本标准规定了α-乙酰乳酸脱羧酶制剂的术语和定义、要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输和贮存。 本标准适用于符合GB 2760要求的用于啤酒生产的α-乙酰乳酸脱羧酶制剂。 GB 20713-2006 食品添加剂 a-乙酰乳酸脱羧酶制剂 GB20713-2006 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.220. 20
中华人民共和国国家标准
GB20713—2006
食品添加剂，
α-乙酰乳酸脱羧酶制剂
Food additivcα-acetolactate decarboxylase preparation2006-07-18发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2007-05-01实施
1范围
2规范性引用文件
3术语利定义
5试验方法
6检验规则
子标志、包装、运输和贮存
附录A（规范性附录）α·乙酰乳酸脱羧酶酶活力的测定分光光度法
附录B（规范性附录）α-乙酰乳酸脱羧酶酶活力的测定全白动生化分析仪法
GB 20713—2006
本标准的4.3为强制性条款，其余为推荐性条款。本标推的附录A和附录B为规范性附录。本标准由中华人民共利国国家食品药品监督管理局出。GB20713—2006
本标推由全国食品发酵标准化中心和中国疾病预防控制中心营养与食品安全所归口，本标准起草单位：诺维信（中国)生物技术有限公司，南宁邦尔克生物技术有限责任公司本标推主要起节人：翟文景.黄口波,田惠光、侯炳炎,田出栖静、信力行、离继尚、赵力、蒙键宗GB 20713—2006
α艺酰乳酸脱羧酶是日前广泛用于啤酒牛产的食品添加剂。在GB27601996°食品添加剂便用卫生标准31997年增补品种中，已批准了α-乙酰乳酸脱羧酶可以在啤酒工艺中按照止常牛产需要适量使用。
本标准参考了联合国粮农组织/世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会（JECFA）&食品加工用酶制剂的通用规范和说明食品添加剂标准纳要，附件9)以及美国《食品化学品法典》第4版（FCC-IV)第3增刊中的有关要求，同时根据我国国情增加了菌落总数、重金属和神的要求。生产商在使用该标准的同时，建议同时参照相应法律、法规和规范（如采用良好操作规范等），进一步提高产品的安全性，本标准附录 A 的方法修改深用 JFCFA 方法,附录 B 的方法参考了诺维信生物技术有限公可的全白动生化分析仪法
1范围
食品添加剂、（-乙酰乳酸脱羧酶制剂GB 20713—2006
本标准规定了α-乙酰乳毁脱般醇制剂的术语和定义，要求,试验方法，检验规则，标志，包装，运输和贮存
本标准适用于-符合GB 276C要求的用于吨酒牛产的α乙既乳酸脱般酶制剂。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注期的引用文件,其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各力研究是否可能用这些义件的最新版本。凡是不注口期的引用文件,其最新版本适用于本标准，GB/T191包装储运图示标志
GH2763食品添加剂使用卫牛标准GB/4789.2食品卫生微生物学检验菌蒋总数测定GB/T1789.3食品生微生物学检验大肠菌群测定(FH/T4789.食品卫生微牛物学检验沙门氏菌检测GB/I2789.6食品卫生微生物学检验致泻大肠域希氏菊检验GB/T500:).71食品添加剂中重金属限量试验GB/T 5009.75食品添加剂中铅的测定GB/T 5009.76食品添加剂中砷的测定JJF1070定量包装商品净含员-显检验规则国家质量监督检验检疫总局_2905]第75号令定量包装商品计量监督管理办法卫生部L2002_第26号令食品添加剂卫生管理办法3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准，3. 1
(-乙酰乳酸脱羧酶酶活力单位
q-acetolactate decarboxylase(ADU)在30℃.pH 6.0的条件下,1 g或 1rml.酶样品与底物a乙酰乳酸起反应,每分外生成1 μmol 的3-泾基-2酮（乙偶姻），即为1个酶活力单位，以T/g（或U/mJ.）表示，注: 1 U = 1 000 ml.
4要求
4.1外观
液体剂型：淡黄色、棕色至褐色液体，无异味。尤明显沉旋和分层4.2理化要求
应符合表1的规定.
