GB/T 20750-2006
基本信息
标准号： GB/T 20750-2006
中文名称：牛肌肉中氟胺烟酸残留量的测定 液相色谱-紫外检测法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
发布日期：2007-03-26
实施日期：2007-03-01
出版语种：简体中文
下载格式：.rar.pdf
下载大小：106194
标准分类号
标准ICS号：食品技术>>67.050食品试验和分析的一般方法
中标分类号：食品>>食品综合>>X04基础标准与通用方法
关联标准
出版信息
页数：12页
标准价格：14.0 元
计划单号：20051863-T-326
相关单位信息
首发日期：2006-12-31
起草单位：秦皇岛出入境检验检疫局、辽宁出入境检验检疫局
归口单位：中华人民共和国质量监督检验检疫总局
发布部门：国家标准化管理委员会
主管部门：国家标准化管理委员会
标准简介
本标准规定了牛肌肉中氟胺烟酸残留量的液相色谱-紫外检测法。本标准适用于牛肌肉中氟胺烟酸残留量的测定。 GB/T 20750-2006 牛肌肉中氟胺烟酸残留量的测定 液相色谱-紫外检测法 GB/T20750-2006 标准下载解压密码：www.bzxz.net
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标准内容
ICS 67. 050
中华人民共和国国家标准
GB/T 20750—2006
牛肌肉中氟胺烟酸残留量的测定液相色谱-紫外检测法
Determination of flunixin meglumine residuein bovine muscle tissue-
LC-UV method
2006-12-31发布
中华入民共利国国家质量监督检验检疫总局数码防伪
中国国家标准化管理委员会
2007-03-01实施
本标难的附录和附录B为资料性附求。本标准由中华人民共和国案阜岛出人境检验检疫局提出。本标推由中华人民共和国质量监肾检验检疫总局归口。GB/T20750—2006
本标准起草单位：中华人民共和国秦阜岛出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局
本标滩士要起草人：庞国芳、李军、米文斌、董振霖、李一尘、薪大方、于花。本标准系首次发布的国家标准。1范围
牛肌肉中氟腰胺烟酸残留量的测定液相色谱-紫外检测法
本标准规定了牛肌肉中氟胺烟竣残留单的液相色谱-紫外检测法，本标准适用于小肌肉中氣胺烟酸残留氧的测定本标准的方法检出限为：0.005 mg/kg.2规范性引用文件
GB/T 20750—2006
下列文件中的杀款通过不标滩的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修政单（不包括勘误的内穿)或惨订版均不适用丁本标准：然而：鼓励根据木标准达成协议的各方研究是否可使用这此文件的最新版本。凡足不注明几期的引用文件，其最新版本用于本标准。G3/T 6379. 1测定方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1 部分；总则与定义(GB/T 6379. [.-2004,1S0 5725 1,1994,I)T)GH/6379.2测定方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复非与再现性的基木方法（GI3/T6379.2—2002，1S0572321994，IDY1）GB3/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T66821992.11eqIS)3696：1987）3原理
样品中氟胺烟酸深用3葡萄糖苷酸酶降解,然后用乙睛摄取,浓缩·磷酸盐缓冲液溶解,SPF-(18净化和富集，利用适当的洗脱溶剂对固相萃取杜上富隽的组分进行选择性淋洗，通过高效液相色谱的紫外检测器进行分析测定，外标法定量。4试剂和材料
除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/1669现定的一级水，4.14酸，
4.2球艺酸.
