本标准系首次发布的国家标准。本标准规定了牛甲状腺和牛肉中硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、正丙基硫脲嘧啶、它巴唑、巯基苯并咪唑残留量液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于牛甲状腺和牛肉中硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、正丙基硫脲嘧啶、它巴唑、巯基苯并咪唑残留量的测定。 GB/T 20742-2006 牛甲状腺和牛肉中硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、正丙基硫脲嘧啶、它巴唑、巯基苯并咪唑残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T20742-2006 标准下载解压密码：www.bzxz.net

1范圈
牛甲状腺和牛肉中硫豚嘧璇、甲基硫脲嘧啶、正丙基硫嘧啶、巴唑、巯基苯并咪唑残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
GB/T 20742—2006
本标灌规定了牛甲状腺和生肉中硫脲嘧啶（2-thiouracil)、甲基硫腺嘧啶（methyi thiouxaeil)、正丙基眠密啶（propyl thiaurae，它巴幽(tapazole）筑基紫并咪唑（2-nerrnptahenzimidazole）綫留登波相色谱-串联质谱测定方离。
本标推适用于牛双状膜和牛肉中硫赚密啶、甲黏硫藤嘛啶、正丙基硫腺腾啶、它巴唑、苑基苯并咪唑残留量的测定。
本标准方法的捡止限牛单
菲并咪唑均为2g
2规范性引扇录件此内容来自标准下载网
下列文件中的茶款通过本标
的修改单（不包据谢误的内容)或是否可使用这道
的最新版楼
GB/T 63
测望方游
(GB/T 6379. 102064.150 572
GI3/T6879.2刷方法号
性与再现性的基法（GB/T
分标实验室用
GB/T 66824
3原理
通成皮变标推的
是求注百期的用受件道
果的确度，正确度
微继确度（正确度与耀
006ISO 572
源嘧凝、蓝丙基流康嘧啶、它巴嘧、甄基ce
凡是注日期拍引阅文件，其随后所有数刷根群本标准遇成协议的各方研究新版本造用本标准。
第1部分总则与定义
第2部分确考标推测方法重复
1992,nenis0 7695:1987)
试样中戏留的硫乐噬逸甲基硫绿嘧啶、正肉塞硫嘧噬、它巴唑基并咪噬用乙酸乙酯提取，氨基固相苹取柱净化磨浓4--7-苯并呋咱衔坐化，再用固趣萃取检测。
试剂和材料
概净化，液相色谱-串联质谱
除男有说明外，所用试剂均为优级纯水为GB/倾定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。
4.2乙腈:色谱纯。
4.3乙酸乙色谱纯。
4.4磷酸氢二钠，NaHPO·12HzO。4.5磷酸二氢钾,KH,PO.。
4.6艺鼓。
4.7浓盐酸。
4.8氢氧化钠。
GB/T 20742—2006
4.9 三甲烷。
4.10正包烧。
4.114-氛-7-苯并咱(4-chlora-7-nitrohenzn-2-furazanNRF-Ci)，C.H.CINO：含≥99%。4.12巯基乙醇：分析纯，
4.13乙二胺四乙酸二钠，CnNONa·220。4.14无水硫酸钠：使用前650℃购烧4h。4.15磷酸盐缓冲溶液：PH=8.0.2mol/T.称取67.7g磷酸然二钠（,4)和1.5g磷激二氢钾（4.5），用水溶，定容至10001mL，
4.1盐酸游液：0.2mol/L。整取17mL浓盐酸（4.7)，用水定容至1000)ml.。4.17愈氧化钠溶液：1mol/L：称攻40氢氧化钠（4.8).用水溶解，定容至1000mL。4.18衔衍生剂：5mg/ml。称取0.05g4-氯-7-茉并映（NBFC1)(4.11)溶于10mL串醇（4.1）、现用现配。
4.19乙二胺四乙酸二钠溶液：0.1mal/1。称37.2g乙二胺四乙酸二钠（4.13)溶于100cmL水十。4.20洗脱没：含3%z股的节醇和：额甲烧（15一85）混合游液。吸取3ml.之（4.6）于100ml.容量瓶中，用乎定容至刻度，混与，吸取该溶液15mL100mL容最瓶中用氛甲烧（4.9)容至剂度·混勾。
4.21定容波：含0.3%乙酸的z脂水溶液。吸取0.3ml.乙骏和15ml.乙腊（4.2)于100mL容量瓶巾,用水定容刻度,混勾。
4.22标准物质：疏赚嘧啶（2-thiouraeil.TU）、中基雍赚密啶（Methylthiouraci，MiTU），正丙基毓脲确啶（propyllhiouraci，PTU)它巴唑（TapazoieTAP）蒸苯井咪哮（2-mercaptoberzirridazole.MBI）纯度996
4.23内标标雅物质：H据疏据装评账（2-methoxethoxmercaptobenziniciazole，MEMB1），纯度299%.