GB 20713—2006
醇活力/(U/g)
4.3卫生要求
应符合表 2 的规定,
重金测[以铅(Pb)计]/(mg/kg)
铅/(mg/kg）
神/（mg/kg）
菌落总数/[CFU/L(或 CFC/g)-
大肠菌群/LMPN/100ml.(或MPN/100g力沙门菌/（个/25 g）
致泻大肠埃希氏菌/(个/25 g)
4.4净含量
表 1 理化要求
表 2 卫生要求
50×103
不得捡出
不得捡出
见标签标注，允许差按国家质量监督检验检疫总局[20051第75号令执行。5试验方法
5.1外观
取样品10mL(或10g)倒入25mL的小烧杯中嗅闻其气味；再日视检查其外观，作出判断并做好记录。
5.2酶活力
按随录A或附录B方法测定。以附录A所述方法为仲截法：5. 3 董金属
按 GB/T 5009. 74 测定。
按GB/T 5009. 75 测定。
按GR/T 5009.76 测定。
5.6菌落总数
按 GB/T 4789,2 检验,
5.7大肠菌茵群
按 GB/T 4789. 3 检验。
5.8沙门氏菌
按GB/T4789.4检验。
5.9致泻大肠埃希氏菌
按GB/T4789.6检验。
5.10净含量
按JJF 1070检验。
6检验规则
6.1组批
GB 20713—2006
以每一个发酵批次生产或最终同处于一个加贮罐、品质均一且经包装出）（或入库)的产品为一批。6.2抽样
抽样时，应采用适宜的方法以保证具有代表性，保证取样部位和取样瓶的清洁。对用于微生物检验的取样，应使用无操作，
成品抽样的样本量见表3。灌装过程中取样的样本量可按照估计的批量参照表3执行，或由生产企业和（或)相关方确定。
表3抽样量
批基/瓶(或件）
151-~1 200
1201～35000
35 000
6.3出厂检验
样本查/瓶(或件）
每批产品出厂时，应对其外观、酵活力、微生物指标，净含量及包装标签等选行逐项检验，6.4型式检验
正常生产时，至少每年对产品检验-次。如有下列情况之一者亦应按本标准全部要求进行检验：正常生产时，如原料，配方或工艺有较改变，可能影响产品质量时：史换设备，或产品长期停产又恢复生产时；出」检验结果与平常记录有较大差别时：-国家质最监督部门提出要求时：6.5判定规则
出厂检验和(或)型式检验合格时.由质量检验部门出具产品合格证.出厂检验和（或型式捡验不个格时，在原批次基础上划倍抽收样品进行复验。如复验仍不合格·则判该批产品为不合格。
7标志包装、运输和贮存
7.1标志
产品的外包装宜使用符合GR/T191要求的标志。产品的内包装上应贴有牢固的标签。产品的标签的内穿应符合卫生部_20021第26号令第四章的要求。标识内容应包括产品名称.厂名厂址、规格、配方或主要成分、生产日期、批号或代号、保质期限，执行标准号和卫生许可证号等，并在标识上明确标示\食品添加剂样。7.2包装
产品的内包装应采用国家批准的，并符合相应食品包装用标准的材料。包装容器皮内涂料应采用国家批准的，并符合相应食品包装用标准的材料。7.3运输
产品在运输过程中应轻拿轻放，严防丽淋和曝晒。运输丁具应清沿，无毒,无污架。严禁与有毒、有害，有腐蚀性的物质混装混运，7.4购存
产品应贮存在阴凉干燥的环境下。严禁与有奔、有害、有腐蚀性的物质同存，7.5保质期
产品的保质期具体见标签标注。产品在10℃下的保质期应大于三个月GB 20713—2006
A.1范国
附录A
（规范性附录）
-乙酰乳酸脱羧酶酶活力的测定分光光度法本方法规定了α-乙酰乳酸脱羧酶酶活力的测定方法，本方法适用于用分光光度计测定α-乙酰乳酸脱羧酶制剂中α-乙酰乳酸脱羧酶的酶活力：本方滤不适用于啤酒和具他含醇产品中-乙酰乳酸脱羧酶的酶活打的测定试样中3·羟苯-2-丁酮(乙偶姻)和(或)双乙酰的存在会使试验结果偏大。乙偶姻在贮存时易形成一聚体，从而影响试验结果。但若遵循配制步骤中所述的措施去预防,本方法仍可使用。
A.2原理
α-乙酰乳酸脱羧酶与底物α-乙酰乳酸反应脱羧生成乙偶姻。乙偶姻在碱性条件下与素酚和肌酸的混合物反应生成红色产物。通过在522Ⅱm下测定溶减的吸光度，可以从乙偶姻标准曲线上得出反应生成的之偶妞的量·进而计算出α-乙酰乳较脱羧酶的酶活力。A.3试剂
除非另有说明，在分析中假使用分析纯试剂和蒸水去离子水或相当纯度的求，A. 3. 1ME5(9.76 号/L)-氧化钠(35. 064 /L)-聚氧化乙烯十二烷基醛1(1,52 mI,/L)缓冲液a）分别称取2-N-鸣嘛代乙基磺酸(2-_N-morμholinoJethanesulfonic cid,MES)48.80 g和氢化钠175.32g于烧杯中，用约4.5L水解，然后加人15%的聚氧化乙烯十二烷基醚溶液7.60 mL，搅拌均句。