4.33-葡简糖甘酸梅（3-glueuronidas)1：(00U/ml：例如：β葡葡糖我酸酶（600 00 1/g）.雅确称0.050 心 β-葡范糖计酸酶于与m].豉璃试管.加2 ml.的鳞酸盐PBS)缓冲萍液裕解,用0. 45 μ)尼龙懿膜过滤：用现配制
4.4葡微糖
4.5浓盐酸。
4. 6流动相 A:乙酸铵 0.0:mnl/T:pTE.C,准确称吸3, g 乙酸铵于1 009 mI.的烧杯中.加 90 mL水落解开用甲酸调整卒pH5. 0,转移至 1 0a0 mL 容量瓶中.使用前过 0. 15 μ[I 滤膜,4.7流动柜13.中尊.色谱纯，
4.8流动相:乙睛.色谱纯。
4. 9混合流动相:将40 m 流动相B,30 mI. 流动相以及3 nml流动相A 相混介-4. 10磷酸盐(PT3S)缓冲溶液:称取 0. 8 氯化钠,0. 02 氯化钾,0. 02 R磷酸二氢钾.0. 11: g磁酸氢二钠利 0,02 衡萄糖于250 mI. 烧怀中加药 95 mL 的水溶解,用 0. 1 mol 磷酸调整 p6. 0,转牟CB/T 20750—2006
109 mT.容量瓶f井稀释至刻度。4. 11 85磷。
4.12乙酸钟溶液：0.01mol/1.。称收1.95g乙酸钾于500ml.容鼠瓶中.加约450mL水溶解J稀释牟刻度
4. 13 氯化钾。
4. 14 磷酸二氢钾。
4.15磷酸二氢钾缓冲溶液：0.25mol/1.pH7.0。称取17.0lg磷酸二氢钾溶于400mL水中、定容到500 mL,然后用0.25 mnl/[.磷酸氢二钠调节 pH至7. 0(约500 ml.),定穿到 T.,4.16氯化钠，
4.17无水磷酸氢二钠。
4. 18 磷酸氧二钠溶液:0, 25 mnl/L。称 17. 75 g磷酸氢二钠溶于 400 mJ.水中,定容到 500 ml. 4.19乙酸正已烷溶液：乙酸—正已烷(10—130)4.20正口烷色谱纯。
4.21标准物质：氟胺烟酸，纯度99%。4.22标准储备液：0μg/ml.称收适量的氟胺烟酸标推物质,用甲醇配成50μg/rL的标准储备液。2-~4℃保存,效期为3个月下载标准就来标准下载网
注：称取标准物的质量是按纯度修正过的质量，4.23标准工作溶液：2μg/ml。吸取适最的冠胺烟酸的标准储备液（1.22),用甲醇配制成2ug/tmL的混合标准1作溶液.2℃~1℃保存，有效期为1个月，4,24标准基质溶液：根据氧胺烟壁的灵敏度和仪器线性范围，用空白样品提取液配制成不回浓度(μg/ml.)标准基质溶液。
5仪器
5.1波相色谱仪：配有紫外检测器。5.2 电了天乎:感量为 0. m1 g 和0. 000 1 g,5.3离心机：最大转速为10000r/min5.4离心管：50ml.聚内烯离心管。5.5均质机。
5.6振荡器。
5. 7 微量移液器:10 rI.~-:00 μL 和 1 000 μI,~-5 000 μI.5.8氟气浓缩仪，
5.9酸度计：测量精度为+0.02
5. 10样品过滤器;PTFF.0. 45 \m,5.11周相萃最杜：BondEiutCertifyⅡ，3mL，200rmg或相当者。5. 12真空固相获最装。
旋转蒸发仪，
6试样的制备与保存
6. 1 试样的制备
去抗牛肌闪中的母头和皮，将H搅拌均勾：分出.5k作为试样，将制备好的样密封，并贴上标签。
6.2试样的保存
将试样置了18℃条件下贮存。
7分析步骤
7.1提取
GB/T 20750—2006
称取2.C试样，于50ml.聚丙烯离心管中，加人乙酸钾溶液（1.12)5ml.,高速旋涡混合105.混台后向详品中加人 3 乙酸,调节样品BH 至4.5,旋满混台，市加人70 μl.新配制的3葡葡糖苷酸酶溶液（1.3）混合，于扳荡器37℃条件下低速振满16h，分别尚品中加人5ml.乙睛，施涡混合5.离心10 min3 200 r/nin）。转移上清液至59 mL离心管：在原液巾加l人5 ml.乙鹏和lml 乙酸钾溶液(4.12)旋涡混合，离心将上清波转移至品0 mL.离心管中，合并上清没,得净化：7.2净化
在混合的上清液巾加人5 ml.正已烷和50 μl.浓盐酸，旋涡混合 15 5.离心：i1i( 200 r/tmin)：弃奔云正己烷层，平复上述步骤次，55℃条件下氮吹使其体积小十5mL。加人磷酸二氢钾冲溶液（4.15)7mL,璇祸泥合,超市20 9,5℃:条件下离心15 min(3 20 T/min）。采用固相萃取柱（5.11）.用3 mL 甲醇和 3 mI,水活化性,将样品过,弃去过柱液,然后用 3 Iml 水和 6 mL 甲醇洗杆,弃L过性液：加大真牢度而滤10min.用2m.正己烷淋洗柱子两次并弃去淋洗微，用2m，2酸正已烧綫(4.19)洗提柱于两饮，用15mL离心钾收集洗脱液，在55℃条件下将洗脱液氮吹至干。随后，在每个品中加人混合流动相(4. 9)1 m[,旋涡混合5 s.超市 5 5。样液用9.5 μm 的滤膜过滤到逃样瓶中,待测。
7.3测定
7.3.1液相色谱测定条件
a）色谱柱,Inertsil.(ixs-3.250 imm×4.6 mm,5 μm,或相当者：流速：0.4mL,min
捡测波长：285mm;
柱温：35：
进样，20.
