照组的指数生长是否达到顽期的生长率。仔细检查所有数据点和相关图表，核对原始数据和可能产生误差的环节。存细检查可能偏离系统误差的所有数据点。如果发现了明显的程序上的错误或该错误发生的可能性非常高，将相关的数据点标为异带值，并在进行下一步的统计分析时副除这些数据（如果其中一个平行中类的浓度为零，那可能是该平行试验液中末接入藻类或器血的洗涤方法不正确）。试验报皆中对于作为异常值被副除的数据应闻明其原因。可以接受的原囚仅仅只限于程序上的错误和精密度差。判定异常值的统计学程序仅仅适用于此类问题，它并不能代替专家评审。最好在之后出现的图表中保留异常值。9.1.2参数计算
本标准应计算以下参数以评价受试物对莱类的影响：a）比生长率：试验期间，每天生物量的增长，见式（1)：Fi
_ InX, -lnX:
式中：
i-——从时间到时间的比生长率，单位为每天(d\\)；Xi时间的生物量；
X，—i时间的生物量。
对于各处理组和对服组，计算各平行的平均值进行毒性评价。13
采用初始接种生物量的设定值计算整个试验调期（通常0d～3d)的平均比生长率，比采用测量值计算的更精确。特别是生物量浓度低时，如果测定生物最时使用了非常精密的仪器（如流动血细胞计数仪），可使用初始生物量浓度的测量值进行计算。计算并评估试验过程中每天的（0d~1d、1d～2d和2d～3d)比生长率，并检查对照组的生长率是否符合质量保证与质量控制的要求。如果与总平均比生长率相比，第一天的比生长率相当低，说明一天藻类处于生长停滞期。通过预培养消除对照组中的生长停滞期或使其最小化，暴露组中的生长停滞表明藻类经受试物作用后可能恢复或由于受试物的损失（包括吸附于藻类）暴露景减少了。因此，为了评价暴露期间发生的受试物对藻类生长的影响，应评价试验各阶段的生长率，如果平均比生长率和各阶段生长率间存在显著差异，说明藻类未保持持续指数增长，因此，要存细检查生长仙线。b）以比生长率为基础的抑制率，见式(2)：I,=二×100
式中：
I.—以比生长率为基础的抑制率，%；(2)
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uc——对照组各平行比生长率的平均值：T-—处理组各平行的比生长率。生长量：试验期闻，生物量的增长，见式（9)：e=Y2×100
式中;
I，以生长为基础的抑制率，%，Yc-对照组各平行生长量的平均值；Y——处理组各平行的生长量。
如果试验设置了溶剂对照组，进行抑制率计算时，应以溶剂对照组为准。3
由比生长率和生长量分别得出的毒性数据没有可比性，在应用试验结果时应注意区分。由于计算方法的不同，由平均比生长率得出的EC.（即E,C）一般高于由生长量得出的EC（即E,C）。由于仅仅是所使用的计算方法不同，两个变量灵敏度的差异不用特别说明。平均比生长率的定义基于在营养充足的条件下藻类的指数生长模式，毒性评价是依据受试物对生长率的影响，而不是依据对照组比生长率的绝对水平，剂最-效应曲线的斜率或试验同期。相对面言，基于生长量得出的结果是根据所有这些其他变量得出的。由于种类和品系的不同，基于各试验中种的平均比生长率和最火比生长率得出的E,C,也不同。该响应变量不能用于比较不同种类和品系的类对有每物质的灵敏度。用平均比生长率进行毒性评价更科学。
9. 1.3绘制剂量-效应曲线
以受试物浓度的对数值为横坐标，比生长率的抑制率或生长量的抑制率牵为纵坐标，作回归曲线，即为剂量-效应曲线，作回归曲线时应忽略上一阶段已定为异常值的数据。采用直线内插法或其他计算机统计软件得出ECsp.ECI和（或)EC这些关键值。但该方法有时可能不适用：
a）计算机统计软件不适用于所得数据，专家评审更有利于得到更可靠的结果，这种情况下，一些软件甚至不能给出一个可靠的解决办法（叠代不集中等)。b）-般的计算机统计软件不适于处理刺激效应的数据。9.1.4统计分析
通过回归分析得出量化的剂量-效应关系。对数据进行线性转化斥一一例如概率单位，对数或韦布尔（Weibull>单位们，可能可以用加权线性回归进行统计，但是非线性四归是能够更好地处理不规则和偏离曲线但又不能忽略不计的数据的首选方法。对于像接近0%抑制率或100%抑制率这样不规则的难以进行分析的数据，通过转化可能被放大。注意便用概率单位、对数或韦布尔（Weibull)单位转化的标准方法是针对量子（如死亡率或存活率)数据的，为了使其与生长和生物量的数据相兼容，必须进行改良。由连续数据确定EC的特殊程序见参考文献[9][10]和[11]。附录C详细说明了非线性回归分析的虚用。