b）用约1tmnl/L氢氧化钠溶液调节pII到6.00=0.05。然后移入5000ml.穿量瓶巾,用水定容，搅胖均与，
该溶液在常温（15℃～20℃）下的保存期为一周。A. 3. 2 Q-乙酰乳酸底物(2. 00 mL/L)a) 吸取乙基 2 乙酸湛-2-甲基乙酰乙酸(ethyl-2-acetoxy-2-iethylartoacetate)100μL 于 50 mL容量瓶中，加入约C.50mol/L的氢氧化钠溶液6.0mL搅拌20mi后，加人缓冲液（A.3.1)到药4.mL。
h）用约1r1ol/I.盐酸调节溶液的μH到6.000.05。然后，再用缓冲液（A.3.1)定容。该溶液使用前配制：
A, 3. 3 素酚(10. 0 g/L)/肌酸(1,0 /L)显色剂分别称取1-禁龄 5.0 R和肌酸 0.5 R够入 5C0 riL穿量瓶,用约 1 mol/L的氢氧化钠溶液落解并定容．
该溶液使用前配制。配制时需避光,并且冰浴。注意：1获酚可燃，有毒。对眼和粘膜有刺激性：吞咽或经皮肤吸收都能引起中毒。A,3.4乙偶姻（3-羟基-2-丁酮)储备液(1.000 g/L）a）收--定量的乙偶姻于试管中，在37C恒温箱中溶解。然后将试管置于冰水中使乙偶姻重结1) Bri35 是适合的市售产品的实例。给山这一信息是为了方使本标准的使用者，并不表示对这-产品的认可。4
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品。重结品后，乙偶烟不含有影响试验结果的乙偶姻二聚体，可用于储备液的配制。b）称取重结晶后的乙偶姻0.100g，精确至0.000」g.移人100mL容量瓶巾，用水溶解并定容。乙偶姻对热不稳定，且容易吸潮，因此应放置在干燥器中冷藏(2亡～6℃)保存。如发现物质有明显的吸潮现象，建议放弃不用。
该窃液在冷藏条作下的保存期为一周。A.3.5乙偶姻标准溶液
乙偶姻标准溶液,用乙偶姻储备液（A.3.4)和水按照表A,1稀释而成,该溶綫应每天配制。表 A, 1乙偶姻标准溶液
标准点
乙偶烟储爸落！
用水做第一个标准点。
A.4仗器
A.4.1分析天平：精度为0.0001g。A. 4.2酸度计:精度为 0. 01pH单位：A.4.3恒温水浴锅:30℃=0.1℃。水/
A.4.4分光光度计：可在522 nm1下测定吸光度。A.4.5 卧时器。
A.4.6游涡药器。
A.5分析步骤
A.5.1乙偶姻标准曲线的制备
稀释倍数
乙偶烟/
分别吸取配制好的乙偶姻标准溶液400μL（见表A.1)到10tnL的试普中，然后，依次在每个试臂中加入显色剂（A.3.3)4.6011L，用游涡震荡器充分混合均匀。置于室温，并升始计时。反应40.0min后，使用分光光度，在522t下测定各管溶液的吸光度.A.5.2标准对照品的备
建议使用一个有代表性的、稳定的样品作为标推对照品，在每次分析中，将该标准对照品与样品-同进行检测，以判断试验的重复性。A. 5. 3样品溶液的制备
从样品中弥取-定晟的试料，精确至0.0005多，用辫液（A.3.1)稀释。其稀释的倍数要使得样品的最终吸光度落在乙偶姻标谁曲线的范围内。A.5.4酶拌品的反应
将试料溶液和底物先置于30℃水浴中项热约10ti，然后，按下述片法处理每·个试料溶液：a）样品值H：：吸酶样品溶液200.CμT.于30℃土0.1℃水浴中的10mL试管里，然后加人预热好的底物200.0μL，用漩涡荐器充分混勾，迅速放回到水浴中，并开始计时，5
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bh）空白值H2:用缓冲液(A,3.1)代替试料溶液，依上述步骤进行操作反应20.0mir后，依饮向每支试管中如入显色剂4.60mL（A.3.3),用游祸露落器充分混勾。置于室瘟，重新开始时。
反应40, C min后，使用分光光度计+在522 nII 波长下测定各管溶液的吸光度，A, 6结果的计算和表示bzxZ.net
A.6.1标准曲线
以522nm波长下的吸光度为Y轴，乙偶姻的浓度（1g/1.)为X轴，绘制标准曲线，计算出标推曲线的斜率（或用回归方计算）：
A. 6. 2样品酶活力的计算
样品的酶活按式（A.1)计算：
