本标准规定了用分光光度计法测定油菜籽中叶绿素含量的方法。本方法不适用于油脂中叶绿素含量的测定。 GB/T 22182-2008 油菜籽叶绿素含量测定 分光光度计法 GB/T22182-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67. 200. 20
中华人民共和国国家标准
GB/T 22182--2008/ISO 10519 : 1997油菜籽叶绿素含量测定
分光光度计法
Rapeseed-Determination of chlorophyllcontent-Spectrometric method(ISO10519:1997.IDT)
2008-07-16 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-11-01实施
本标雅等同采用ISO10519：1997油菜籽为便于使用，本标推做了下列编辑性修改：a）“本国际标准”一词改为\本标准”，b）用小数点\,\代替作为小数点的逗号“，”，c）期除了国际标准的前言：
GB/T 22182—2008/IS0 10519 :1997叶绿素含量测定一一分光光度计法英文版)用GB5491&粮食，油料检验扦样、分样法代替ISO542.1990OilseedsSampling》，d)
用GB/T14489.1油料水分及挥发物含量测定法》代替ISO665.1977Oilseeds—Determinae)
tion of moisture and volatile matter content3.本标准的附录A为资料性附录.
本标推由国家粮食局提出。
本标推由全国粮油标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家粮食局科学研究院、国家粮食储备局西安油脂研究设计院、深圳南顺油脂有限公司。Www.bzxZ.net
本标准起草人：薛雅琳、田淑梅、刘建涛，赵银宁，1
1范围
GB/T22182—2008/IS010519:1997油菜籽叶绿素含测定
分光光度计法
本标准规定了用分光光度计法測定油菜籽中叶绿素含量的方法。本方法不适用于油脂中叶绿素含量的测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励使用本标准的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标推。GB 5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T14489.1油料水分及挥发物含量测定法(GB/T14489.1—1993,eqVIS0665：1977)ISO648：1977实验室用玻璃仪器单标线移液管ISO664:1990油料一试样制备
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3. 1
叶绿素含量chlorophyll content在本标准规定的操作条件下，在波长665nm附近,样品中能产生吸收带的物质的质量分数即为叶绿素 A 的含量(以 mg/kg 表示)。4原理
在适当的设备中，以规定的萃取液萃取样品，用分光光度计测定样品萃取溶液的吸光度来确定叶绿素的含量。
5试剂
除特殊情况外，所用试剂均为分析纯。5.1举取溶液
取100mL无水乙醇于500mL烧杯中再加人300mL无水异辛烷（即2,2.5-三甲基戊烷)或无水正庚烷或无水石油醛（基本成分为C烃类，沸程90℃～100）。6仪器
实验室常规仪器，尤其是下列仪器6. 1 分析天平:感量 0,001 g。6.2机械研磨机：刀片型，或咖啡磨，或相近的设备。6.3微型机械研磨机：带有安全塞，不锈钢球（直径16 mm)的50mL不锈钢简（见图1)和便钢筒简作水1
GB/T 22182—2008/IS0 10519:1997平运动的设备，其频率为240/min，水平振幅为3.5cm。或Dangoumau球磨机\。3号氯丁橡胶密
图 微型机械研磨筒
6.4滤纸：中速，折登成V字漏斗形。不锈制球
6.5分光光度计（最好是波长扫描型的），测定范围600nm～700nm，谱带宽2nm。6.6比色Ⅲ：光径至少1cm。
单位为壶米
6.7移液管：容量30mL，符合ISO648规定的A级要求。或者误差小于1%的30mL加液器。6.8具塞试管：20mL。
7扦样
本标准不规定扦样方法，推荐采用GB5491规定的方法。实验样品应具有代表性，且在运输和储存过程中无损坏和变质。8试样制备
按照ISO664规定从样品中抹出杂质后制备试样。当油料水分高于10%（质量分数)时，在不破坏叶绿素的条件下45℃烘12h，使水分降至不高于10%（质量分数）。