统计分祈各响应变量，道过剂量效应关系求出EC-及其95%置信区间（如果可能。最好作图或统计分析响应数据是否与回归模型相符。采用各平行所得数据而不是各平行的平均值进行回归分析。如桌数据过于分散，难以或不能采用非线性曲，需用各平行的平均值进行回归，这样可以减少来自可凝异常值的影响。如果选择这样处理，在报告中应将其作为对常规程序的背离进行说明和验证，因为曲线与个别平行相符并不是个好绪果。如果所得数据无法通过可以利用的回归模型/方法求出EC5及其95%置信区间，可采用直线内插。
通过单固素方差分析（ANOVA），比较各处理组受试物对藻类生长影响的平均值，得出LOEC和NOEC。必须采用适当的多重比较方法，比较各处理组的平均值和对组的平均值是否存在显著性差CB/T 21805—2008
异，建议采用邓恩特（Dunnett)法或威廉（Wiiams）法进行多重比较，见参考文献[12]、[14]、[15][16].[17]。必须评估ANOVA中变量具有齐次性的假设是否成立。可通过作图或试验[1进行评估。建议采用列文(Levcne)法或巴特利特(Bartlett)法检验变量是否具有齐次性，如果结果是否定的，则应通过对数转换进行校正。如果非齐次性异常显著，难以通过数据转换来较正，建议采用递减的Jonkheere趋势检验进行分析，其他确定NOEC的推则见参考文献[11]。近来科学的发展力主抛弃NOEC的概念而用EC_替代。对于藻类试验面言，表示多少最合适尚未定论。10%～20%范围内的值都比较合适(根据响应变量的不同）,最好能同时给出EC1和EC9.1.5生长刺激
试验有可能观察到低度生长刺激效应（负抑制率）。产生此效应的原因可能是毒物兴奋效应（毒物刺激效应)或受试物中刺激生长的因子加入至最少量的培养基中所致。注意，加入无机營养盐并不会产生直接的影响，因为试验期间培养基中的营养成分是保持过剩状态的。计算EC时，如果观察到明显的刺激效应或备要求解的EC，中值较低，意议采用毒物兴奋效应模型。否则可忽略不计。计算时尽可能避免从原始数据中删除刺邀效应的部分。如果所使用的统计软件不容许刺激效应（次要地位）的出现，聚用直线内插法。
9.1.6非受试物霉性引起的藻类生长抑制由于遮挡会减少有效光照，对于具有光吸收性的受试物来说，生长抑制现象加剧。应通过修改试验条件和试验方法等来区分出于理化性质等造成的对藻类生长的影响。相关难则见参考文献[2]和[3]。9.2试验报告
试验报告应包括以下内容：
）受试物
物理属性和相关理化性质，包括水中落解度：化学特性（如CAS编号）,包括纯度：b）受试生物
藻类的种类、来源或提供者，以及培养条件。）骤条件
试验开始日期和持续时间：
试验设计：试验容器、培养体积和试验并始时的生物量密度；培养基的成分；
一试验浓度和平行（如平行数、试验浓度数及其公比）试验液的配制，包括溶剂的使用；培养设备；
光照强度和光质(来源，是否均)；温度：
浓度测定：设定浓度和所有实测浓度，应说明添加回收试验的方法和仪器的最低检测限；对本标准的所有背离；
生物尽的测定方法，以及所测参数和干重的关系。d）结果
试验开始和结束时各处理组的 PH 值-一生物量的测定方法，以及各测定点时各试验容器中的生物量：生长曲线（生物量-时间)：
-一计算出的各平行的各参数值，及其平均值和变异系数；一剂量-效应曲线：
-评估受试物对藻类的毒性，如ECs,ECoECa及其置信区间。LOEC和NOEC及其统计9
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方法(可选)；
如果采用单因素方差分析（ANOVA)进行统计，说明最小显著差数：各处组中任何对藻类生长有刺激效应的结果；观察到的其他效应，如藻类在形态学上的改变；结果讨论，包括对偏离的解释说明。10
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