f）送得时间：20min：
g）延迟时间，l0 min。
7.3.2液相色谱测定
氮胺烟段的标准基质游液(4.24)分别进样,以峰面积和工作标准溶液浓度绘制标准工作山线,样品溶滚中氟胺烟酸的响应值应在仪器测定的线性范制内。在上述色谱条件下，氟胺烟酸保留时间约为13.0min,标准物质色谱图参见图A.1氟胺烟酸的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见表B.I.7.4平行试验
按照上述涉骤，对同一试样逊行平行试验7.5回收率试验
空白样品中添加标准溶液按7.1和7.2探作，测定后计算样品添加的回收率8结果计算
按式(1)计算就样中無腰烟酸的残留量：Vx1000
*×%×00
式中：
试样中被测组分残量，单位为率克每千克(nig/kg)：一从标准曲线！得到被测纠分榕淤的浓度，单位为微克每些升（产/mL）V-样品溶液定容/体积.单位为毫升（ml.)：3
GB/T20750-2006
附样品液所代表试样的质量，单位为克（）。注：计算结果需将容白值拟除。9精密度
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GE/T6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的值以05%的可信度来计算，
9.1重复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对考值不超过重复性限r，牛肌肉中氣胺烟酸含量范围及再复性:限方程为:0,01 mg/kg～0. 20 rg/kg 和 lgr=0. 836 1lgrrt0. 850 9。如果差值超过重复性厂，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2再现性
在线性条件下，状得的两次独立测试结果的绝对差值不随过再现性限R.牛肌肉中氟胺烟酸含量范围及再现性方程为:0,01 m/kg~~0.20 1ng/kg和 R-0.198 7十0.004 64
氧胺烟酸色谱图，图A.1。
附录A
【资料性附】
标准物质色谱图
鼠胺烟酸
图A.1氧胺烟酸色谱图
附录B
(资料性附录）
回收率
氟胺烟酸添如浓度及具平均川收率的试验数据.见衣H.11/min
表 B、1氟胺烟醛添加浓度及其平均回收率的试验数据曾药名称
胺烟酸
添加浓度tug/kg)
CB/I20750—2006
平均回收率）
GB/T20750-2006
中华人民共和国
国家标准
牛肌肉中氯胺烟酸残留量的测定液相色谱-紫外检测法
GH/T 20750--2000
中国标准出版社出版发行
北京复兴门外二里河北街16号
邮收编码，100045
网址spc.net.cn
电话：6852394668517518
中国标准出版社案皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
开本880×12301/16印张0.75字数10千字2007年:3月第--版
2007年3月第一次印刷
书号：155056·1-28966定价14.00元由本社发行中心调换
如有印装差错
版权专有侵权必究
举报电话：（010）68533533
9002000
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中华人民共和国国家标准
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牛肌肉中氟胺烟酸残留量的测定液相色谱-紫外检测法
Determination of flunixin meglumine residuein bovine muscle tissue-
LC-UV method
2006-12-31发布
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本标难的附录和附录B为资料性附求。本标准由中华人民共和国案阜岛出人境检验检疫局提出。本标推由中华人民共和国质量监肾检验检疫总局归口。GB/T20750—2006
本标准起草单位：中华人民共和国秦阜岛出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局
本标滩士要起草人：庞国芳、李军、米文斌、董振霖、李一尘、薪大方、于花。本标准系首次发布的国家标准。1范围
牛肌肉中氟腰胺烟酸残留量的测定液相色谱-紫外检测法
本标准规定了牛肌肉中氟胺烟竣残留单的液相色谱-紫外检测法，本标准适用于小肌肉中氣胺烟酸残留氧的测定本标准的方法检出限为：0.005 mg/kg.2规范性引用文件
GB/T 20750—2006
下列文件中的杀款通过不标滩的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修政单（不包括勘误的内穿)或惨订版均不适用丁本标准：然而：鼓励根据木标准达成协议的各方研究是否可使用这此文件的最新版本。凡足不注明几期的引用文件，其最新版本用于本标准。G3/T 6379. 1测定方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1 部分；总则与定义(GB/T 6379. [.-2004,1S0 5725 1,1994,I)T)GH/6379.2测定方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复非与再现性的基木方法（GI3/T6379.2—2002，1S0572321994，IDY1）GB3/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T66821992.11eqIS)3696：1987）3原理
样品中氟胺烟酸深用3葡萄糖苷酸酶降解,然后用乙睛摄取,浓缩·磷酸盐缓冲液溶解,SPF-(18净化和富集，利用适当的洗脱溶剂对固相萃取杜上富隽的组分进行选择性淋洗，通过高效液相色谱的紫外检测器进行分析测定，外标法定量。4试剂和材料
除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/1669现定的一级水，4.14酸，
4.2球艺酸.