取50g样品，在机械研磨机(6.2)中进行研磨，得到均勾一致的粉未。若用咖啡磨等小型研磨机，分多次研磨，每次10名，彻底混勾样品。9步骤
9.1称样
称取试样（第8章>2g.精确到0.001g，放人不锈钢简或Dangoumau球磨机的萃取容器(6.3)中。9.2萃取
9.2.用移液管（6.7)向钢简或容器中加30mL萃取溶液（5.1)。使用钢简时，向钢俯内加三个不锈球，振荡1h；如使用Dangoumau球磨机时，向容器中至少加4个中等大小的钢球，萃取20min。9.2.2萃取溶液澄清10min，用滤纸(6.4)将上清液过滤到具塞试管（6.8）中，滤液量应能装满比色血(6.6)，立即将试管塞上以尽量减少蒸发。注：萃取液分层时，表明样品水分过高[样品水分不应高于10%（质量分数)].或者是游剂中水分过高（应是无水的。
1）Dangoumau球磨机是一个适当的设备的例于，给出此信息是为了方便使用者应用本标准，而不是指定使用这种设备。
9.3测定
GB/T22182—2008/IS010519:1997将滤液倒入比色血(6.6)中，用分光光度计(6.5)分别测定665nm、705nm和625nm处的吸光度(705nm和625nm处的吸光度用来校准基准线）。10结果表呆
叶绿素含量c，以每干克样品含有的落克数(ng/kg)表示，按式(1)计算：C=kXAmm×y
式中：
k———常数，等于13;
Aer ———修正吸光度,等于 Ag5 —(Azo5 + Aaz5)/2 :A6s——在665nm处的吸光度，
Arns——在705nm处的吸光度！
-在625nm处的吸光度；
加入钢简或容器(9.2.1)中的萃取液体积，单位为毫升(mL)；m一试样的质量,单位为克(g)：
[—比色血的光径，单位为毫米(mm)。用干基表示叶绿素含量时，按照GB/T14489.1测定样品水分含量。11 精确度
附录A汇集了关于本方法的精密度的联合实验室试验数据。对于其他的浓度范圖和测试对象来说，这些试验数据可能是不适用的。11. 1 其复性
在很短的时间间隔内，由同一操作者，采用相同的测试方法，对于同··份被测样品、在同一实验室、使用相同的仪器、获褥两个独立的测定结果。这两个独立测定结果的绝对差值不应大于这两个独立测定结果算术平均值的10%。
11.2再现性
由不同的操作者、采用相同的测试方法、对于同一份被测样品、在不同的实验室、使用不同的仪器、获得两个独立的测定结果。这两个独立测定结果的绝对差值不应大于这两个独立测定结果算术平均值的20%。
12实验报告
实验报告应说明：
-扦样方法，
一采用的检验方法；
获得的测定结果；
如检验了重复性,列出重复性结果。实验报告应包括所有在本标推中未规定或视为任选的操作细节，以及其他可能已经影响了测定结果的所有事件。
实验报皆还应包括完全识别样品所需要的所有信息。3
GB/T22182—2008/IS010519：1997附录A
（资料性阴录）
联合实验室测试结果
按照ISO 5725\，由 16 个实验室进行了国际间联合测试。得出的重复性和再现性实验数据见表 A, 1。
测试结果汇总
参加测试的实验室数目
被排除的实验室数目
平均值/重复性标推偏差S,/(mg/kg)
再现性标准偏差Sx/(mg/kg)
重复性变异系数/%
再现性变异系数/%
重复性限(r)/(mg/kg)
再现性限(R)/(mg/kg）
重复性(r)/%
再现性(R)/%
样品 A～ F 是 1992 年的分析结果;样品 F~ H 是 1990 年的分析结果。B
A--- 25mg/kg叶绿素:
B-30mg/kg叶绿素；
-40 mg/kg叶绿素1
-50 mg/kg 叶绿素;
-75 mg/kg 叶绿素,
80mg/kg叶缘素
-10 mg/kg 叶绿素/
20mg/kg叶缘素，
J——30 mg/kg 叶绿素。
因为实验失败，每组实验中有1个实验室被排除在外。对于样品」来说，多了3个被排除在外的实验室，是因为其中双实验之差大于3 mg/kg.2）IS05725：1986测定方法的精确度-—采用联合实验室测试确定标准测定方法的重复性和再现性3（用1994年版替），用于评价精确度教据，4
参考文献
Oilseeds-Sampling
［1]ISO 542.1990
IS5725-1,1994
［[2]
GB/T22182—2008/ISO10519:1997Accuracy(trueness and precision)of measurement methods and resultsPart l:Gcneral principles and definitions
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