4.24标准储备溶液：1.0mg/ml。称取透量的硫源磨啶、甲基疏腺嘧啶，正两基疏感喀啶，它巴唑，疏并咪唑标准物质（4,2）分别用甲醇配威1.0mg/tuL的标准踏备液，避光一18℃保存，可使用6个写。
4.25混合标准工作游液:0. 1 μg/mL。吸取孵种适量标准储衡溶羧(4.21),用用醇稀释成0.1 ug/mL的握合标准工作游液、避光一18℃保存，可使用3个月。4.26内标标推客溶液：1.0mg/mL。称适最的用湛筑基苯非咪唑标推物质（4.23)，用中醇配成1.0 mg/ml.的标谁储备液，避光一1名亡保存,可使6个月。4.27内标标准工作溶液：0.1μg/mL。吸取内标标准储备溶被（4.26)，用甲醇稀释成0.1μg/mL的内标标涯工作溶液，避光一18℃保荐，可使用3个月。4.28Scp-ParkAminoPropyl回相萃取柱或相当者：500mg，3ml-。使用前用20ml.正已烷预处理保持柱体润，
4.29OaisHIr.B面相苯取柱或相当者：60mg,3mL，使用前分别用5mL甲醇和20mL水预处理保持往体滋润。
4. 300. 2 μm滤膜。
5饮器
5.1藏色谱-串联闷极杆质谱仪，配有电喷雾离子。5.2分析天乎：感量0.1mg和0.01g。5. 3液体混匀器。
5.4固相萃收装资。
5.5氮气吹干仪。
恒温振离水浴。
真空泵：真室度应达到80&Pa。
5.8微量注射器：25叫,100。
5.9棕色具暴离心管：25mL.50mL5.10pH计：测最精度0.02e单位。5.11点液器；50mL。
5.12离心机：转速大于4000r/min6试样的制裔与保存
6.1试样的制备
6.1.1牛印状源样品的制备
GB/T20742—-2006
取50多~-100名阴性牛甲状腺维织，加入3倍质量的于冰，用组织趣筛机绶游后，使干冰在室湿下蒸发，酱用。
6.1.2牛肌肉凯织用纽织游提绞碎，分出0.5kg作为试样备用，5.2试样保荐
制备好的试排于·18℃淡相中避光保存，7测定步骤
7.1混合基质标准校准溶液的制备7.1.1样品称取
称取5个阴性样品，每个样品为1g（精确到0.01g），将上述样品骨于50mL惊色离心管中（3.！）分别加人不同设混合标流.1作格波（4.25）使客被测组分的浓度均为3.0g/m、2.0r、3.Cg/mL10ng/mL、20ng.mi。再分别加入适器为标你流.作察液（4.27）.使共浓度均为2.0ng/ml-.