4.33-葡简糖甘酸梅（3-glueuronidas)1：(00U/ml：例如：β葡葡糖我酸酶（600 00 1/g）.雅确称0.050 心 β-葡范糖计酸酶于与m].豉璃试管.加2 ml.的鳞酸盐PBS)缓冲萍液裕解,用0. 45 μ)尼龙懿膜过滤：用现配制
4.4葡微糖
4.5浓盐酸。
4. 6流动相 A:乙酸铵 0.0:mnl/T:pTE.C,准确称吸3, g 乙酸铵于1 009 mI.的烧杯中.加 90 mL水落解开用甲酸调整卒pH5. 0,转移至 1 0a0 mL 容量瓶中.使用前过 0. 15 μ[I 滤膜,4.7流动柜13.中尊.色谱纯，
4.8流动相:乙睛.色谱纯。
4. 9混合流动相:将40 m 流动相B,30 mI. 流动相以及3 nml流动相A 相混介-4. 10磷酸盐(PT3S)缓冲溶液:称取 0. 8 氯化钠,0. 02 氯化钾,0. 02 R磷酸二氢钾.0. 11: g磁酸氢二钠利 0,02 衡萄糖于250 mI. 烧怀中加药 95 mL 的水溶解,用 0. 1 mol 磷酸调整 p6. 0,转牟CB/T 20750—2006
109 mT.容量瓶f井稀释至刻度。4. 11 85磷。
4.12乙酸钟溶液：0.01mol/1.。称收1.95g乙酸钾于500ml.容鼠瓶中.加约450mL水溶解J稀释牟刻度
4. 13 氯化钾。
4. 14 磷酸二氢钾。
4.15磷酸二氢钾缓冲溶液：0.25mol/1.pH7.0。称取17.0lg磷酸二氢钾溶于400mL水中、定容到500 mL,然后用0.25 mnl/[.磷酸氢二钠调节 pH至7. 0(约500 ml.),定穿到 T.,4.16氯化钠，
4.17无水磷酸氢二钠。
4. 18 磷酸氧二钠溶液:0, 25 mnl/L。称 17. 75 g磷酸氢二钠溶于 400 mJ.水中,定容到 500 ml. 4.19乙酸正已烷溶液：乙酸—正已烷(10—130)4.20正口烷色谱纯。
4.21标准物质：氟胺烟酸，纯度99%。4.22标准储备液：0μg/ml.称收适量的氟胺烟酸标推物质,用甲醇配成50μg/rL的标准储备液。2-~4℃保存,效期为3个月下载标准就来标准下载网
注：称取标准物的质量是按纯度修正过的质量，4.23标准工作溶液：2μg/ml。吸取适最的冠胺烟酸的标准储备液（1.22),用甲醇配制成2ug/tmL的混合标准1作溶液.2℃~1℃保存，有效期为1个月，4,24标准基质溶液：根据氧胺烟壁的灵敏度和仪器线性范围，用空白样品提取液配制成不回浓度(μg/ml.)标准基质溶液。
5仪器
5.1波相色谱仪：配有紫外检测器。5.2 电了天乎:感量为 0. m1 g 和0. 000 1 g,5.3离心机：最大转速为10000r/min5.4离心管：50ml.聚内烯离心管。5.5均质机。
5.6振荡器。
5. 7 微量移液器:10 rI.~-:00 μL 和 1 000 μI,~-5 000 μI.5.8氟气浓缩仪，
5.9酸度计：测量精度为+0.02
5. 10样品过滤器;PTFF.0. 45 \m,5.11周相萃最杜：BondEiutCertifyⅡ，3mL，200rmg或相当者。5. 12真空固相获最装。
旋转蒸发仪，
6试样的制备与保存
6. 1 试样的制备
去抗牛肌闪中的母头和皮，将H搅拌均勾：分出.5k作为试样，将制备好的样密封，并贴上标签。
6.2试样的保存
将试样置了18℃条件下贮存。
7分析步骤
7.1提取
GB/T 20750—2006
称取2.C试样，于50ml.聚丙烯离心管中，加人乙酸钾溶液（1.12)5ml.,高速旋涡混合105.混台后向详品中加人 3 乙酸,调节样品BH 至4.5,旋满混台，市加人70 μl.新配制的3葡葡糖苷酸酶溶液（1.3）混合，于扳荡器37℃条件下低速振满16h，分别尚品中加人5ml.乙睛，施涡混合5.离心10 min3 200 r/nin）。转移上清液至59 mL离心管：在原液巾加l人5 ml.乙鹏和lml 乙酸钾溶液(4.12)旋涡混合，离心将上清波转移至品0 mL.离心管中，合并上清没,得净化：7.2净化