= ( - H)×0. 001 135 × F
式中：
U—样品的酶活力，单位为酶活力单位每克（/g）；Hi—-样品的吸光度；
一空白的吸光度；
0.0011351——0.1g的乙偶姻所对应的率尔数；F-样品溶液友应前的总稀释倍数；m——试料的质量，单位为克（g)；h——标准曲线的斜率，
A, 6.3 结果的表示
样品的测定结果用算术均值表示.(A.1)
当结果小于1U/R(或1L:/mL)时给出一位有效数字：当结果大于等于1U/g(或1L/mL)且小于100L./g（或100L/mL）时给山两位有效数字；当结果大于等于1C0U/g（或100U/mL）时给出三位有效数字。
A.6.4重复性
在重复性条件下获得的两次单独测试结果的绝对差值不人于这两个测定值的算术平均值的10%，以大于这两个测定值的算术平均值的10%的情况不超过5%为前提，6
H.1范围
雕最E
【规范性附录】
心-乙酰乳酸脱羧酶酶活力的测定全自动生化分析仪法
本方法规定了α-乙酰乳酸脱羧酶活力的训定方法GB20713—2006
本方法适用于用全白动生化分析议测定α-乙酰乳酸脱羧酶制剂中a-乙酰乳酸脱羧酶的酶活力。本方法不适用于啤酒和其他含醇产品中a-乙酰乳酸脱羧酶酶活力的测定。本法的检测限为 0. 6 U/或0. 6 L/nlL：试样中3-羟基-2「酮(乙偶姻)和(或)致乙酰的存在会使试验结果偏大，乙偶姻在贮存时易形成二案体，从而影响试验结果。但若遵循配制步骤中所述的措施去预防，本方法仍可徒用。
α-乙酰乳酸脱羧酶与底物-乙酰乳酸反应脱羧生成乙偶姻。乙姻在碱性条件下与茶酚和肌酸的混合物反应生成红色产物，通过在510nm波长下测定标准溶液的吸光度绘制出标准曲线，对照标准曲线进一步计算出酶样品的活力。B.3试剂
除非另有说明，在分析巾仪使用分析纯试剂利蒸馏水或去离子水或相当纯度的水B.3. 1MES(9.76 g/L)-氟化钠(35.064 g/1.)-聚氧化乙烯十二烷基醚(1.52 mL/L)缓冲液见 A. 3. 1.
B, 3, 2 α-乙酰乳酸底物(2. 00 mL/L)见 A. 3, 2.
B.3.3萘酚(10.0g/L)/肌酸(1.0 g/L.)显色剂见 A. 3. 3。
B.4仪器
全白动生化分析仪：要求带有进样系统、搅拌系统、温度控制系统（30：+0.2）和检测系统。B.4.1
检测系统要求可在510nrml波长处,用动力学法检测吸光度变化,时间间隔最少185。如:Konclab 30 或同等分析效果的仪器。B.4.2分析天半：精度为0.0C01g。B.4.3度计:精度为 0. 01pH单位。B.5分析步骤
标准曲线的制备
称取一定量的α乙酰乳酸脱双酶标准品，精确到C.0005多，用缓冲液（B.3.1)溶解并定容至1C0mL，得到标准储备液。标准品称取的鼠要使标准储备液中α-乙酰乳酸脱羧酶的酶活力约为0. 75 U/ml..
然后，按照表B.1配制标准曲线
GB 207132006
标准点
标准储备液/
用缓冲被 B. 4. 1 做标准点 1 。标准储备液和标准曲线应每目配制。B,5.2标准对照品的制备
α-乙酰乳酸脱羧酶标准曲线
缓冲液(B.3.1)7
稀释倍数
稀释后活性/
(mU/mL)
α）取一定量的艺偶姻于试管中，在37亡的温箱中溶解。然后将试替置于冰水中使艺偶姻重结晶：
称取 0.197 g重结晶后的乙偶姻,精确到 0. 000 1 B.用缓冲波(B. 3. 1)溶解并定容至200 mL,得到标准对照品储备液。然后再用相同的缓冲液稀释20倍备用：二次稀释后的乙偶姻溶液的浓度相当于5n mL/mL，标准对照品储备液在4℃～8℃并且避光的条件下的保存期为一周。B.5.3样品落液的制备
从样品中称取一定最的试料，用缓冲窥（B.3.1)解稀释：稀释的倍数要使得最终稀释液的酶活力在27.5mU/ml.62.5mU/ml.范围内.B.5.4酶活力自动分析参考条件
B.5.4.1底物保温周期
温度：30℃
时间：4805:
底物(B. 3. 2):40 μ.,
水:20 μL。
B.5.4.2酶反应周期
温度：30℃：
时间：6505；
样品稀释液：40μI.;
水:20rL
B.5.4.3显色反应周期
温度:30℃;
时间：2405；
显色试剂(B.3.3);80 μ1.1
水15μL。
B.5.4.4测定周期
测定模式：动力学法：
波长：510nm
出线炎型:非线性;
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