7.1.2提联和韧次净化
分别往上述离心替中加人10mLZ酸乙脂（4.3).3g元水硫酸销（4.14），20μL硫基之醇（4.12)30μ0.1mal/L乙二胺四乙二钩溶液（4.19），均质15.再用5mLZ酸乙酯洗涤均所器刀头，二合并，4000z/min离心5min.取上滑没并狂窥气吹干仪（5.5)上50℃水浴吹干。用2ml.艺精落解残余物，加人3mL正己烷（4.10）探荡1min，4000r/min离心5min，吸取并弃掉正已烷，再加3ml.正已烷重复一次。剃余溶液在氮气吹干仪上50℃水浴吹于。用（.5mL三氯甲烧漆辉残余物，边摇边在超声波水浴中停留几秒钟，加人3mL正已烷，祸旋混匀，倒人下接预处理好的Sep-PaikArrinoPrapyl固相举最柱(4.28)的贮没器（5.11)中，在固相萃取装置（5.4)上使样液以小于2mL/min的流速通过ScpParkAminoPropyl固相辈取柱：待样液全部通过周相举圾性后用10nL正已烷淋洗固相萃敢柱，奔去全部流出液。用5mL洗脱液（4.20）洗脱到251mL棕色离心管（5.9）中并在氮气吹T仪上50℃水浴吹下，
衍生化和再次净化
用5mL0.1Tol/LPH=8的磷酸盐缓冲溶液（4.15)溶解上述线留物，加入0.3ml.得生剂(4.18），竭旋混合1min，在50℃恒温派药水裕避光反应3h。衍生被放至室温，用0.2mol/L盐酸溶液（4.16)调节pFI值在3~~4之间，溶液倒入下接OasisHLB固相举取杜（1.29)的赋液器，在固相辈取装置上使样液以小于2mL/min的流速道过OasisHI.B柱.待样液全部通过固相举取柱后羽IomL水洗固相萃取柱，弃云全部流出液。用真空泵（5.7)在65kPa负法下抽干OasisHLB周相率取柱10min用5m1.乙酸乙醛洗脱被测物于25m1.棕色离心管中，在盘气吹仪上50℃水浴恢，残余物加GB/T 20742—2006
300μ无水乙醇浴解，再加700=1.定容液（4.21)定容，很匀后过0.2I1滤膜（4.30），供激相色谱-串联质谱测定，
7.2实测样品溶液的制备
称取待测样品1.g（精确到0.01g）于50m.棕色离心管中，加人内标1.作落液，使其含量与为2. 0 μg/kg。按 7. 1. 2和7.1. 3操作。7.3空白基质溶液的制备
称取阴样品1g（精确到0.01g)于50mL棕色离心管中，按7.1.2利7.1.3操作：7.4测定
7.4. 1、液相色谱紊件
色谱柱：Aiamtis Cis.3.5umeT50 mmX×2.1mm(肉栓)或相当者；柱瀛：45℃：
进样载:20 μ1,;
流动相及流速见表
液相色梯度洗脱紧件
时向/min
质谱条祥
离子源电喷雾离子源（）
打折方数离手持摄
检测方武康应监测（店
电喷等电1：4500
朝助气（A
速：7
辅助气温度厂
聚焦电压（F
碰控室出口电压G2V：
筑液八路
定性高子对、定量离子病、来集时间、簇电压及硼撞能量见表23%乙限乙溶液（%）
硫腺嘧啶、甲基镰脲嘧啶、正丙密硫脲谣髓、它巴唑基苯并咪唑的质谱梦数被测物及内标物名称
旋原嘧啶衔生物
甲基硫眠嘧啶衍生物
正内基硫腺密旋衍生物
292/229
292/216
306/243
306/230
334/271
334/258
宠熊离子
(rn/=)
292/229
305/243
334/371
梁巢时间
去慈电压
撞船坏
被测物及内标动名称
它巴唑生呦
整举并咪唑衍生物
甲筑基莱并喘唑衍生物（内标）7. 4.3液相色谱-串联质谱测定
7.4.3.1定性测定
庭性裔子对
278/202
278/232
334/238
314/268
344/268
3447281
表2（续）
定整肉子对
278/202
314/238
3-1-4/268
采黎时闻
GB/T20742—2006
去懿电压
避撞能界
每种被测组分选择1个母
2个以上子离子，在相同试验条件下品中待测物质和内标物的保留时间之比，也就是相罚误留明间，与之内：片样品包谱图中各组分定性离頭的定性离子的机对毕度整行比较，者测物。
表3定性箱
相对离子三度