在混合的上清液巾加人5 ml.正已烷和50 μl.浓盐酸，旋涡混合 15 5.离心：i1i( 200 r/tmin)：弃奔云正己烷层，平复上述步骤次，55℃条件下氮吹使其体积小十5mL。加人磷酸二氢钾冲溶液（4.15)7mL,璇祸泥合,超市20 9,5℃:条件下离心15 min(3 20 T/min）。采用固相萃取柱（5.11）.用3 mL 甲醇和 3 mI,水活化性,将样品过,弃去过柱液,然后用 3 Iml 水和 6 mL 甲醇洗杆,弃L过性液：加大真牢度而滤10min.用2m.正己烷淋洗柱子两次并弃去淋洗微，用2m，2酸正已烧綫(4.19)洗提柱于两饮，用15mL离心钾收集洗脱液，在55℃条件下将洗脱液氮吹至干。随后，在每个品中加人混合流动相(4. 9)1 m[,旋涡混合5 s.超市 5 5。样液用9.5 μm 的滤膜过滤到逃样瓶中,待测。
7.3测定
7.3.1液相色谱测定条件
a）色谱柱,Inertsil.(ixs-3.250 imm×4.6 mm,5 μm,或相当者：流速：0.4mL,min
捡测波长：285mm;
柱温：35：
进样，20.
f）送得时间：20min：
g）延迟时间，l0 min。
7.3.2液相色谱测定
氮胺烟段的标准基质游液(4.24)分别进样,以峰面积和工作标准溶液浓度绘制标准工作山线,样品溶滚中氟胺烟酸的响应值应在仪器测定的线性范制内。在上述色谱条件下，氟胺烟酸保留时间约为13.0min,标准物质色谱图参见图A.1氟胺烟酸的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见表B.I.7.4平行试验
按照上述涉骤，对同一试样逊行平行试验7.5回收率试验
空白样品中添加标准溶液按7.1和7.2探作，测定后计算样品添加的回收率8结果计算
按式(1)计算就样中無腰烟酸的残留量：Vx1000
*×%×00
式中：
试样中被测组分残量，单位为率克每千克(nig/kg)：一从标准曲线！得到被测纠分榕淤的浓度，单位为微克每些升（产/mL）V-样品溶液定容/体积.单位为毫升（ml.)：3
GB/T20750-2006
附样品液所代表试样的质量，单位为克（）。注：计算结果需将容白值拟除。9精密度
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GE/T6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的值以05%的可信度来计算，
9.1重复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对考值不超过重复性限r，牛肌肉中氣胺烟酸含量范围及再复性:限方程为:0,01 mg/kg～0. 20 rg/kg 和 lgr=0. 836 1lgrrt0. 850 9。如果差值超过重复性厂，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2再现性
在线性条件下，状得的两次独立测试结果的绝对差值不随过再现性限R.牛肌肉中氟胺烟酸含量范围及再现性方程为:0,01 m/kg~~0.20 1ng/kg和 R-0.198 7十0.004 64
氧胺烟酸色谱图，图A.1。
附录A
【资料性附】
标准物质色谱图
鼠胺烟酸
图A.1氧胺烟酸色谱图
附录B
(资料性附录）
回收率
氟胺烟酸添如浓度及具平均川收率的试验数据.见衣H.11/min
表 B、1氟胺烟醛添加浓度及其平均回收率的试验数据曾药名称
胺烟酸
添加浓度tug/kg)
CB/I20750—2006
平均回收率）
GB/T20750-2006
中华人民共和国
国家标准
牛肌肉中氯胺烟酸残留量的测定液相色谱-紫外检测法
GH/T 20750--2000
中国标准出版社出版发行
北京复兴门外二里河北街16号
邮收编码，100045
网址spc.net.cn
电话：6852394668517518
中国标准出版社案皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
开本880×12301/16印张0.75字数10千字2007年:3月第--版
2007年3月第一次印刷
书号：155056·1-28966定价14.00元由本社发行中心调换
如有印装差错
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9002000
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