死许的最大偏整
7. 4. 3. 2定置测定
内标法定望：用校糖软件中的内外标法定最：在教器最优工作条修校准溶液浓度为榄坐标缝制标准工悔值均应在仪器测定的范围内。
（MRM）他谱图季见图
7.5平行试验
五称甲
校维谐
错对离子车度的
混合基旋标雅校社
防准工作带绒列
按以上步骤，对同一诞择
迎标平行试验测定。
7.6回收率试验
让应的相对保留时间偷差在士2.5为质标催校准漆液包谱阁中对应
判定为样品更存在对应的荐
~～20
，以峰而积为纵垒标.泥仓菇质
定量，样品落液串待训物的响应御内标物衔生物的多皮应监测
收率的试验微热参儿表B.1。
吸取适混合标准工作溶搬瓶肉示标准作溶液，分别按7.1.精生、液结，得到相应浓度的混合月空百基质溶液(7.3)稀释綫所褶澄度的标准校准溶液：阴性样标准衍生溶液和内标标衔生溶液品中添加标准溶液，按7.2操作，测定唇计算样品添加的回收率。8结果计算
试样中被测组分残留量按式(1)计算：V
武中，
试样中被测组分残留量，单位为微克每干充（rg/kg），X
从标准工作线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/ml）)：V—-样品浴液瑕终定容体积，单位为范升（mJ.)：m·样品溶液所代表最终试样的质堡，单位为克（g）GB/T 20742—2006
9精密度
不标难拍精密度数爆是按照GB/T6379.1和CB/T6379.2的规定确定的，草复性和再坏能的值以95%的间信度装计算，
9. 1复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限了，被测物的含量范国及重复性方程见表4。
表4五种甲基硫氧嘧啶的含量范困及重复性和再现性方程设测名称
流漆嘴院行牛校
华基流原客啶衔生物
正内基腰嘧啶价生物
它碰行牛构
策基荣并株睡药生物
含望范围/
(μg,kg)
2 ~- 20
注：亦为账次划定结螺的算表平均性。重性限，
gr-6. 379 7lgm-0. 851 2
Igr -0. 832 0lgm—0. 857 2
lgr= 1. 105 3Igm -1. 071 5
F-0.182 7m-C.CO6 5
gr*-1. 059 nlgnt-0. 932 E
科限R
IgR=0.770 1gm.-0, 6505
lgR1.023m0.844 6
IgR1,034 $lgm0.890 3
lgR.0130lm0.7885
Ig=1.05391g.-..807 8
如果差使超过单复性眼.啦含弃试验结聚并重新完成两次单个试验的测定9.2再现性
在可现准件下，获得的两次独立测试结果的绝对值不超过再现性限很被测物的含盘范及现性方理见表
附录A
CB/T20742—2006
（资料性附录）
五种甲基硫氧嘧啶标准物质及内标物衍生物的多反应监测(MRIM)色谱图五种甲基硫嘧啶标准物质及内标物衔生物的多反应监测（MRM)色谱图，见图A.1。I. 5e4
slaKsue
seajsl
5 000
4 000
就原晓兰将
14151G1718
平益微原略院行生物
正两想瓶解噬随街生将
它巴唑尘物
张越浓井味咯衍生物
161718
甲茄流基苯并咪唑衔生
９011
161718
五种甲基硫氧嘧啶标准物质及内标物衍生物的多反应监测(MM)色谱图图 A. 1
GB/20742—2006
附录B
(资料性附录）
回收率
牛中状腺和牛肉中五种甲基硫氧嘧啶的添加浓度及其平均回收率的试验数，见表B.1。装B.1五种申整琉氧嘧啶的添加浓度及其平均回收率的试验数据添加水平和平均厨收率%)
被旗物名称
碗源遥啶护生构
甲基硫娱密啶荐生物
正两燃避源嘧啶后生物
它巴衍牛将
筑药苯并咪睡拓生物
2 pg/kg
牛甲状乐
GB/T 20742-2006
5μg/kg
牛甲状腺
10 nag/kg
非状膜
20 jg/kg
牛甲状樂
版权专有慢权必究
书号：1550661-28931
定价：
90022202
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